Svært sensitiv og økologisk bærekraftig omvendt-fase HPTLC-metode for bestemmelse av hydrokinon i kommersielle blekekremer

Kontakt:ali.ma@wecistanche.com

Mohammed H. Alqarni 1, Prawez Alam 1, Faiyaz Shakeel 2, Ahmed I. Foudah 1 og Sultan Alshehri 2,*

Abstrakt: Hydrokinon(HDQ) er et naturlig depigmenteringsmiddel, som ofte brukes i preparater for hudtoning. Sikkerheten og grønnheten til analytiske metoder for HDQ-kvantifisering ble ikke vurdert i tidligere litteratur. Derfor ble en svært sensitiv og økologisk grønnere omvendt fase høyytelses tynnlagskromatografi (RP-HPTLC)-basert analyse etablert for HDQ-estimering i fire forskjellige kommersielleblekingkremer (CWC). Den binære etanol-vann(60:40, v·v−1)-blandingen ble brukt som det grønne løsningsmiddelsystemet. Estimeringen av HDQ ble utført ved 291 nm. Den nåværende RP-HPTLC-baserte analysen var lineær i 20–2400 ng-bånd-1-området. Den nåværende analysemetoden var svært sensitiv basert på deteksjons- og kvantifiseringsdata. De andre valideringsparametrene, som nøyaktighet, presisjon og robusthet, var også egnet for bestemmelse av HDQ. Maksimale HDQ-mengder ble oppnådd i CWC A (1,23 prosent w·w−1) etterfulgt av CWC C (0,81 % w·w−1), CWC D (0,43 % w·w−1) og CWC B (0,37 % w··) w−1). Den analytiske GREENness (AGREE) poengsummen for den nåværende analysemetoden ble estimert til 0,91, noe som indikerer de utmerkede grønnere egenskapene til den nåværende RP-HPTLC-analysen. Disse resultatene tyder på at den nåværende analytiske metoden er svært sensitiv og økologisk bærekraftig for kvantifisering av HDQ i sine kommersielle formuleringer.

Nøkkelord:bli enige;hydrokinon; økologisk bærekraftig RP-HPTLC; validering

Cistanche ekstraktkan rense frie radikaler og forhindre akkumulering av tyrosinase.

Klikk for åCistanche-effekter for bleking

1. Introduksjon

Hydrokinon(HDQ) er en naturlig forbindelse, som finnes i flere kommersielle hudtonende formuleringer for behandling av melasma (en sykdom forårsaket av overakkumulering av melanin i menneskelig hud) [1,2]. Det er et kraftig depigmenteringsmiddel og brukes som et alternativ til tyrosinase [3]. Det er et av de mest brukte midlene i behandlingen av human hudhyperpigmentering [4,5]. Den effektive konsentrasjonen av HDQ i kommersielle hudtonende formuleringer varierer fra 1,5 til 2,0 prosent w·w−1[6]. Den høye konsentrasjonen av HDQ (over 5 prosent w·w−1) forårsaker lokal irritasjon og leukodermi i menneskets hud [5,6]. På grunn av de kontroversielle bivirkningene, har mange land forbudt HDQ som enblekingmiddel i aktuelle formuleringer [7]. Likevel har flere kliniske undersøkelser antydet ulike beskyttende effekter avHDQi behandling av ulike hudhyperpigmentære lidelser som melasma, fregner, lentiginer, etc. [8,9]. Ved å vurdere både fordelene og risikoene ved HDQ, er dens kvantitative analyse i forskjellige kommersielle hudtoningsformuleringer nødvendig.

Ulike farmasøytiske analyser brukes for kvantifisering av HDQ enten alene eller i kombinasjon med andreblekingmidler i markedsførte blekekremer (CWCs). En rekke ultrafiolett (UV) spektrometribaserte analyser er dokumentert for kvantitativ analyse av HDQ i kommersielle blekeprodukter (CWP) og farmasøytiske preparater [10–13]. Et bredt spekter av høyytelses væskekromatografi (HPLC)-baserte analyser er dokumentert for bestemmelse av HDQ sammen med dets etere i en rekke CWCer og CWPer [14–23]. Ulike voltametriske metoder er også etablert for samtidig bestemmelse av HDQ og dets eterderivater i CWPs [24–29]. Noen andre analytiske analyser som strømningsinjeksjon elektrokjemisk [30], micellær elektrokinetisk kromatografi [31], kapillær elektrokromatografi [32], og nanokompositt [33]-baserte analyser er også etablert forHDQanalyse sammen med dens eterderivater og annetblekingagenter i CWP. Noen elektrokjemisk-baserte nanosensorer er også rapportert for HDQ-analyse [34,35]. En enkelt normalfase høyytelses tynnlagskromatografi (HPTLC)-basert metode ble også brukt for den kvalitative og kvantitative analysen av HDQ i CWCs av vår forskningsgruppe [1].

