E-post:joanna.jia@wecistanche.com

Antidepressiva og kognitive forbedringsaktiviteter til den tradisjonelle kinesiske urten Cistanche

Dongfang Wang,1 Haizhen Wang,2 og Li Gu2

1State Key Laboratory of Biocontrol, Institute of Aquatic Economic Animals og Guangdong Province Key Laboratory for Aquatic Economic Animals, School of Life Sciences, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510275, Kina

2Food and Health Engineering Research Center of State Education Ministry, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510275, Kina

Korrespondanse skal rettes til Li Gu; Mottatt 20. februar 2017; Revidert 11. mai 2017; Godkjent 28. mai 2017; Publisert 28. juni 2017 Akademisk redaktør: Ki-Wan Oh Copyright © 2017 Dongfang Wang et al. Dette er en åpen artikkel distribuert under Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i et hvilket som helst medium, forutsatt at originalverket er korrekt sitert. Mer enn ti prosent av mennesker lider av minst én episode med depresjon og relaterte psykiske lidelser i løpet av livet, og depresjon og relaterte psykiske lidelser er et av verdens største folkehelseproblemer. En multippelsystemteori hevder at dysregulering av de multiple systemene ligger til grunn for patogenesen til depresjon og relaterte psykiske lidelser, og nye terapier basert på multippelsystemdysreguleringsteorien er et presserende behov. I denne studien, den antidepressive effekten av avkok fra urtCistanchedeserticolaYCMa og Cistanchetubulosable undersøkt. UrtCistancheavkok reduserte immobilitetsperioden betydelig i musehaleopphengstesten. Mus behandlet med urteavkok viste en forbedret evne til romlig læring og hukommelse i Morris vannlabyrinttest. Grupper behandlet urteavkok viste en nedregulert monoaminoksidase (MAO) aktivitet; dopamin (DA) konsentrasjonen i hjernen ble oppregulert, noe som indikerer urtCistancheavkok forbedret nervens eksitabilitet; serumkonsentrasjonen av kortikosteron (CORT) ble nedregulert, noe som viste at mus hadde fordel av et redusert stressnivå. Derfor den antidepressive effekten og mekanismen til den tradisjonellekinesiskurtCistancheble utforsket i denne studien. UrtCistancheviste et potensial for å bli utviklet som en komplementær og alternativ terapi for depresjon.

Forhindre Alzheimers sykdom med cistanche

1. Introduksjon

Depresjon og relaterte stemningslidelser, med et estimat på 12–17 prosent av befolkningen som opplever minst én episode i løpet av livet, er blant de ledende årsakene til psykiske funksjonshemminger og regnes som et av verdens største folkehelseproblem[1].Av spesiell relevans er det at en betydelig andel av pasienter med depresjon lider av hukommelsestap, konsentrasjonsproblemer, redusert energi eller tretthet, tap av interesse eller nytelse i hobbyer og aktiviteter, søvnvansker, oppvåkning tidlig om morgenen eller oversøvn. Selv om de nevrale substratene for abnormitet ved depresjon og relaterte syndromer er uklare, er det generelt akseptert at svekkelse av nevroplastisitet og cellulær motstandskraft gir opphav til patofysiologien til depresjon og vellykket behandling kan avhenge av intervensjonen av nevrotransmitternivået[2]. Tilnærmingen til depresjonsmedisin er i utgangspunktet basert på det klassiske monoaminsystemet

hypotese, som hevder at dysregulering av monoaminer, spesielt serotonin (5-HT) og noradrenalin (NE) bidrar til depresjonspatogenesen, og intervensjon av nevrotransmittersystemet med dopaminagonister og dopamin-noradrenerge modulatorer vil lindre symptomene på alvorlig depresjon lidelse [3]. Selv om det er mye foreskrevet, er antidepressivas kurative effekt tvilsom, og bivirkningen kan ikke ignoreres fordi en betydelig andel av pasientene ikke reagerer på manipulasjonen av monoaminsystemet [4]. Nylig indikerer nye teorier om depresjonspatogenese at flere systemer, inkludert inflammatoriske veier, den oksidative stressbanen, hypothalamus-hypofyse-binyreaksen (HPA), det metabolske og bioenergetiske systemet, nevrotrofiske veier, glutamatsystemet, opioidsystemet og det kolinerge systemet, er nært forbundet med depresjonsforekomsten [3]. Bevis viser at intervensjon med flere mål ga bedre effekt enn én enkelt målintervensjon [5]. Nye terapier basert på teorien om multippel system dysregulering er et presserende behov.

