Glochidion Littorale-bladekstrakt viser nevroprotektive effekter ved Caenorhabditis Elegans via DAF-16-aktivering

For mer informasjon kontakt e-posttina.xiang@wecistanche.com 
Abstrakt:En rekke planter brukt i folkemedisin i Thailand og Øst-Asia tiltrekker seg interesse på grunn av den høye bioaktiviteten til ekstraktene deres. Målet med denne studien var å screene de spiselige bladekstraktene fra 20 planter funnet i Thailand og undersøke de potensielle nevrobeskyttende effektene av den mest bioaktive prøven. Det totale innholdet av fenol og flavonoid og 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazylradikal-fjernende aktivitet ble bestemt for alle 20 bladekstraktene. Basert på disse analysene ble Glochidionlittorale bladekstrakt (GLE), som viste en høy verdi i alle testede parametere, brukt i ytterligere eksperimenter for å evaluere effekten på nevrodegenerasjon iCaenorhabditis elegans. GLE-behandling forbedret H2O2-indusert oksidativt stress ved å dempe akkumuleringen av reaktive oksygenarter og beskytte ormene mot 1-metyl-4-fenylpyridinium-indusert nevrodegenerasjon. De nevrobeskyttende effektene som er observert kan være assosiert med aktiveringen av transkripsjonsfaktoren DAF-16. Karakteriseringen av dette ekstraktet av LC-MS identifiserte flere fenoliske forbindelser, inkludert myricetin, kumestrin, klorogensyre og hesperidin, som kan spille en nøkkelrolle inevrobeskyttelse. Denne studien rapporterer den nye nevrobeskyttende aktiviteten til GLE, som kan brukes til å utvikle behandlinger for nevrodegenerative sykdommer som Parkinsons syndrom.

Nøkkelord: Caenorhabditis elegans; blad ekstrakt;nevrobeskyttelse; antioksidant aktivitet; DAF-16

1. Introduksjon 

Nevrodegenerative lidelser inkludert Alzheimers sykdom og Parkinsons sykdom (PD) utgjør store helsemessige og økonomiske bekymringer for globale helseorganisasjoner [1]. Selv om menneskelig levetid har økt de siste tiårene i industrialiserte land, har også forekomsten av aldersrelaterte sykdommer økt. Forekomsten av sent debuterende lidelser som nevrologiske forstyrrelser forventes å øke raskt i løpet av de neste tiårene. Derfor er det avgjørende å oppmuntre til studier og utføre kliniske studier på forbindelser som kan ha potensial til å kurere, forhindre eller i det minste forsinke utbruddet av nevrodegenerative sykdommer [2]. Et av de karakteristiske trekk ved PD er det progressive tapet av dopaminerge (DA) nevroner i substantia nigra [3]. I PD-patogenesen spiller økt produksjon av reaktive oksygenarter (ROS) en nøkkelrolle i tapet av DA-celler [4]. Derfor anses reduksjonen i oksidativt stress som en lovende terapeutisk tilnærming i PD-behandling [5]. 1-methyl-4-phenylpyridinium (MPP pluss), som hemmer mitokondriell kompleks I-aktivitet, kan indusere PD-lignende symptomer hos mennesker og dyremodeller [6].