Etter en uttømmende analyse av rapporterte essays om HDQ-analyse, ble det observert at sikkerheten og den økologiske bærekraften til de farmasøytiske metodene i litteraturen ikke har blitt vurdert eller vurdert for evaluering. I tillegg har de grønne/økologisk bærekraftige reversert-fase HPTLC (RP-HPTLC)-baserte analysene ennå ikke blitt brukt for estimering avHDQi sine CWCs. Økologisk bærekraftige/grønne HPTLC-baserte analyser tilbyr mange fordeler som enkelhet, økonomi, lave driftskostnader, kort analysetid, parallellanalyse av flere prøver, deteksjonsklarhet og reduksjon i miljøtoksisitet over HPLC og andre analysemetoder [36–39]. Følgelig ble en RP-HPTLC-metode for bestemmelse av HDQ valgt for denne studien. Ulike tilnærminger brukes for vurdering av grønnhetsprofilen til de farmasøytiske analysene [38–43]. Ikke desto mindre er det bare den analytiske GREENness (AGREE) metriske tilnærmingen som anvender alle de 12 prinsippene for grønnanalytisk kjemi (GAC) for grønnhetsvurderingen [42].

Den metriske AGREE-tilnærmingen ble brukt for grønnhetsevalueringen av presentRP-HPTLC-metoden [42]. Derfor ble det nåværende arbeidet utført for å utvikle en høysensitiv og grønn/økologisk bærekraftig RP-HPTLC-metode for estimering avHDQi fire forskjellige CWC. Grønnhetsprofilen til den nåværende RP-HPTLC-metoden ble oppnådd av AGREE: The Analytical Greenness Calculator. Den nåværende analytiske analysen for HDQ-analyse ble validert i henhold til retningslinjer fra International Council for Harmonization (ICH) Q2 (R1) [44].

2. Materialer og metoder

2.1. Materialer

Referansestandarden for HDQ (renhet: 99 prosent) ble anskaffet fra Fluka Chemica (Darmstadt, Tyskland). HPLC-grade metanol (MeOH) og etanol (EtOH) ble anskaffet fra Alfa Aesar (Tewksbury, MA, USA). Vann av HPLC-grad (H2O) ble samlet opp fra et Milli-Q vannrensersystem (E-Merck, Darmstadt, Tyskland). Andre løsemidler og midler som ble brukt var av analytisk kvalitet. Fire forskjellige CWC-er for HDQ ble hentet fra et farmasøytisk marked i Al-Kharj, Saudi-Arabia, i juni 2021. CWC-ene tilHDQble lagret på et kjølig og mørkt sted ved 22 ◦C før begynnelsen av eksperimentene. CWC-ene ble lagret i omtrent en måned før begynnelsen av eksperimentene.

2.2. Kromatografi

RP-HPTLC densitometriskvantifiseringen av HDQ i referansestandarden og fire forskjellige CWC-er ble utført ved bruk av et HPTLC-instrument (CAMAG, Muttenz, Sveits). Den kvantitative analysen av HDQ ble utført på 10 × 20 cm2 glassplater forhåndsbelagt med RP silikagel 60 F254S-plater (E-Merck, Darmstadt, Tyskland). Prøvene på TLC-platene ble oppdaget som 6 mm-båndene ved å bruke en automaticsampler 4 (ATS4) applikator (CAMAG, Genève, Sveits). Prøveapplikatoren var utstyrt med en CAMAG mikrolitersprøyte (Hamilton, Bonaduz, Sveits). Søknadsgraden for kvantitativ analyse avHDQble holdt konstant ved 150 nL s−1. Platene ble utviklet i et automatisk fremkallingskammer 2 (CAMAG, Muttenz, Sveits) på 80 mm avstand. Det grønne løsningsmiddelsystemet for HDQ-analyse var EtOHH2O (60:40, v·v−1). Utviklingskammeret ble tidligere mettet med dampene fra den mobile fasen i 30 minutter ved 22 ◦C. HDQ ble oppdaget ved 291 nm. Spaltedimensjonene var 4 × 0,45 mm2 og skanningshastigheten var 20 mm s−1. Hvert eksperiment ble utført i tre eksemplarer. Programvaren som ble brukt til databehandlingen var WinCATs (v. 1.4.3.6336, CAMAG, Muttenz, Sveits).