Urteprodukter konsumerte angivelig mer enn halvparten av USAs befolkning[6];interesse og etterspørsel etter urter eller urteprodukter som en supplerende måte å behandle depresjon på vokser over hele verden. Flere medisinske planter er funnet å demonstrere den depresjonslindrende gunstige effekten. Urter som er rapportert å ha effekten av å undertrykke depresjon og forbedre kognitiv funksjon inkluderer havtorn [7], Ginkgo biloba[8], Piper nigrum[9], Hypericum perforatum [10], Griffonia simplicifolia[11]. En kombinasjonsadministrasjon av ferulinsyre og piperin viste en synergistisk antidepressiv-lignende effekt hos mus ved å manipulere det monoaminerge systemet[7]. Albiflorin ble karakterisert av en høy selektiv affinitet til nevrotransmitterreseptorene og transportørene og signifikant økte ekstracellulære konsentrasjoner av 5-HT og NE i hypothalamus hos fritt bevegelige rotter[12]. En medisinsk urt Melissa officinalis L. lindret den depressive oppførselen til mus ved å øve innflytelse på det serotonerge nevrotransmitternivået[13].Disse urtene eller avkokene, utviklet som alternative midler mot depresjon, hjelper til med å lindre symptomene på depresjon og gir en ny kilde til utvikling av antidepressiva. UrtCistanchearter, distribuert i tørre land og ørkener i den nordlige delen av Kina, er tradisjonelle kinesiske medisinurter og mye brukt til behandling av ulike sykdommer i mer enn 1,000 år i Kina. De mange effektene av urtCistancheavkoksområde mellom afrodisiakum [14], immunfremmende[15], antioksidativt [16], og leverbeskyttende [17] eiendommer. C. deserticola avkok induserer testikkelsteroidogene enzymer [18], fremmer erektil respons på penis og forkorter latensperioden for erektil reaksjon hos kastrerte rotter [19]. UrtCistanchehar blitt rapportert å hemme aktivitetene til dopaminerge nevroner ved å regulere de hemmende apoptose-gener og nevrotrofiske faktorer [20]. C.tubulosaavkok endret den kognitive dysfunksjonen forårsaket av A� 1-42 via blokkering av amyloidavsetning og gjenopplivet den kolinerge og hippocampale dopaminerge neuronale funksjonen [21]. Den nevrobeskyttende egenskapen til urte Cistanche innebærer det terapeutiske potensialet ved kognitiv-relaterte sykdommer. Depresjon er en vanlig blandet modus for emosjonelle reaksjoner med glemsel og kognitiv svikt som de vanlige symptomene [22]. Urte Cistanche ble ofte brukt som en tradisjonell kinesisk medisin for å behandle glemsel; dessuten viser en fersk rapport at en tidlig administrering av maismel supplert med C.tubulosaer gunstig for fremme av lang levetid og lukt-assosiert læring og hukommelsesforbedring i Drosophila-modellen for ikke-virveldyr [23]. Disse fakta indikerer den kognitive forbedrende egenskapen til urtenCistanche; her i denne forskningen karakteriserte vi for første gang den antidepressive egenskapen og dens forhold til kognitive forbedringsaktiviteter i pattedyrmodellen ved å regulere monoaminsystemet og HPA-aksen. Belyser den antidepressive egenskapen og den foreløpige mekanismen til urtenCistanchekan utvide bruksspekteret til urten Cistanche, som kan utvikles som et alternativt middel mot depresjon.

2. Materialer og metoder

1.1. Plantemateriale og avkoksforberedelse. C. deserticola YCMa ble oppnådd fra Nei Mongol Autonomous Region, Kina; C.tubulosable hentet fra den autonome regionen Xinjiang Uygur, Kina. Før avkok ble urten (C. deserticola YCMa eller C. tubulosa) inspisert for å påvise innholdet av echinacosid og verbascosid ved bruk av HPLC (high-performance væskekromatografi) (Milford, MA, Waters, USA), og det kvalifiserte produktet (iht. til Pharmacopoeia of the People's Republic of China) ble brukt til dyreforsøkene. Avkoket ble anskaffet basert på metoden for vanndamping utviklet av Food and Health Engineering Research Center of State Education Ministry, Sun Yat-sen University. Tørket Cistanche deserticola YCMa på 125 g ble knust og siktet med 120-nettingsskjerm og deretter ble pulveret oppløst i 3 L ultrarent vann, oppvarmet

ved 100∘C i 2 timer, deretter avkjølt til romtemperatur og siktet; supernatanten ble resirkulert. Sedimentet ble deretter oppløst i 2 L ultrarent vann og deretter oppvarmet i 1,5 time og avkjølt som nevnt ovenfor for å resirkulere supernatanten; sedimentet ble deretter brukt til resirkulering av supernatanten. Innholdet av all supernatanten ble anriket med roterende vakuumfordampere ved 60°C; til slutt ble råstoffkonsentrasjonen satt til 0,5 g/ml og produktet ble lagret ved -20∘C.

1.2. Echinacoside og Verbascoside Assay ved HPLC-analyse. HPLC (high-performance væskekromatografi) ble brukt for å måle den kvalitative og kvantitative analysen av echinacoside og verbascoside; verbascoside (renhet > 93 prosent) og echinakosid (renhet > 93 prosent) ble kjøpt fra National Institutes for Food and Drug Control (Beijing, Kina) og brukt som en standardkontroll.

