Eksperiment 4 Effekt av Cistanche Deserticola Phenylethanol Glycoside på mus perimenopausalt syndrom Depresjon Modellmaterialer og metoder 1 Eksperimentelt materiale

1.1 Forsøksdyr

SPF-klassemus, Kunming-rase, hunner, 18~22g, levert av Shandong Lukang Pharmaceutical Co., Ltd., dette partiet med musesertifikatnummer: 0016003; laboratoriesertifikat nummer SYXK (Yu) 2010-001. 1.2 Eksperimentelle legemidler

Cistanche fenyletanolglykosidble fremstilt i henhold til metoden i eksperiment 1, og innholdet nådde 66,47%. Gengnian'an Capsule, ingredienser: Rehmannia glutinosa, Rehmannia glutinosa, Alisma, Ophiopogon japonicus, Scrophulariaceae, peonbark, Poria cocos, perlemor, curculigo, Schisandra chinensis, magnetitt, Polygonum multiflorum vinranke, polygonum multiflorum, floating Unflorum vine . Funksjoner og indikasjoner:Gi næring til yin og dempe yang, lindre problemerogroe sinnet. Brukes ved menopausale hetetokter og svette, svimmelhet, tinnitus, irritabilitet og søvnløshet. Spesifikasjoner: 0,3g per kapsel. Bruk og dosering: Oral, 3 kapsler om gangen, 3 ganger daglig. Produsent: Shanxi Tianxing Pharmaceutical Co., Ltd. Produksjonsbatchnummer: 121104. Godkjenningsnummer: National Drug Approval No. Z14021848.

HVOR LANG TAR DET FØR CISTANCHE FUNGERER?

Soyaisoflavoner og vitamin E myke kapsler, ingrediensliste: soyaisoflavonpulver, vitamin E, solsikkeolje, gelatin, glyserin, vann, tartrazin, titandioksid. Ikoniske ingredienser og innhold: Hver 100g inneholder 55,2 mg soyaisoflavoner (beregnet som genistein) og 608,5 mg vitamin E. Helsefunksjoner: Øk bentettheten. Instruksjoner og dosering: Ta 1 kapsel 2 ganger daglig med varmt vann. Spesifikasjoner: 500mg×100 kapsler. Produsent: Weihai Ziguang Biotechnology Development Co., Ltd. Produksjonsbatchnummer: 13070302. Godkjenningsnummer: Guoshijianzi G20080032. 1.3 Eksperimentelle reagenser

Natriumkarboksymetylcellulose, Tianjin Hengxing Chemical Reagent Manufacturing Co., Ltd., batchnummer: 20120418; penicillinnatrium for injeksjon, North China Pharmaceutical Co., Ltd., spesifikasjon: 4 millioner enheter, produksjonsbatchnummer: c1206807; formaldehydløsning (analytisk karakter), Yantai City Shuangshuang Chemical Co., Ltd., produksjonsbatchnummer: 20130902; 0,9 % natriumkloridinjeksjon, Chenxin Pharmaceutical Co., Ltd.; spesifikasjon: 250ml, produksjonsbatchnummer: 1301265303;

Klorhydrat, Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute, batchnummer 20120827; mus E2 ELISA-deteksjonssett, R&D Company, batchnummer: 20140101A; mus T ELISA-deteksjonssett, R&D Company, batchnummer: 20140101A; mus LH ELISA deteksjonssett, R&D Company, batchnummer: 20140101A; Mus FSH ELISA deteksjonssett, R&D Company, batchnummer: 20140101A;

Mus DA ELISA-deteksjonssett, R&D Company, batchnummer: 20140101A; Mus 5-HT ELISA-deteksjonssett, R&D Company, batchnummer: 20140101A. 1.4 Eksperimentelle instrumenter

Elektronisk vekt, Shanghai Minqiao Medical Instrument Co., Ltd., modell: JY601; elektronisk analytisk balanse, Ohaus (Shanghai) Company, modell: AR1140/C; høyhastighets stasjonær sentrifuge, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, modell: TGL-168 ; Elektrisk termostatisk vannbad, Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co, Ltd, modell: HWS12; Mus autonom aktivitetstester, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., modell: ZZ-6; Mouse dark avoidance meter, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., modell: BA-200; halefjæringstester, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., modell: TS-200; høyhastighets nedkjølt sentrifuge, Zhongjia Branch of HKUST Innovation Co., Ltd., modell: KDC-160HR; justerbar pipettering Instrument, Shanghai Leibo Analytical Instrument Co, Ltd;

Mikroplateleser, American BIO-RAD Company, modell: 680;

Elektrisk mikroskop, Japan OLYMPUS Company, modell: BX61.