2.3. HDQ-kalibreringskurve og klargjøring av kvalitetskontrollprøver

Den spesifiserte mengden HDQ (10 mg) ble dispensert i 100 mL EtOH-H2O(60:40, v·v−1) grønne løsningsmiddelsystemer for å oppnå stamløsningen med en konsentrasjon på 100 µg mL−1. De forskjellige volumene av stamløsninger ble fortynnet ytterligere ved å bruke EtOH-H2O (60:40, v·v−1)-systemer for å oppnå HDQ-konsentrasjoner i 20–2400 ng-bånd-1-området. De oppnådde løsningene avHDQsom inneholdt forskjellige konsentrasjoner ble spottedon HPTLC-plater. HPTLC-topparealet for HDQ ble oppnådd for hver HDQ-løsning ved bruk av den foreliggende farmasøytiske analysen. Kalibreringskurven til HDQ ble generert ved å plotte HDQ-konsentrasjoner mot HPTLC-området. I tillegg tre forskjellige kvalitetskontrollprøver (QC), for eksempel lav QC (LQC; 20 ng bånd-1), middels QC (MQC; 600 ng bånd-1), og høy QC (HQC; 2400 ng bånd-1) prøver , ble oppnådd separat for å bestemme forskjellige valideringsparametre for den foreliggende farmasøytiske analysen.

2.4. Prøvebehandling for HDQ-bestemmelse i CWC-er

HDQ ble trukket ut fra fire forskjellige CWCs ved å ta i bruk prosedyren rapportert i litteraturen [1]. De nøyaktig veide (5,0 g) mengdene av fire forskjellige CWC-er, inkludert A, B, C og D, ble overført til skilletrakten separat. Hver CWC ble ristet i skilletrakten med MeOH (3 × 70 ml) i en periode på 30 minutter ved 22 ◦C. MeOH-ekstraktene fra hver CWC ble kombinert og inndampet separat til tørrhet under redusert trykk ved bruk av en roterende vakuumfordamper. Restene som ble oppnådd ble rekonstituert med 10 mL MeOH og lagret i kjøleskap inntil videre evaluering. De oppnådde prøvene ble utsatt for HDQ-analyse ved å bruke den nåværende analysemetoden ved 291 nm.

2.5. Valideringsparametere

Den nåværende RP-HPTLC-analysen for HDQ-analyse ble validert for forskjellige valideringsparametre ved å følge ICH-Q2 (R1)-retningslinjene [44]. DeHDQlinearitet ble evaluert ved å plotte HDQ-konsentrasjoner mot dets målte toppareal. HDQ-lineariteten ble evaluert ved 11 forskjellige QC-prøver på 20, 40, 60, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 1200 og 2400 ng-bånd-1 for den nåværende farmasøytiske analysen. Systemeffektivitetsparametrene for den nåværende analysemetoden ble evaluert i form av retardasjonsfaktor (Rf), asymmetrifaktor (As), og antall teoretiske plater per meter (N m−1). Rf, As og N m−1 ble oppnådd ved MCQ (600 ng band−1), som tidligere rapportert i litteraturen [45].

Nøyaktigheten for den nåværende RP-HPTLC-metoden ble bestemt som prosent utvinning. Prosent gjenvinning ble oppnådd ved LQC (20 ng bånd-1), MQC (600 ng bånd-1) og HQC (2400 ng bånd-1) for den nåværende analysemetoden.

Presisjonen for den nåværende analysemetoden ble evaluert som intra/interday presisjon. Intradagspresisjon ble bestemt ved analyse av HDQ ved LQC, MQC og HQC på samme dag for den nåværende analytiske analysen. Presisjon mellom dager ble bestemt ved analyse av HDQ ved LQC, MQC og HQC på tre forskjellige dager for den presentanalytiske analysen [44]. Hver presisjon ble målt seks ganger (n=6).