Bruken avCaenorhabditis eleganssom en in vivo-modell gir visse fordeler i studiet av PD [7]. Nematoden er enkel, billig og har en kort livssyklus. Den støtter studier som involverer store analyser. Dessuten har nevronnettverket til C. elegans blitt kartlagt fullstendig. Den inneholder 8 DA-nevroner og PD-relaterte homologe gener [8]. Nevrodegenerasjon, som etterligner parkinsonsymptomer, kan induseres hos C. elegans via behandling med nevrotoksiner som MPP pluss [9].
Naturlige antioksidantforbindelser representerer attraktive kilder for utvikling av medisiner for å behandle nevrodegenerative sykdommer på grunn av deres nevrobeskyttende effekter i dyremodeller og lav toksisitet [3]. Polyfenoler er kjent for å være blant de mest tallrike antioksidantene i det menneskelige kostholdet [10]. Det er også fastslått at oksidative prosesser er involvert i mange patologier, inkludert nevrodegenerasjon, kreft, diabetes, kardiovaskulære og antiinflammatoriske sykdommer. Derfor kan det å finne polyfenoler som viser antioksidantegenskaper fra naturlige kilder bidra til å forebygge eller behandle disse patologiene. Denne studien fokuserte på ekstrakter fra de spiselige bladene til planter funnet i Thailand. De fleste varianter dyrket mye i Nord- og Sør-Thailand har blitt brukt som folkemedisin mot generelle skader og sykdommer; Det er imidlertid få rapporter om deres nevrobeskyttende effekter.
I denne studien screenet vi først ekstraktene av spiselige blader fra 20 planter dyrket i Thailand og vurderte deres fenol- og flflavonoidinnhold og deres 2,2-difenyl-1- pikrylhydrazyl (DPPH) radikalfjernende aktivitet. Effektene av Glochidion littorale bladekstrakt (GLE), som viste høy verdi i alle testede parametere, ble evaluert på C. elegans med nevrodegenerasjon. Videre ble de potensielle veiene involvert i den nevrobeskyttende effekten av GLE undersøkt, sammen med identifiseringen av hovedkomponentene i GLE.
Siden transkripsjonsfaktoren DAF-16 er kjent for å spille en nøkkelrolle i å regulere oksidativt stress [11], ble det antatt at GLE kan målrette mot DAF-16. C. elegans-stammen CF1038, som er en DAF-16 mutantstamme med tap av funksjon, ble brukt til å bestemme overlevelsesraten for ormer behandlet med og uten GLE. I H2O2-indusert oksidativt stress, økte ikke GLE-behandling overlevelsesraten for transgene ormer (figur 1C).

2. Resultater

2.1. Screening av blader av thailandske planter

Råekstrakter av spiselige blader fra planter dyrket i Thailand ble fremstilt ved ultralydbehandling. Bladekstraktene fra 20 planter ble screenet for deres fenol- og flavonoidinnhold og antioksidantaktivitet ved hjelp av DPPH-radikalfjernende analyse. Få av de testede prøvene, som Glochidion sphaerogynum og Mentha piperita, ble funnet å ha høy radikalfjernende aktivitet med lavt innhold av fenoler og flflavonoider, mens visse prøver, som Clinacanthus nutans og Ocimum × citriodorum, viste motsatt trend (tabell 1) ). Bladekstraktet av G. littorale viste høy DPPH radikal-fjernende aktivitet samt høyt innhold av fenoler og flflavonoider. Derfor ble bioaktivitetene assosiert med G. littorale undersøkt videre.

2.2. GLE forbedret motstand mot oksidativt stress via DAF-16 i C. Elegans

Effekten av GLE på overlevelsen av N2-ormer under oksidativt stress ble undersøkt. Behandling med H2O2 (5 mM) induserte 75 prosent død i kontrollgruppen, mens samtidig behandling med 50 µg/ml og høyere konsentrasjoner av GLE var assosiert med høy overlevelsesrate (Figur 1A). Blant de testede konsentrasjonene av GLE var 100 µg/ml og 200 µg/ml assosiert med de høyeste overlevelsesratene (henholdsvis 82,0 prosent og 88,2 prosent). Derfor ble disse to konsentrasjonene brukt i påfølgende eksperimenter. For å evaluere antioksidanteffekten av GLE in vivo, ble de intracellulære ROS-nivåene målt i villtype-nematoder ved bruk av 2',7'-diklordihydroflfluoresceindiacetat (H2DCF-DA), en velkjent fluorescensprobe for å påvise intracellulær ROS-produksjon. Betydelige reduksjoner i fluorescensintensitetene i de GLE-behandlede gruppene ble observert sammenlignet med den i den ubehandlede gruppen (figur 1B), noe som bekrefter antioksidantegenskapen til GLE.