1.3. Dyrepleie og eksperimentell oppførsel. Forsøkspersonene var SPF (spesifikk patogenfri) Kunming-hannmus som veide 21-25 gram, levert av Medical Experimental Animal Center i Guangdong-provinsen. Dyrene ble holdt i plastbur (ti per bur); miljøbetingelsene ble satt som følger: fuktighet 40–70 prosent, romtemperatur 21 ± 1∘C og en 12 timer: 12 timer lys-mørke periode. Alle dyreforsøk ble godkjent av Animal Ethics Committee ved Sun Yat-sen University.

1.4. Test av haleoppheng. Haleopphengstesten ble utført i henhold til protokollen beskrevet av Cryan et al. [24] med beskjedne endringer. Kort fortalt, på dag 21, ble musene suspendert i halen ved å bruke metalliske galger bundet med nylonkateter, med hodet i høyden 50 mm fra gulvet. Musene ble hengt på kroken på selvklebende taper 10-20 mm fra enden av halen og ble isolert akustisk og visuelt isolert med klappplater. Kroppsbevegelsene til musen ble registrert og åndedrettsbevegelsene ble ignorert. Før dagen for eksperimentet ble musene suspendert i 8 minutter for tilpasning.

1.5. Morris Water Maze Test. Vannlabyrint-testen ble utført i henhold til beskrivelsen til Vorhees et al. [25–27] ved hjelp av enheten utviklet av det kinesiske akademiet for medisinske vitenskaper. Et sirkulært basseng (150 cm diameter) fylt med vann (26

± 1∘C; felghøyde (avstand vannflate til veggkant): 10 cm)

Tabell 1: Innholdet av echinacosid og verbascoside i pulveret og avkoket av C. deserticola YCMa og C.tubulosa.

ble brukt, sirkulær redningsplattform (diameter: 11 cm; avstand

Prøver

ECH prosent VerBS prosent mellom plattformens midtpunkt og bassengveggen: 27 cm) ble senket 1–1,5 cm under vannoverflaten, og testområdet ble opplyst med indirekte belysning (50 ± 10 lux) for å unngå refleksjoner. Fire startsteder ble brukt, N, S, E og W. For den romlige læringstesten ble dyrene trent daglig på dagene 9–11 på det faste startstedet. Rømningslatensperioden måles for å vise musenes romlige minne og læreevne. Hvis musene ikke kunne finne eller klatre opp på plattformen, ville musene bli ført til plattformen og bli værende i 10 s. Etter å ha tatt en pause i 60 s, ville neste treningsøkt startes. Data hentet fra den siste romlige læringstesten ble brukt som basisverdi for støping. På dagene 23–28 ble stedsnavigasjonstest og romlig sonde utført. Plassnavigasjonstesten varte i 6 dager og ble tatt klokken 13.00, dyr ble plassert i vannet med hodet vendt mot bassengveggen med klokken, og latensperioden (innen 2 minutter) ble registrert. Etter at stedsnavigasjonstesten var utført, ble plattformen fjernet. Musene ble plassert i vann med hodet vendt mot bassengveggen på et tilfeldig sted, og bevegelsesstien og frekvensen som musene svømte over der plattformen var innen 2 minutter ble registrert. Bevegelsessporet ble registrert av en multifunksjons autonom registrering av musebevegelser (YLS-1A, Yiyan Technology, Jinan, Kina).

echinacoside i cistanche

1.6. Påvisning av MAO-aktiviteten. MAO-aktiviteten ble målt ved å bruke et MAO-deteksjonssett (A034, Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina), og deteksjonen ble utført i henhold til produsentens protokoll. Homogenat fra hjernevev ble oppnådd; 500 �l ble blandet med 300 �l Agent 1 og 300 �l Agent 2, inkubert i 3 timer ved 37 ∘C, og deretter suksessivt tilsatt 300 �l Agent 3, 3 ml Agent 4, og vortex for 2 min. Reaksjonsblandingen ble sentrifugert ved 3,000 rpm i 10 minutter, og den optiske tettheten til supernatanten ble bestemt ved hjelp av ultrafiolett og synlig spektrofotometer (Lambda 25, PerkinElmer, USA) ved bruk av 242 nm eksitasjonslys.

1.7. Enzym-Linked Immunosorbent Assay of Neurotransmitters og ACTH og CORT. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) deteksjonssett for dopamin (DA), noradrenalin (NE) og 5-hydroksytryptamin (5-HT) ble kjøpt fra BLUE GENE, Shanghai. ELISA-deteksjonssett ble kjøpt fra Qiyun Biotech, Guangzhou.