2 Eksperimentelle metoder

2.1 Modellering og legemiddeladministrasjon

90 kvinnelige Kunming-mus med en kroppsvekt på 23-25g ble valgt, og 10 ble tilfeldig valgt ut som den tomme gruppen og gjennomgikk falsk kirurgi, og de resterende musene ble brukt til å lage perimenopausale modeller. Etter veiing ble musene bedøvet ved intraperitoneal injeksjon av 10% klorhydrat (0,03ml/10g) og abdominalposisjonen ble fikset. Deretter ble håret kuttet fra baksiden av musen under det siste ribben, ved skjæringspunktet mellom midtaksillærlinjen og ca. 1 cm fra utsiden av ryggraden, og deretter skåret inn etter desinfeksjon. Hud- og ryggmusklene er omtrent 0,5-1cm brede. En melkehvit skinnende fettmasse kan sees i snittfeltet, og eggstokken er innebygd i den. Bruk en liten pinsett til å ta forsiktig tak i fettmassen og trekke den ut av snittet, skille fettmassen, og du vil se en gruppe tynne, uregelmessige, gulrøde eggstokker. Når du skjærer, må du først ligere egglederne (inkludert fett) under eggstokkene med tynne tråder, og deretter fjerne eggstokkene. Etter operasjonen settes livmorhornene tilbake i bukhulen, musklene og huden sys sammen, og begge eggstokkene fjernes på samme måte. Etter operasjonen ble dyrene forsiktig oppdratt og penicillin 200,000 u/kg (0,1 ml hver) ble injisert intramuskulært for å forhindre infeksjon i 3 påfølgende dager, en gang daglig. 5 dager etter operasjonen ble det utført vaginal smear-undersøkelse på hver mus én etter én, én gang daglig i 5 påfølgende dager for å avgjøre om eggstokkene var fullstendig fjernet. Musene som viste østrosreaksjon i utstryket ble kastet, og 60 fullstendig kastrerte mus ble tilfeldig og jevnt delt inn i 6 grupper for eksperimentelle formål, nemlig modellgruppe, Mengnianan-gruppe, soyaisoflavongruppe, stor, middels ogLavdose Cistanche fenyletanol glykosidgruppe. Dyr i hver gruppe ble gitt tilsvarende medikamenter på den 10. dagen etter operasjonen. Etter 6 dagers administrering ble mus i den tomme gruppen oppdratt til 5 per bur, med vanlig mat og vann, uten noen stimulering. De 6 modellgruppene ble alle oppdratt med 1 mus per bur, og gitt forskjellige stimuleringer tilfeldig hver dag. Syv stressfaktorer ble brukt tilfeldig innen 18 dager: fuktig strø (1 g strø/1 ml vann); svømming i isvann (4 grader, 5 min); varmestress (45 grader, 5 min); belysning over natten (24 timer); haleklemming (1 min); vannmangel (24 timer); faste (24 timer). En stimulus ble gitt tilfeldig hver dag, og hver stimulus kunne ikke vises kontinuerlig i 18 dager.

Fremstillingsmetode: 0,5 % CMC Fremstillingsmetode: Vei 4 g karboksymetylcellulosenatrium og bland det med destillert vann for å lage 800 ml.