2.3. GLE-behandling reduserte dødeligheten til MPP pluss -indusert DA-nevrotoksisitet via DAF-16 i C. Elegans C. elegans har 8 DA-nevroner [8]. Selektiv degenerasjon av disse DA-nevronene ble evaluert etter eksponering for MPP pluss. Behandlingen av villtype N2-ormer med 0.75 mM MPP pluss resulterte i en bemerkelsesverdig reduksjon i overlevelse (figur 2). Samtidig behandling med GLE økte imidlertid ormenes overlevelse betydelig. Effekten av GLE-behandling på daf-16 mutante ormer ble undersøkt. Som vist i figur 3 og tabell 2, økte ikke GLE-behandling overlevelsen av disse ormene etter eksponering for MPP pluss sammenlignet med kontrollgruppen. Disse resultatene tyder på at DAF-16 kan være nødvendig for å mediere den nevrobeskyttende effekten av GLE i C. elegans. Deretter ble en DAF-2 mutantstamme med tap av funksjon, CB1370, brukt for å bestemme om DAF-2 var involvert i de observerte nevrobeskyttende effektene. Som vist i figur 4 og tabell 3, økte median og maksimal overlevelse signifikant i daf-2 mutante ormer behandlet med GLE.

2.4. Effekter av GLE på DAF-16-lokalisering

Det har blitt demonstrert at DAF-16-aktivering reguleres av dens kjernefysiske akkumulering [12]. Deretter undersøkte vi om GLE kunne indusere kjernefysisk akkumulering av DAF-16 i en transgen stamme TJ356 som uttrykker et DAF-16::GFP-fusjonsprotein. Resultatene viste at etter 48 timers inkubering med 100 µg/mL GLE, økte den grønne fluorescensintensiteten til DAF-16 i kjernen betydelig sammenlignet med den i den ubehandlede gruppen (figur 5).

2.5. Fytokjemisk karakterisering i GLE

LC-MS ble utført for profilering av fytokjemikaliene i GLE, og resultatene er presentert i figur6. De kromatografiske toppene ble identifisert ved å sammenligne MS-dataene med databaser basert på søk etter m/z-verdier av molekylære iontopper i positiv modus [M pluss H]i tillegg til. Følgelig ble myricetin, kumestrin, klorogensyre og hesperidin påvist som hovedforbindelsene (tabell4).

3. Diskusjon

Planteekstrakter er en rik kilde til naturlige bioaktive forbindelser. Mange studier har evaluert planteekstrakter brukt i Sørøst-asiatiske land, inkludert Thailand, hvor disse ekstraktene er komponenter av folkemedisin [13,14]. I denne studien ble ekstraktene av 20 spiselige planteblader fra Thailand screenet, og G. littorale ble valgt for videre undersøkelse fordi den viste høyt fenolinnhold, flflavonoidinnhold og radikalfjernende aktivitet. Flere studier har undersøkt ulike arter av slekten Glochidion [15–19]; Det er imidlertid få studier angående funksjonelle egenskaper og bestanddeler av G. littorale. Dataene våre viste at GLE beskyttet C. elegans mot H2O2-indusert oksidativt stress ved å redusere intracellulær ROS-akkumulering. Dette kan ha vært på grunn av det høye innholdet av fenoliske forbindelser som flavonoider, som er kjent for å ha sterk antioksidantaktivitet [20]. Disse funnene ligner de oppnådd av Duangjan et al. (2019), som viste at G. zeylanicum bladekstrakter kan beskytte C. elegans mot oksidativt stress [21]. Den insulin/insulinlignende signalveien (IIS) regulerer vekst, stressrespons og lang levetid hos C. elegans [22,23]. Vi fant at daf-16 null-mutant C. elegans behandlet med GLE var mottakelig for oksidativt stress. Dette resultatet antyder at antioksidanteffekten av GLE for å redusere oksidativt stress i nematoder muligens er involvert i ikke bare radikalfjernende aktivitet, men også reguleringen av DAF-16-transkripsjonsfaktoren.