Prosedyrene er som følger: eksperimentet ble utført ved romtemperatur. Belegg brønnene på en PVC-mikrotiterplate med innfangningsantistoffet ved 1–10 �g/ml konsentrasjon i karbonat/bikarbonatbuffer (pH 9,6). Forsegl platen og inkuber over natten ved 4∘C; vask platen med PBS/tween 3 ganger, og de uspesifikke bindingsstedene blokkeres av Block Solution; vask deretter platen med PBS/tween 3 ganger. Standarder og prøver fortynnes i blokkeringsløsning og 100 �l tilsettes til brønnen på platen, og platen forsegles og inkuberes ved 37∘C i 1 time. Tilsett 100 �l fortynnet deteksjonsantistoff og inkuber platen kl

C. deserticola pulver 1,27 ± 0.009 0.52 ± 0.003

C. tubulosapulver 19,81 ± 0.66 2.45 ± 0.12

C. deserticola avkok {{0}}.90 ± 0.001 0.20 ± 0,001 C.tubulosaavkok 5,90 ± 0.12 0.54 ± 0,05 Echinacoside, ECH; fenyletanoidglykosider, PeGs; verbascoside, VerBS.

37∘C i 1 time; vask platen med PBS/Tween 3 ganger. Tilsett 50 �l fargefremkallingsløsning og hold platen borte fra lyset og inkuber den ved romtemperatur i 15 minutter; 50 �l stoppbuffer tilsettes for å stoppe reaksjonen. Mål den optiske tettheten (OD) for hver brønn med en mikroplateleser satt til 405 nm på 30 min.

1.8. Statistisk analyse. Alle dataene ble representert som gjennomsnitt ± SEM (standard feil av gjennomsnittet), den signifikante forskjellen ble analysert ved t-test eller enveis ANOVA etterfulgt av Duncans multiple range-tester ved bruk av SPSS 16.0, og forskjeller mellom grupper med � < 0.05="" ble="" ansett="" som="" statistisk="">

2. Resultater

2.1. Bestemme innholdet av bioaktive hovedingredienser i C. deserticola YCMa og C.tubulosaPrøver. Fenyletanoidglykosidene som echinacoside og verbascoside anses generelt som de viktigste bioaktive ingrediensene; derav innholdet av echinacoside og verbascoside i både C. deserticola YCMa og C.tubulosaprøvene ble bestemt ved HPLC. HPLC-kromatogrammene ble vist i figuren1, og resultatene viser at det totale innholdet av fenyletanoidglykosider fra C. deserticola YCMa var omtrent det dobbelte av det fra C. tubulosa. Echinacoside- og verbascoside-vekter utgjør henholdsvis 1,27 ± 0.009 prosent og {{10}}.52 ± 0,003 prosent av pulveret fremstilt fra C. deserticola YCMa og 19,81 ± 0,66 prosent og 2,45 ± 0,12 prosent av pulveret fremstilt fra C.tubulosa. Echinacoside og verbascoside-vekter står for henholdsvis {{0}}.90 ± 0.{{10}}01 prosent og 0,20 ± 0,001 prosent av C. deserticola YCMa-avkok og 5,90 ± 0,12 prosent og 0,54 ± 0,05 prosent av pulver fremstilt fra C.tubulosa(Bord1).

2.2. Avkok av C. deserticola YCMa og C. tubulosa lindret stress- og depresjonsnivået. Halesuspensjonstest (TST) er en rask og klassisk metode for å vurdere den antidepressive effekten av legemidler hos mus [24]; i denne forskningen ble den immobile statusen, forårsaket av det kortsiktige og uunngåelige stresset ved å bli suspendert i halen, brukt som en egenskap for å gjenspeile depresjonsnivået til mus. Vi sjekket om avkok av C. deserticola YCMa og C.tubulosakunne reversere immobiliteten og fremme forekomsten av rømningsrelatert atferd. Sammenlignet med kontrollgruppene økte immobilitetsperioden for stressgruppen med 27,4 prosent; sammenlignet med stresset

Figur 1: HPLC-kromatografisk profil av fenyletanoidglykosider fra C. deserticola YCMa og C. tubulosa-pulver. Toppene 1 og 2 representerer henholdsvis echinacoside og verbascoside.

Figur 2: Effekt av C. deserticola YCMa og C. tubulosa avkok på immobilitetsperiode for halesuspensjonsmus i 5 min. Etter tilpasning ble forsøksgruppene administrert med urte Cistanche-avkok ved sonde i 21 dager og deretter suspendert i halen og bevegelsen ble overvåket i 5 minutter etter suspensjon; hver gruppe besto av 10 mus. L, M og H representerer henholdsvis lav, middels og høy; CD og CT representerer henholdsvis

C. deserticola YCMa og C. tubulosa avkok. Alle dataene ble representert som gjennomsnitt ± SEM; P< 0.05="" was="" considered="" as="" significantly="" different="" and="" was="" marked="" as="">

grupper,

grupper, gruppene behandlet med middels høy konsentrasjon av C. deserticola YCMa urteavkok viste en statistisk signifikant reduksjon av immobilitetsperioden hver med 44,1 prosent og 56,1 prosent; gruppene behandlet med middels, høy konsentrasjon av

C. tubulosa urteavkok viste en statistisk signifikant reduksjon av immobilitetsperioden hver med 41,9 prosent og 47,7 prosent (figur2). Disse resultatene indikerer at avkok av C. deserticola YCMa og C.tubulosakunne redusere stress- og depresjonsnivået til mus, og C. deserticola YCMa-avkok viste litt høyere effekt enn C.tubulosaavkok.