Robustheten ble evaluert ved å introdusere noen små endringer i de grønne løsningsmiddelsystemene for den nåværende RP-HPTLC-metoden. For robusthetsevaluering ble det originale EtOH H2O (60:40, v·v−1) løsningsmiddelsystemet endret til EtOH-H2O (62:38, v·v−1) og EtOHH2O (58:42, v·v−1) ) løsemiddelsystemer, og den spesifikke HPTLC-responsen og Rf-verdiene ble registrert og tolket [44].

Sensitiviteten for den nåværende analysemetoden ble evaluert som deteksjons- (LOD) og kvantifiseringsgrenser (LOQ) ved bruk av en standardavviksmetode. LOD og LOQ for HDQ for den nåværende analysemetoden ble beregnet, som rapportert i litteraturen [44,45].

Topprenheten/spesifisiteten ble evaluert ved å sammenligne Rf-verdiene og UV-spektra av HDQ i CWCs A, B, C og D med standard HDQ for den aktuelle farmasøytiske analysen.

2.6. Kvantitativ analyse av HDQ i CWCs

De oppnådde prøvene av CWC A, B, C og D ble oppdaget på HPTLC-plater, og deres TLC-responser ble notert. Toppområdet forHDQi CWCs ble registrert. HDQ-innholdet i CWC-er ble beregnet ved å bruke kalibreringskurven til HDQ for den presentanalytiske metoden.

2.7. Grønnhetsvurdering

Grønnhetsegenskapene for den nåværende analysemetoden ble oppnådd ved å bruke den metriske AGREE-tilnærmingen [42]. AGREE-poengsummene (0.0–1.0) for den nåværende analysemetoden ble registrert ved å bruke AGREE: The Analytical Greenness Calculator (versjon0.5, Gdansk University of Technology, Gdansk, Polen, 2020).

3. Resultater og diskusjon

3.1. Metodeutvikling

Basert på litteraturanalytiske metoder, har det blitt funnet at den økologisk bærekraftige standbare/grønne RP-HPTLC-metoden for analyse av HDQ i kommersiell kosmetikk mangler. Derfor ble denne studien utført for å utvikle den raske, svært sensitive og økologisk bærekraftige RP-HPTLC-metode for HDQ-analyse i CWC-er.

For RP-HPTLC-analyse av HDQ, forskjellige proporsjoner av EtOH og H2O, inkludert EtOH-H2O (50:50, v·v−1), EtOH-H2O (60:40, v·v−1), EtOH-H2O (70:30, v·v−1), EtOH H2O (80:20, v·v−1) og EtOH-H2O (90:10, v·v−1), ble evaluert som de grønne løsningsmiddelkombinasjonene for utvikling av et pålitelig bånd for HDQ-analyse. Løsningsmiddelblandingene ble utviklet under kammermetningsbetingelser. Fra de registrerte dataene ble det lagt merke til at EtOH-H2O (50:50, v·v−1), EtOH-H2O (70:30, v·v−1), EtOH-H2O (80:20, v·v− 1), og EtOH-H2O (90:10, v·v−1) grønne løsningsmiddelblandinger ga et dårlig kromatogram påHDQmed en uakseptabel As-verdi (Som {{0}}.29). EtOH-H2O (60:40, v·v−1)grønn løsningsmiddelkombinasjon hadde imidlertid vist seg å gi et godt oppløst kromatogram av HDQ atRf=0.83 ± 0.02 med en akseptabel As-verdi (Som {{ 12}}.03) (Figur 1). Derfor ble EtOH H2O (60:40, v·v−1) optimalisert som de grønne løsningsmiddelblandingene for HDQ-analyse i CWC-ene. UV-spektralbåndene for den nåværende RP-HPTLC-metoden ble registrert densitometrisk, og maksimal HPTLC-respons ble funnet ved 291 nm for den nåværende RP-HPTLC-metoden. Derfor ble hele analysen av HDQ utført ved 291 nm.

3.2. Valideringsparametere

Den nåværende farmasøytiske analysen for HDQ-kvantifisering ble validert for linearitetsområde, systemeffektivitetsparametere, nøyaktighet, presisjon, robusthet, sensitivitet og topprenhet/spesifisitet ved å følge ICH-anbefalingene [44]. Resultatene for minste kvadraters regresjonsanalyse av kalibreringskurven til HDQ for den nåværende RP-HPTLC-metoden er presentert i tabell 1.HDQKalibreringskurven var lineær i området 20–2400 ng bånd med en bestemmelseskoeffisient på 0,9997 for den nåværende analysemetoden. disse dataene antydet god linearitet mellom HDQ-konsentrasjon og dens respons.