De beskyttende effektene av GLE mot MPP pluss-indusert toksisitet i C. elegans ble undersøkt. DA-nevroner i nematoder tar opp MPP pluss hovedsakelig via DA-transportører med høy affinitet, som på samme måte observeres hos pattedyr. Akkumuleringen av MPP pluss inne i nevronene inaktiverer mitokondriekomplekset I i respirasjonskjeden og induserer celledød [24–27]. GLE-behandling ble funnet å signifikant redusere dødeligheten assosiert med MPP pluss-behandling hos villtype-ormer. IIS-veien moduleres av insulinlignende peptider gjennom DAF-2-reseptoren i C. elegans [28]. Under normale forhold hemmer IIS-banen fosforyleringen av DAF-16 og forhindrer dens nukleære translokasjon. I daf-2 null-mutanter overlevde den GLE-behandlede gruppen lenger enn kontrollgruppen. Derimot ble det ikke observert noen forskjell i overlevelse mellom kontrollgruppen og den GLE-behandlede gruppen som inneholdt daf-16 null-mutante ormer. Det er kjent at nedregulert DAF-2-signalering letter inngangen til DAF-16 i kjernen, hvor det kan oppregulere ekspresjonen av målgener og kontrollere stressresistens og lang levetid [29]. Dette kan forklare hvorfor daf-2-mutante ormer behandlet med GLE viste en relativt høyere overlevelse. Videre ble en økt kjernefysisk akkumulering av DAF-16 i ormer behandlet med GLE observert ved bruk av transgen TJ356 DAF-16::GFPC. elegans. Kumulativt indikerte disse resultatene at GLE kan ha vist sine nevrobeskyttende effekter via aktivering av DAF-16.

4.3. Totalt fenolinnhold Folin-Ciocalteu-metoden ble brukt for å bestemme det totale fenolinnholdet. Kort fortalt ble 11,4 µL av ekstraktet (1 mg/ml) blandet med 227,3 µL av 2 prosent (w/v) Na2CO3-løsning, og deretter fikk blandingen stå ved romtemperatur i 2 minutter. Etter tilsetning av 11,4 µL 10 prosent (v/v) Folin-Ciocalteu-reagens. Inkubasjonen i mørke ble utført i 30 minutter. Deretter ble absorbansen målt ved 750 nm ved bruk av en mikroplateleser (Nivo 3F Multimode Plate Reader, PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Gallussyre ble brukt som standard for kalibreringskurven. Det totale fenolinnholdet ble uttrykt som gallussyreekvivalenter (mg gallussyreekvivalent/g planteekstrakt).

4.4. Totalt flavonoidinnhold Den kolorimetriske metoden for aluminiumklorid ble brukt for å måle det totale flavonoidinnholdet. Kort fortalt ble 25 µL av ekstraktet (2 mg/ml) blandet med 7,5 µL 5 prosent (w/v) NaNO2-løsning og 152,5 µL destillert vann. Etter 6 minutter ble 15 µL av 10 prosent (vekt/volum) AlCl3-løsning tilsatt og fikk stå i 5 minutter. Deretter ble 50 ul av 1 M NaOH-løsning tilsatt til blandingen. Deretter ble blandingen inkubert i mørket i 15 minutter, og absorbansen ble målt ved 510 nm ved bruk av en mikroplateleser. Det totale flavonoidinnholdet ble beregnet ved å generere en kalibreringskurve ved å bruke quercetin som standard og resultatene ble uttrykt som quercetinekvivalent (mg quercetinekvivalent/g planteekstrakt).4.5. Frie radikaler-fjernende aktivitet Kapasiteten til å rense frie radikaler ble vurdert ved bruk av DPPH-analyser [32]. Kort fortalt ble 100 µL av ekstraktet (1 mg/ml) blandet med 100 µL DPPH-løsning. Etter 30 minutter ble absorbansen målt ved 517 nm ved bruk av en mikroplateleser. Resultatene ble uttrykt som en prosentandel av inhibering av DPPH-radikaler.