Doseringene av store, mellomstore og små doser av Cistanche fenyletanolglykosidgruppe var 200mg/kg, 10{{20}}mg/kg og 50mg/kg henholdsvis (administrasjonsvolum 0,1ml/10g). Tilberedningsmetode: Vei henholdsvis 2000 mg, 1000 mg og 500 mg Cistanche fenyletanoidglykosid, oppløs dem med en liten mengde 0,5 % CMC, juster deretter volumet til 100 ml, bland godt, og det er det. Gengniangan kapsler (675 mg/kg, blandet med destillert vann til 67,5 mg/ml, 0,1 ml/10 g, tilsvarende 15 ganger den kliniske dosen); Forberedelsesmetode: ta 9 Gengniangan-kapsler, bruk først en liten mengde 0,5 % CMC Dissolve, juster deretter volumet til 40 ml, og bland godt for å oppnå dosen av Gengnianan Capsule Suspension (675mg/kg). Soyabønne Isoflavon Vitamin E myk kapsel (250mg/kg, bruk destillert vann for å lage 25mg/ml, 0,1ml/10g, tilsvarende 15 ganger den kliniske dosen); Tilberedningsmetode: Ta 2 Soyabønne isoflavon Vitamin E myk kapsel, bruk den først. Løs opp en liten mengde 0,5 % CMC, juster deretter volumet til 40 ml, og bland godt for å oppnå dosen av soyaisoflavon vitamin E myk kapselsuspensjon (250 mg/kg) ). Oppbevaringsmetode: kjøl, hold varm under bruk.

Administrasjonsmetode: Dyr i hver gruppe fikk tilsvarende legemidler på den 10. dagen etter operasjonen. Gengnian'an-gruppen ble oralt administrert Gengnian'an kapselsuspensjon 675 mg·kg-1, soyaisoflavongruppen ble oralt administrert 250 mg·kg-1 soyaisoflavon vitamin E myk kapselsuspensjon, og stor, middels ogsmå doser Cistanchefenyletanol. Glykosidgruppen ble oralt administrert store, mellomstore og små doser Cistanche fenyletanolglykosid 200mg·kg-1, 10mg·kg-1, 50mg·kg{{ 5}}, henholdsvis 0,1 ml/10 g. Blindgruppen og modellgruppen ble gitt med samme volum av 0,5 % CMC-løsning én gang daglig i 30 påfølgende dager.

2.2 Observasjonselementer og deteksjonsmetoder

Tvunget svømming: Den første dagen etter slutten av kronisk stressstimulering ble immobilitetstiden til mus i hver gruppe innen 6 minutter målt i 2-6 minutter. (Plasser musene i hver gruppe i et 2000mL begerglass. Vanntemperaturen er 25 grader. I tillegg til den nødvendige minimumsbevegelsen som kreves for å opprettholde flyten, slutter dyrenes lemmer å bevege seg og registreres som immobile. Registrer den totale immobilitetstiden fra 2. til 6 minutter innen 6 minutter ) Frivillig aktivitetstest: På den andre dagen etter slutten av kronisk stressstimulering ble antallet spontane aktiviteter til mus i hver gruppe innen 5 minutter målt.

Mørkeunngåelsesmetode: På den 3. dagen etter slutten av kronisk stressstimulering, legg musens hale inn i måleboksen vendt mot den lille åpningen inn til mørkerommet, og gjennomfør trening. Etter 24 timer, mål på nytt latensen til musen som kommer inn i mørkerommet for første gang og tiden det tar å komme inn i mørkerommet innen 5 minutter. Antall elektriske støt.

Haleopphengstest: På den 5. dagen etter slutten av kronisk stressstimulering ble immobilitetstiden til mus i hver gruppe innen 6 minutter målt i 2-6 minutter.

2 timer etter siste dose (12 timer uten mat eller vann) ble musene veid, øyeeplene ble fjernet, blod ble samlet, serumet ble separert, og innholdet av E2, T, LH og FSH i serumet ble målt; musene ble deretter drept ved dislokasjon av halsvirvlene, og musene ble dissekert. , fjern tymus, milt og livmorvev, vei deres våte vekt og beregn organindeksen (organindeks=organ våtvekt mg/musvekt g), fjern deretter hjernen, kutt av halvparten og klargjør hjernen vevshomogenat. Enzymimmunoassay ble brukt for å bestemme innholdet av monoaminnevrotransmittere 5-HT og DA i hjernevevshomogenat. Tymus, milt, livmor og hjernevev ble fiksert i 10 % formaldehydløsning, innebygd i parafin, snittet og farget med HE. De morfologiske endringene til hver gruppe ble observert under et lysmikroskop. 2.3 Settbestemmelsesmetode