1.1. Avkok av C. deserticola YCMa og C. tubulosa forbedret den romlige læringen og hukommelsen til mus. Mennesker (både ungdom og voksne) som lider av depresjon er utsatt

til å lide lærevansker [28]; avkok av C. deserticola YCMa og C.tubulosaviste seg å lindre stress- og depresjonsnivået; så valgte vi å vurdere om avkok av C. deserticola YCMa og C. tubulosa kunne påvirke den romlige læringen og hukommelsen ved å bruke Morris vannlabyrint-modellen, som er mye brukt for å vurdere den romlige læringen og minnefunksjonen til relatert hjerneområde[29]. Bevegelsessporene er klassifisert i fire under søkelatensen; en rettlinjet bane viste at musene fant redningsplattformens posisjon, en tendensbane viste at musene viste en i utgangspunktet rett orientering, og den edgy typen bane viste at musene enten var i den tidlige treningsperioden eller led av demens, og prøvde å lokalisere målsted basert på instinkt; den tilfeldige søkebanen viste at mus hadde lav posisjoneringsevne og søkte målstedet målløst. Data ble innhentet i henhold til kriteriene.

Effekten av C. deserticola YCMa og C. tubulosa avkok på rominnlæring og hukommelsesevne til tilbakeholdsstressede mus er vist i figur3. Etter halesuspensjonstesten viste mus en betydelig forlenget latensperiode. Sammenlignet med stressgruppene, viste musene behandlet moderat, høy dose C. deserticola YCMa og lav, høy dose C. tubulosa avkok en forkortet latensperiode; frekvensen som mus svømte på den skjulte plattformen ble oppregulert betydelig i gruppene behandlet med moderat, høy dose C. deserticola YCMa avkok. Disse resultatene indikerer at de stressede musene hadde fordel av administreringen av urte-Cistanche-avkok og viste en forbedring i romlig læring og hukommelse.

1.2. Avkok av C. deserticola YCMa og C.tubulosaNedregulerte monoaminoksidaseaktiviteten. MAO katalyserer den oksidative deamineringen av aminer som tyramin, katekolamin og 5-hydroksytryptamin (5-HT) i hjernen og perifert vev; hemming av MAO-aktivitet resulterer i antidepressiv effekt [30]. Vi forsøkte å forklare den antidepressive effekten av C. deserticola YCMa og C.tubulosa; deretter ble MAO-aktiviteten i hjernen bestemt. Etter halesuspensjonstesten ble MAO-aktiviteten oppregulert betydelig; MAO-aktiviteten i gruppene behandlet med halesuspensjon og deretter fulgt av moderat, høy dosering

Figur 3: Effekten av C. deserticola YCMa og C.tubulosaavkok på romlærings- og hukommelsesevnen til de tilbakeholdsstressede musene. Etter tilpasning ble forsøksgruppene administrert med urte Cistanche avkok ved sonde i 21 dager og deretter testet med

R. Morris vannlabyrint for bestemmelse av romlig læring og hukommelse. L, M og H representerer henholdsvis lav, middels og høy; CD og CT representerer henholdsvis C. deserticola YCMa og C.tubulosaavkok. "#" og "∗" representerer hver P< 0.05="" and="" p="" <="">

Figur 4: Effekt av C. deserticola YCMa og C. tubulosa avkok på hjernemonoaminoksidase (MAO) aktivitet til halesuspensjon stressede mus. Etter tilpasning ble de eksperimentelle gruppene administrert med urte-Cistanche-avkok ved sonde i 21 dager og deretter suspendert i halen i 5 minutter, hver gruppe besto av 10 mus, og musene ble ofret for å høste hjernevevet og brukes til MAO-aktivitetsmåling. L, M og H representerer henholdsvis lav, middels og høy; CD og CT representerer henholdsvis C. deserticola YCMa og C. tubulosa avkok. P= 10; alle dataene ble representert som gjennomsnitt ± SEM; P < 0,05="" ble="" ansett="" som="" signifikant="" forskjellig="" og="" ble="" merket="" som="">

et avkok fra C. deserticola YCMa viste en betydelig nedgang med omtrent 13,9 prosent ~12,3 prosent; MAO-aktiviteten i gruppene behandlet med halesuspensjon og deretter høydoseavkok fra C. tubulosa viste en signifikant nedgang med ca. 13,2 prosent (figur4).Dataene viste at avkok fra både C. deserticola YCMa og C. tubulosa kunne hemme aktiviteten til MAO og kan bidra til antidepressiva

effekt og avkok av C. deserticola YCMa viste en sterkere effekt enn C. tubulosa.