4.10. Nukleær lokalisering av DAF-16Transgen C. elegans TJ356, som uttrykker et DAF-16-GFP-fusjonsprotein, ble brukt til å undersøke den intracellulære distribusjonen av DAF-16. L1-stadiumnematoder ble behandlet med GLE i 48 timer ved 2{{30}} ◦C. Ormene ble deretter overført til en 2 prosent agarosepute på et glassglass og bedøvet ved å tilsette en dråpe (ca. 20 µL) 25 µM natriumazid til agaroseputen. Uttrykket av GFP ble undersøkt via fluorescensmikroskopi (EVOSflfl; Advanced Microscopy Group, Bothell, WA, USA). Den gjennomsnittlige fluorescensintensiteten til DAF-16 i kjernene ble analysert ved hjelp av Image J-programvare (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). 4.11. Fytokjemisk profilering ved bruk av LC-MS Bladekstraktet ble analysert ved bruk av LCMS-8040 (Shimadzu). Massespektre ble innhentet over et område på m/z 50–1000 ved bruk av Q3-skannemodus. Løsningen ble injisert på en Inertsil ODS-3 (250 × 2,1 mm, 5 µm, GL Sciences, Tokyo Japan) ved en kolonnetemperatur ved 40 ◦C ved bruk av en gradient på (A) 0,1 prosent maursyre og (B) ) acetonitril/vann (80/20) inneholdende 0,1 prosent maursyre. Følgende gradient med en strømningshastighet på 0,2 mL/min ble brukt: 0–100 prosent B (0–45 min), 100 prosent B (45–50 min) og 0 prosent B (50–60 min). Forbindelser ble antatt identifisert ved å matche de eksperimentelle m/z-verdiene til biblioteket av teoretiske beregnede m/z-verdier i databaser, inkludert Human Metabolome Database og METLIN-databasen. 4.12. Statistisk analyse Data ble uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik for hver gruppe. Den signifikante forskjellen mellom de to gruppene ble vurdert ved hjelp av t-testen, mens forskjellen mellom tre og flere grupper ble vurdert ved bruk av enveis ANOVA, etterfulgt av Tukeys post-hoc sammenligningstest. Statistisk signifikans ble satt til p < 0,001="" og="" p="">< 0,0001.="" for="" levetidsanalyser="" ble="" c.="" elegans="" overlevelse="" plottet="" ved="" hjelp="" av="" kaplan-meier="" overlevelseskurver="" og="" analysert="" via="" log-rank="" tester="" ved="" bruk="" av="" graphpad="" prism="" programvare="" (versjon="" 9.01;="" graphpad="" software,="" san="" diego,="" ca,="">

Abdel Fawaz Bagoudou 1, Yifeng Zheng 2, Masahiro Nakabayashi 2, Saroat Rawdkuen 3, Hyun-Young Park 4, Dhiraj A. Vattem 4,5, Kenji Sato 6, Soichiro Nakamura 1 og Shigeru Katayama 1,2,*

1 Graduate School of Medicine, Science and Technology, Shinshu University, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japan;

2Institute for Biomedical Sciences, Shinshu University, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japan;

3 School of Agro-Industry, Mae Fah Luang University, 333 Moo 1, Thasud, Muang, Chiang Rai 57100, Thailand;saroat@mfu.ac.th

4 Edison Biotechnology Institute, Konneker Research Laboratories, Ohio University, Athen, OH 45701, USA;

5 College of Health Sciences & Professions, Ohio University, Athen, OH 45701, USA

6 Graduate School of Agriculture, Kyoto University, Kyoto 606-8502, Japan;

Forfatterbidrag:

Forfatterbidrag: Konseptualisering, SR, DAV og SK; undersøkelse, AFB, YZ, MN, SR, H.-YP, DAV og KS; skriving—originalt utkast til forberedelse, AFB; skriving—gjennomgang og redigering, SK; veiledning, SN Alle forfattere har lest og samtykket til den publiserte versjonen av manuskriptet.
Finansiering: Denne forskningen mottok ingen ekstern finansiering.
Uttalelse fra institusjonell vurderingskomité: Ikke aktuelt.
Informert samtykkeerklæring: Ikke relevant.
Datatilgjengelighetserklæring: Dataene er tilgjengelige av den tilsvarende forfatteren på rimelig forespørsel.
Interessekonflikter: Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter.
Prøvetilgjengelighet: Prøver av forbindelsene er ikke tilgjengelige fra forfatterne