Systemeffektivitetsparametrene for den nåværende farmasøytiske metoden ble studert ved MQC (600 ng-bånd-1), og resultatene er inkludert i tabell 2. Rf-, As- og Nm-1-verdiene for den nåværende analysemetoden ble spådd som henholdsvis 0.83 ± 0.02, 1.03 ± 0.03 og 4987 ± 2.87. Disse resultatene indikerte at den nåværende analysemetoden var pålitelig for HDQ-analyse i CWC-ene.

Resultatene for nøyaktighetsanalysen for den nåværende analysemetoden er oppført i tabell 3. Den prosentvise gjenvinningen av HDQ for den nåværende RP-HPTLC-metoden ble bestemt til henholdsvis 101,80 prosent, 98,16 prosent og 99,38 prosent ved LQC, MQC og HQC . De høye verdiene av prosentvis gjenoppretting indikerte nøyaktigheten til den nåværende RP-HPTLC-metoden for HDQ-analyse i CWC-ene.

Presisjonen ble bestemt som prosenten av variasjonskoeffisienten (prosent CV), og resultatene er vist i tabell 4. Prosent CV-ene for HDQ for den nåværende analytiske metoden ble forutsagt som 0.91, 0. 59 og 0.26 prosent ved henholdsvis LQC, MQC og HQC for intradagspresisjonen. Prosent CV-ene for HDQ for den nåværende RP-HPTLC-metoden ble spådd som 0.98,{{10}}.69 og 0.32 prosent ved henholdsvis LQC, MQC og HQC for mellomdagers presisjon. De lave verdiene av prosent CV indikerte presisjonen til den nåværende RP-HPTLC-metoden for HDQ-analyse i CWC-er.

Resultatene av robusthetsanalysen for den nåværende analysemetoden er vist i tabell 5. Prosent CV-ene for robusthetsanalysen ble spådd til 0.59–0.66 prosent for den presentanalytiske metoden. Rf-verdiene til HDQ ble funnet i området 0.82–0.84 for den presentanalytiske metoden. De smale endringene i Rf-verdiene til HDQ og lavere prosent CV-er viste robustheten til den nåværende analytiske metoden for HDQ-kvantifisering i CWC-er.

Sensitiviteten for den nåværende analysemetoden ble registrert som "LOD og LOQ", og deres fysiske verdier er vist i tabell 1. "LOD og LOQ" for den nåværende analytiske metoden ble spådd som 6,91 ± 0.23 og 2 0,73 ± 0,68 ng bånd-1, henholdsvis forHDQkvantifisering. Disse fysiske verdiene for "LOD og LOQ" for den nåværende analysemetoden indikerte sensitiviteten for HDQ-analyse i CWC-er.

Topprenheten/spesifisiteten for den nåværende analysemetoden ble evaluert ved å sammenligne de overlagte UV-spektrene til HDQ i fire forskjellige CWC-er med de til standard HDQ. De overlagte UV-spektrene til standard HDQ og HDQ i fire forskjellige CWC-er er vist i figur 2. Den høyeste kromatografiske responsen for HDQ i standard HDQ og studerte CWC-er ble observert ved 291 nm for den nåværende analysemetoden. De identiske UV-spektrene, Rf-verdiene og bølgelengden til HDQ i standard HDQ og CWC-er indikerte topprenheten/spesifisiteten for den nåværende analysemetoden.