1.1. Administrering av C. deserticola YCMa og C. tubulosa avkok resulterte i oppregulering av sentral dopaminkonsentrasjon og nedregulering av serumkortikosteronkonsentrasjon. Nivået på DA og NE i

Figur 5: Effekt av C. deserticola YCMa og C. tubulosa avkok på hjernenevrotransmitternivåer av halesuspensjon stressede mus. Etter tilpasning ble de eksperimentelle gruppene administrert med urte-Cistanche-avkok ved sonde i 21 dager og deretter suspendert i halen i 5 minutter, hver gruppe besto av 10 mus, og musene ble ofret for å høste hjernevevet og brukt til hjernen nevrotransmitter nivåmåling. L, M og H representerer henholdsvis lav, middels og høy; CD og CT representerer henholdsvis C. deserticola YCMa og C. tubulosa avkok. P= 10; alle dataene ble representert som gjennomsnitt ± SEM; P< 0.05="" was="" considered="" as="" significantly="" different="" and="" was="" marked="" as="">

sentral

sentralnervesystemet ble målt for å bestemme nerveeksitabilitet. Etter 4 uker med halesuspensjonstest, sammenlignet med stressgruppene, har DA-nivået for gruppene behandlet med moderat dose C. deserticola YCMa oppregulert signifikant hver med 43,5 prosent; DA-nivået til grupper behandlet med moderat dose C. tubulosa ble også oppregulert betydelig (figur5(a)). Nivået av NE var mildt oppregulert i gruppene behandlet med avkok av begge urtene sammenlignet med stressgruppene, og det ble ikke funnet noen statistisk forskjell (figur5(b)).Disse resultatene kan forklare den molekylære mekanismen til den antidepressive effekten til urten Cistanche.

Adrenokortikotropisk hormon (ACTH), et polypeptidhormon som produseres og skilles ut av den fremre hypofysen, stimulerer sekresjonen av glukokortikosteroid ved å virke på binyrebarken, zona fasciculata [31]; kortikosteron, et steroidhormon produsert av cortex i binyrene, er involvert i reguleringen av fysiologiske prosesser som energiforsterkende, immunitetsreaksjoner og stressresponser.32], så vi valgte å studere effekten av urteavkok på HPA-aksen. Og ACTH og kortikosteronkonsentrasjon i serum ble målt. Etter 4 uker med halesuspensjonstest var ACTH- og kortikosteronkonsentrasjonen i stressgruppen betydelig oppregulert (figur6).Ingen signifikante endringer ble observert i behandlingsgruppene for urte Cistanche avkok sammenlignet med stressgruppen (figur6(a)).Sammenlignet med stressgruppen ble kortikosteron-serumkonsentrasjonen i grupper behandlet med moderat, høy dose C. deserticola YCMa-avkok nedregulert betydelig; kortikosteronkonsentrasjonen i grupper behandlet med høydose C. tubulosa ble nedregulert, men ikke til en signifikant statistisk forskjell

(Figur5(b)).Dataene viste at avkok fra begge

C. deserticola YCMa og C. tubulosa kunne redusere kortikosteronserumkonsentrasjonen og kan være involvert i regulering av HPA-aksen, og avkok av C. deserticola YCMa viste en sterkere effekt enn C. tubulosa.

1. Diskusjon

I denne studien ble de antidepressive aktivitetene og forbedringen av hukommelse og læring av urten Cistanche definert, noe som kan kaste nytt lys over urtens Cistanche-funksjon og gi ledetråder til å utvide det terapeutiske bruksområdet. Tidligere studier viser at urt Cistanche er et multifunksjonelt kinesisk medikament med biologiske aktiviteter av antialdring, antioksidant, østrogene, antiosteoporotiske, afrodisiakum og anti-inflammasjonseffekter [33]. Herb Cistanche har blitt anerkjent som en behandling for nyremangel, infertilitet og kronisk forstoppelse (Pharmacopoeia Committee of China, 2010). Urte Cistanche-avkok er sammensatt av flyktige oljer, ikke-flyktige fenyletanoidglykosider (PeGs), iridoider, lignaner, alditoler, oligosakkarider og polysakkarider. Echinacoside og verbascoside blir generelt sett på som de viktigste bioaktive ingrediensene [34]. Det er fire hovedarter av Cistanche, inkludert C. deserticola YCMa, C. tubulosa, Cistanche Sinensis G. Beck og Cistanche salsa var. albiflorashi et al. [35]; vi valgte C. deserticola YCMa og C. tubulosa som vår modell for å bestemme PeG-innholdet, og C. deserticola YCMa hadde et høyere innhold av PeGs (figur1), som kan forklare den høyere effekten av C. deserticola YCMa. Resultatene indikerer at innholdet av de viktigste bioaktive ingrediensene bestemmer effekten av urten Cistanche.