Skaff serumprøver: Bruk reagensglass som er fri for pyrogener og endotoksiner. Unngå cellestimulering under operasjonen. Etter å ha samlet blodet, sentrifuger det ved 3000 rpm i 10 minutter for raskt og forsiktig å skille serum og røde blodceller. Skaff vevshomogeniserte prøver: Tilsett en passende mengde fysiologisk saltvann til vevet og mos det. Sentrifuger ved 3000 rpm i 10 minutter og ta supernatanten.

Bestemmelsesmetoden for mus (mus) østradiol (E2) ELISA-settet er den samme som eksperiment 2. Konsentrasjonene av standardprodukter (S0-55) er: 0, 4, 8, 16, 32 og 64 pmol/L.

Bestemmelsesmetoden for musetestosteron (T) ELISA-sett er den samme som for østradiol (E2). Konsentrasjonene av standardprodukter (S0-55) er: 0, 50, 100, 200, 400, 800pg/mL.

Bestemmelsesmetoden for musefollikkelstimulerende hormon (FSH) ELISA-sett er den samme som for østradiol (E2). Konsentrasjonene av standardprodukter (S0-55) er: 0, 5, 10, 20, 40 og 8{{30} }mIU/ml. Bestemmelsesmetoden for mus (mus) luteiniserende hormon (LH) ELISA-sett er den samme som for østradiol (E2). Konsentrasjonene til standarden (S0-55) er: 0, 0,5, 1, 2, 4 og 8 mIU/ml. Bestemmelsesmetoden for muse-5-hydroksytryptamin (5-HT) ELISA-sett er den samme som for østradiol (E2). Konsentrasjonene av standardprodukter (S0-55) er: 0, 15, 30, 60, 120, 240ng/ml. Bestemmelsesmetoden for mus (mus) dopamin (DA) ELISA-deteksjonssett er den samme som for østradiol (E2). Konsentrasjonene av standardprodukter (S0-55) er: 0, 7,5, 15, 30, 60 og 120 pg/ml.

Det kan sees fra tabell 21 og figur 25 at sammenlignet med den blanke gruppen, økte immobilitetstiden til musene i modellgruppen betydelig i forsøkene med tvungen svømming og haleoppheng (P<0.01), indicating that perimenopausal model mice with depression Increased levels of despair about adverse circumstances. Compared with the model group, the forced swimming immobility time and tail suspension immobility time of mice in each drug group were significantly reduced (P<0.01).

2 Effekter på autonome aktiviteter hos perimenopausale depresjonsmodellmus

Resultatene av den autonome aktivitetstesten av mus i hver forsøksgruppe er vist i tabell 22 og figur 26.

Det kan ses fra tabell 23 og figur 27 og 28 at sammenlignet med den blanke gruppen, ble latensperioden til musene i modellgruppen betydelig redusert og antallet elektriske støt ble betydelig økt (P<0.01), reflecting the decline in memory of the perimenopausal depression model mice. . Compared with the model group, the number of electric shocks received by mice in each administration group was significantly reduced (P<0.01), and the latency of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Mengnianan group, and soybean isoflavones group was significantly reduced (P<0.01). extension (P<0.01). The latent period of mice in the medium and small doses of Cistanche phenylethanoid glycoside group was significantly prolonged (P<0.05).

4 Effekter på organindeks hos perimenopausale depresjonsmodellmus

Det kan sees fra tabell 24 og figur 29 at sammenlignet med den blanke gruppen var thymusindeksen, miltindeksen og livmorindeksen til modellgruppen signifikant redusert (P<0.01), indicating that the perimenopausal depression mouse model had thymus, spleen, and uterus index. Shrinkage of the organization. Compared with the model group, the thymus index, spleen index, and uterine index of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Gengnianan group, and soybean isoflavone group could be significantly increased (P<0.01). The medium-dose Cistanche fenyletanolglykosidgruppe Thymusindeksen og livmorindeksen til mus kan økes betydelig (P<0.01), and the spleen index can be significantly increased (P<0.05).