3.3. Analyse av HDQ-innhold i CWC-er

Anvendeligheten av den nåværende analytiske analysen ble verifisert i den kvantitative estimeringen av HDQ i CWC-er. Kromatogrammet tilHDQfra CWCs ble identifisert ved å sammenligne dets TLC-punkt ved Rf {{0}}.83 ± 0.02 med standard HDQ for den nåværende analysemetoden. Kromatogrammene til HDQ i CWCs A og B for den nåværende analytiske analysen er oppsummert i figur 3. HPTLC-kromatogrammene til HDQ i CWCs var identiske med de for ren HDQ. Noen ekstra topper dukket også opp i kromatogrammene til CWC-er, som kan være assosiert med forskjellige hjelpestoffer som er tilstede i CWC-er. Den økologisk bærekraftige HPTLC-metoden var selektiv for HDQ-analyse ved Rf=0.83 uten forstyrrelser fra de andre ingrediensene i CWCene. Rf-verdien (0.83) til HDQ i CWC-er ble funnet å være identisk med den for standard HDQ ({{20}}.83), noe som indikerer at det ikke var noen interaksjon mellom HDQ og CWC ingredienser. Derfor var det ingen påvirkning av formuleringsingredienser på kvaliteten på HDQ-kromatogrammet, LOD og effektiviteten til den nåværende HPTLC-metoden for HDQ-analyse. Tilstedeværelsen av ekstra topper i kromatogrammene til CWC-er indikerte at den nåværende RP-HPTLC-metoden var pålitelig for HDQ-estimering i nærvær av formuleringsingredienser. HDQ-innholdet i CWC ble bestemt fra kalibreringskurven til HDQ, og resultatene er inkludert i tabell 6. Tabell 6 oppsummerer også den merkede mengden av HDQ og dens formuleringsingredienser. HDQ-innholdet var høyest i CWC A (1,23 prosent w·w−1) etterfulgt av CWC C (0,81 prosent w·w−1),CWC D (0,43 prosent w·w −1), og CWC B (0,37 prosent w·w−1). Det registrerte innholdet av HDQ var mye lavere enn den merkede mengden (2,00 prosent w·w−1) av HDQ i studerte CWC-er. HDQ-innholdet i to forskjellige CWC-er (A og B) ble registrert som henholdsvis 0,69 prosent w·w−1 og 0,34 prosent w·w−1, ved bruk av normalfase HPTLC-metoden i litteraturen [1]. Det rapporterte innholdet av HDQ var også mye lavere enn den merkede mengden (2,00 prosent w·w−1) av HDQ i litteraturen [1]. Flere CWC-er eller CWP-er markedsføres under påstanden om å være helt naturlige. Det er imidlertid vanlig å finne noen syntetiske kjemikalier som forfalskning med de samme effektene som i slike CWC-er eller CWP-er som svindel. Mengden HDQ registrert i dette arbeidet og de registrert i litteraturen indikerte at de studerte CWCene har en lav mengde HDQ og ikke samsvarte med etikettpåstander [1]. Derfor forventes det at de studerte CWCene inneholder noen syntetiske kjemikalier som utroskapsstoffer. Samlet sett kan den nåværende analytiske analysen brukes til HDQ-analyse i kosmetiske og farmasøytiske preparater.

3.4. Grønnhetsvurdering

Ulike metoder brukes for grønnhetsevaluering av farmasøytiske analyser [38–43]. Imidlertid er det bare AGREE-tilnærmingen som bruker alle de 12 prinsippene til GAC for evaluering av grønnhet [42]. Derfor ble grønnhetsprofilen til den nåværende analysemetoden oppnådd ved å bruke AGREE-kalkulatoren. Den forutsagte AGREE-skåren ved bruk av 12 forskjellige prinsipper for GAC for den nåværende analytiske analysen er presentert i figur 4. AGREE-skåren for forskjellige prinsipper for GAC ble registrert som følger: Prøvebehandling: 0.61Plassering av analytisk enhet: 1.{{ 9}}Trinn for prøveforberedelse: 1.00Automasjonsgrad: 0.80Derivatisering: 1.00Avfallsmengde: 1.{{17} }Analysegjennomstrømning: 1.00Energiforbruk: 1.00Prøvebehandling: 0,51Reagenskilde: 1.00Toksisitet av løsemidler: 1.00 Operatørens sikkerhet: 1.00

Den samlede AGREE-poengsummen for den nåværende analysemetoden ble registrert som 0.91, noe som indikerer den utmerkede grønne analysemetoden forHDQkvantifisering.

4. Konklusjon

RP-HPTLC-densitometrimetoden ble utviklet for HDQ-analyse i fire forskjellige CWC-er av HDQ. Den nåværende RP-HPTLC-analysen ble validert for forskjellige valideringsparametre. Den nåværende analysemetoden var svært sensitiv, rask og økologisk bærekraftig forHDQanalyse. AGREE-poengsummen for den nåværende analysemetoden antydet en utmerket analytisk analyse for HDQ-kvantifisering. Den nåværende RP-HPTLC-metoden var egnet for HDQ-analyse i fire forskjellige CWC-er. Disse resultatene indikerte at den nåværende analytiske analysen kan brukes for HDQ-analyse i forskjellige kosmetiske og farmasøytiske preparater.