Figur 6: Effekt av C. deserticola YCMa og C. tubulosa avkok på serumhormonkonsentrasjoner hos hengende stressede mus. Etter tilpasning ble forsøksgruppene administrert med urte-Cistanche-avkok ved sonde i 21 dager og deretter suspendert i halen i 5 minutter, hver gruppe besto av 10 mus, og blodet ble høstet og brukt for bestemmelsen av serum adrenokortikotrofisk hormon (ACTH) og kortikosteron (CORT) nivå. L, M og H representerer henholdsvis lav, middels og høy; CD og CT representerer henholdsvis C. deserticola YCMa og C. tubulosa avkok. P=10; alle dataene ble representert som gjennomsnitt ± SEM; P < 0,05="" ble="" ansett="" som="" signifikant="" forskjellig="" og="" ble="" merket="" som="">

Tidligere studier indikerer at urte-Cistanche-produkter er gunstige for behandling av nevrodegenerative lidelser ved å oppregulere nervevekstfaktor (NGF) i hippocampus til mus [36,37], men det er ikke rapportert forskning på antidepressiva og kognitive læringsaktiviteter til urten Cistanche i pattedyrmodellene. I denne studien ble avkok av urte Cistanche bevist å være effektiv for å lindre stressnivået og øke overlevelsesatferden i haleopphengstesten betydelig (figur2) og forbedre den romlige læringen og minnekapasiteten i vannlabyrintmodellen (figur3). Lin et al. beviste at urten Cistanche forbedret det luktassosierte minnet i fruktfluemodellen [23]; vi fokuserte vår forskning på den antidepressive effekten og tok i bruk en annen dyremodell; resultatet viste at urten Cistanche forbedret en variant av kognitiv funksjon, nemlig den romlige læringsevnen hos mus. I følge monoaminteorien er stressopplevelsen og depresjonen nært knyttet til hjernenivået til monoaminnevrotransmittere, som DA, NE, 5-HT og adrenalin [38]. Og vi fant ut at urten Cistanche-avkok kunne undergrave MAO-aktiviteten (figur4) og øke den sentrale DA-konsentrasjonen (figur5(en)). Overraskende nok ble den sentrale 5-HT-konsentrasjonen nedregulert av urte Cistanche-avkoksbehandling (data ikke vist), fordi tidligere forskning viste at den reduserte sentrale 5-HT-aktiviteten er assosiert med depresjon [39]. Dysregulering av hypothalamus-hypofyse-binyreaksen er ofte assosiert med depresjon [40], intervensjon med glukokortikoid reseptor (GR) systemet reverserte vellykket den depressive fenotypen hos mus[41], og vi fant ut at urten Cistanche lindret serumet betydelig

konsentrasjon av CORT (figur6(b)).Modulering av monoaminsystemet og HPA-aksen bidrar begge til den antidepressive effekten av urten Cistanche. Echinacoside kunne krysse blod-hjerne-barrieren fritt og virke på sentralnervesystemet [42], noe som kan forklare hvorfor urte Cistanche-avkok hadde en antidepressiv funksjon. For første gang karakteriserte vi den antidepressive egenskapen og dens forhold til kognitive forbedringsaktiviteter i musemodellen, og den foreløpige mekanismen ble utforsket. Fremdeles er mekanismen for antidepressive egenskaper til Cistanche ikke avklart på molekylært nivå, og ytterligere forskning er nødvendig for å belyse den omfattende antidepressive mekanismen til urten Cistanche.

Tatt i betraktning at urte-cistanche-avkok er en blanding av forbindelser, kan det være flere måter å urte-cistanche-avkok på som utøver den antidepressive effekten og øker læringsevnen. Oksidativt stress påvirker mange cellulære funksjoner til nevroner og overproduksjon av reaktive oksygenarter (ROS) forårsaker celleskade, apoptose og død [43]. Echinakosid ekstrahert fra stilkene til C. salsa viser en nevrobeskyttende effekt ved å redusere produksjonen av ROS og mitokondriemediert apoptose [44]; Acteosid, en ekstremt sterk antioksidativ forbindelse, kan være delvis ansvarlig for den nevrobeskyttende effekten[45]. Foruten den tradisjonelle avkoksmetoden, kan bruken av moderne farmasøytiske metoder som kontrollert frigjøring av glykosidkapsler øke effekten av urteavkok, fordi de bioaktive ingrediensene kan fordøyes og brytes ned av mage-tarmkanalen [37].