Referanser

1 Pohl, F.; Lin, PKT Den potensielle bruken av plantenaturprodukter og planteekstrakter med antioksidantegenskaper for forebygging/behandling av nevrodegenerative sykdommer: in vitro, in vivo og kliniske studier. Molecules 2018, 23, 3283. [CrossRef] [PubMed]

2. Kim, GH; Kim, JE; Rhie, SJ; Yoon, S. Rollen til oksidativt stress i nevrodegenerative sykdommer. Exp. Neurobiol. 2015, 24, 325–340. [CrossRef] [PubMed]

3. Lu, X.-l.; Yao, X.-l.; Liu, Z.; Zhang, H.; Li, W.; Li, Z.; Wang, G.-L.; Pang, J.; Lin, Y.; Xu, Z. Beskyttende effekter av xyloketal B mot MPP pluss-indusert nevrotoksisitet i Caenorhabditis elegans og PC12-celler. Brain Res. 2010, 1332, 110–119. [CrossRef]

4. Trimmer, PA; Bennett, JP, Jr. Cybridmodellen for sporadisk Parkinsons sykdom. Exp. Neurol. 2009, 218, 320–325. [CrossRef]

5. Cheon, S.-M.; Jang, I.; Lee, MH; Kim, DK; Jeon, H.; Cha, DS Sorbus alnifolia beskytter dopaminerg nevrodegenerasjon i Caenorhabditis elegans. Pharm. Biol. 2016, 55, 481–486. [CrossRef]

6. Schmidt, N.; Ferger, B. Nevrokjemiske funn i MPTP-modellen for Parkinsons sykdom. J. Neural Transm. 2001, 108, 1263–1282. [CrossRef] [PubMed]

7. Harrington, A.; Yacoubian, TA; Slone, SR; Caldwell, K.; Caldwell, G. Functional Analysis of VPS41-Mediated Neuroprotection in Caenorhabditis elegans and Mammalian Models of Parkinsons Disease. J. Neurosci. 2012, 32, 2142–2153. [CrossRef] [PubMed]

8. Fu, R.-H.; Harn, H.-J.; Liu, S.-P.; Chen, C.-S.; Chang, W.-L.; Chen, Y.-M.; Huang, J.-E.; Li, R.-J.; Tsai, S.-Y.; Hung, H.-S.; et al. n-butylidenftalid Beskytter mot dopaminerg nevrondegenerasjon og -synukleinakkumulering i Caenorhabditis elegans modeller for Parkinsons sykdom. PLOS ONE 2014, 9, e85305. [CrossRef]

9. Jadiya, P.; Khan, A.; Sammi, SR; Kaur, S.; Mir, SS; Nazir, A. Anti-Parkinsoniske effekter av Bacopa monnieri: Innsikt fra transgene og farmakologiske Caenorhabditis elegans-modeller av Parkinsons sykdom. Biochem. Biofys. Res. Commun. 2011, 413, 605–610. [CrossRef] 10. Andrade, JMDM; Fasolo, D. Polyfenol antioksidanter fra naturlige kilder og bidrag til helsefremmende. I polyfenoler i menneskers helse og sykdommer; Elsevier BV: Amsterdam, Nederland, 2014; s. 253–265.

11. Hsu, A.-L.; Murphy, CT; Kenyon, C. Regulering av aldring og aldersrelatert sykdom av DAF-16 og Heat-Shock Factor. Science 2003, 300, 1142–1145. [CrossRef]

12. Henderson, ST; Johnson, TE daf-16 integrerer utviklingsmessige og miljømessige input for å mediere aldring i nematoden Caenorhabditis elegans. Curr. Biol. 2001, 11, 1975–1980. [CrossRef]

13. Hutadilok-Towatana, N.; Chaiyamutti, P.; Panthong, K.; Mahabusarakam, W.; Rukachaisirikul, V. Antioksidative og frie radikaler rensende aktiviteter av noen planter brukt i thailandsk folkemedisin. Pharm. Biol. 2006, 44, 221–228. [CrossRef]

14. Stewart, P.; Boonsiri, P.; Puthong, S.; Rojpibulstit, P. Antioksidantaktivitet og ultrastrukturelle endringer i magekreftcellelinjer indusert av nordøstlige thailandske spiselige folkeplanteekstrakter. BMC-komplement. Altern. Med. 2013, 13, 60. [CrossRef]

15. Hui, W.; Lee, W.; Ng, K.; Chan, C. Forekomsten av triterpenoider og steroider i tre Glochidion-arter. Fytokjemi 1970, 9, 1099–1102. [CrossRef]

16. Takeda, Y.; Mima, C.; Masuda, T.; Hirata, E.; Takushi, A.; Otsuka, H. Glochidioboside, et glukosid av (7S,8R)-dihydrodeh ydrodiconiferyl alkohol fra blader av glochidia obovatum. Phytochemistry 1998, 49, 2137–2139. [CrossRef]

17. Zhang, X.; Chen, J.; Gao, K. Kjemiske bestanddeler fra Glochidion wrightii Benth. Biochem. Syst. Ecol. 2012, 45, 7–11. [CrossRef]

18. Tian, ​​J.-M.; Fu, X.-Y.; Zhang, Q.; Han, H.-P.; Gao, J.-M.; Hao, X.-J. Kjemiske bestanddeler fra Glochidion assamicum. Biochem. Syst. Ecol. 2013, 48, 288–292. [CrossRef]

19. Kongkachuichai, R.; Charoensiri, R.; Yakoh, K.; Kringkasemsee, A.; Insung, P. Næringsverdi og antioksidantinnhold i urfolksgrønnsaker fra Sør-Thailand. Food Chem. 2015, 173, 838–846. [CrossRef]

20. Pietta, P.-G. Flavonoider som antioksidanter. J. Nat. Prod. 2000, 63, 1035–1042. [CrossRef] [PubMed]

21. Duangjan, C.; Rangsinth, P.; Gu, X.; Zhang, S.; Wink, M.; Tencomnao, T. Glochidion zeylanicum bladekstrakter viser levetidsforlengende og oksidativ stressmotstandsegenskaper i Caenorhabditis elegans via DAF-16/FoxO og SKN-1/Nrf-2 signalveier. Phytomedicine 2019, 64, 153061. [CrossRef]

22. Jensen, VL; Gallo, M.; Riddle, DL Targets of DAF-16 involvert i Caenorhabditis elegans voksen levetid og dauer formasjon. Exp. Gerontol. 2006, 41, 922–927. [CrossRef] [PubMed]

23. Daitoku, H.; Fukamizu, A. FOXO-transkripsjonsfaktorer i regulatoriske nettverk for lang levetid. J. Biochem. 2007, 141, 769–774. [CrossRef]

24. Lakso, M.; Vartiainen, S.; Moilanen, A.-M.; Sirviö, J.; Thomas, JH; Nass, R.; Blakely, RD; Wong, G. Dopaminergt nevronalt tap og motoriske underskudd i Caenorhabditis elegans som overuttrykker menneskelig -synuklein. J. Neurochem. 2004, 86, 165–172. [CrossRef] [PubMed]

25. Nass, R.; Hall, DH; Miller, DM; Blakely, RD Neurotoxin-indusert degenerasjon av dopaminneuroner i Caenorhabditis elegans. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002, 99, 3264–3269. [CrossRef]

26. Wang, Y.-M.; Pu, P.; Le, W.-D. ATP-utarming er hovedårsaken til MPP pluss indusert dopaminneuronal død og ormedødelighet i -synuclein transgene C. elegans. Neurosci. Okse. 2007, 23, 329–335. [CrossRef]

27. Braungart, E.; Gerlach, M.; Riederer, P.; Baumeister, R.; Hoener, M. Caenorhabditis elegans MPP pluss modell for Parkinsons sykdom for screeninger med høy ytelse. Nevrodegener. Dis. 2004, 1, 175–183. [CrossRef]

28. Panowski, SH; Dillin, A. Signaler for ungdom: Endokrin regulering av aldring i Caenorhabditis elegans. Trender Endocrinol. Metab. 2009, 20, 259–264. [CrossRef]