Tidligere studier indikerer at urte-Cistanche-produkter er gunstige for behandling av nevrodegenerative lidelser ved å oppregulere nervevekstfaktor (NGF) i hippocampus til mus [36,37], men det er ikke rapportert forskning på antidepressiva og kognitive læringsaktiviteter til urten Cistanche i pattedyrmodellene. I denne studien ble urte Cistanche-avkok bevist å være effektiv for å lindre stressnivået og øke overlevelsesatferden i haleopphengstest (figur2) og forbedre den romlige læringen og minnekapasiteten i vannlabyrintmodellen (figur3). Lin et al. beviste at urten Cistanche forbedret det luktassosierte minnet i fruktfluemodellen [23]; vi fokuserte vår forskning på den antidepressive effekten og tok i bruk en annen dyremodell; resultatet viste at urten Cistanche forbedret en variant av kognitiv funksjon, nemlig den romlige læringsevnen hos mus. I følge monoaminteorien er stressopplevelsen og depresjonen nært knyttet til hjernenivået til monoaminnevrotransmittere, som DA, NE, 5-HT og adrenalin [38]. Og vi fant ut at urten Cistanche-avkok kunne undergrave MAO-aktiviteten (figur4) og øke den sentrale DA-konsentrasjonen (figur5(en)). Overraskende nok ble den sentrale 5-HT-konsentrasjonen nedregulert av urte Cistanche-avkoksbehandling (data ikke vist), fordi tidligere forskning viste at den reduserte sentrale 5-HT-aktiviteten er assosiert med depresjon [39]. Dysregulering av hypothalamus-hypofyse-binyreaksen er ofte assosiert med depresjon [40], intervensjon med glukokortikoidreseptorsystemet (GR) reverserte vellykket den depressive fenotypen hos mus[41], og vi fant ut at urten Cistanche lindret serumet betydelig

konsentrasjon av CORT (figur6(b)).Modulering av monoaminsystemet og HPA-aksen bidrar begge til den antidepressive effekten av urten Cistanche. Echinacoside kunne krysse blod-hjerne-barrieren fritt og virke på sentralnervesystemet [42], noe som kan forklare hvorfor urte Cistanche-avkok hadde en antidepressiv funksjon. For første gang karakteriserte vi den antidepressive egenskapen og dens forhold til kognitive forbedringsaktiviteter i musemodellen, og den foreløpige mekanismen ble utforsket. Fremdeles er mekanismen for antidepressive egenskaper til Cistanche ikke avklart på molekylært nivå, og ytterligere forskning er nødvendig for å belyse den omfattende antidepressive mekanismen til urten Cistanche.

Tatt i betraktning at urte-cistanche-avkok er en blanding av forbindelser, kan det være flere måter å urte-cistanche-avkok på som utøver den antidepressive effekten og øker læringsevnen. Oksidativt stress påvirker mange cellulære funksjoner til nevroner og overproduksjon av reaktive oksygenarter (ROS) forårsaker celleskade, apoptose og død [43]. Echinakosid ekstrahert fra stilkene til C. salsa viser en nevrobeskyttende effekt ved å redusere produksjonen av ROS og mitokondriemediert apoptose [44]; acetonid, en ekstremt sterk antioksidativ forbindelse, kan være delvis ansvarlig for den nevrobeskyttende effekten[45]. Foruten den tradisjonelle avkoksmetoden, kan bruken av moderne farmasøytiske metoder som kontrollert frigjøring av glykosidkapsler øke effekten av urteavkok, fordi de bioaktive ingrediensene kan fordøyes og brytes ned av mage-tarmkanalen [37].

1. Konklusjoner

I denne studien fant vi at avkok av C. deserticola

YCMa og C. tubulosa viste en antidepressiv effekt og forbedret den romlige lærings- og hukommelsesevnen i musemodellen, og avkok av C. deserticola YCMa og C. tubulosa hadde en betydelig innvirkning på HPA-aksen;

C. deserticola YCMa viste en sterkere farmakologisk funksjon. C. deserticola og C. tubulosa kan ha potensialet til å bli utviklet som alternative terapimedisiner for depresjon.

Formidling

Synspunktene som uttrykkes her er forfatternes og gjenspeiler ikke nødvendigvis synspunktene til noen av disse byråene.

Interessekonflikter

Forfatterne erklærer at de ikke har noen interessekonflikter.

Anerkjennelser

Dette prosjektet ble støttet av tilskudd fra National Natural Science Foundation (81503333) og Science and Technology Support by Project i den autonome regionen Xinjiang Uygur (Kina) (200840102-15).

Referanser

[1] RC Kessler, KA McGonagle, S. Zhao, et al., "Lifetime and 12-month prevalens of DSM-III-R psychiatric disorders in the United States: results from the National Comorbidity Survey," Archives of Generell psykiatri, vol. 51, nei. 1, s. 8–19, 1994.

[2] HK Manji, GJ Moore, G. Rajkowska og G. Chen, "Neuroplasticity and cellular resilience in mood disorders," Molecular Psychiatry, vol. 5, nei. 6, s. 578–593, 2000.

[3] JD Rosenblat, RS McIntyre, GS Alves, KN ​​Fountoulakis og AF Carvalho, "Beyond monoamines-novel targets for treatment-resistant depression: A comprehensive review," Current Neuropharmacology, vol. 13, nei. 5, s. 636–655, 2015.

[4] K. Wilson og P. Mottram, "En sammenligning av bivirkninger av selektive serotoninreopptakshemmere og trisykliske antidepressiva hos eldre deprimerte pasienter: En metaanalyse," International Journal of Geriatric Psychiatry, vol. 19, nei. 8, s. 754–762, 2004.

[5] S. Vezmar, B. Miljkovic´, K. Vucˇic´evic´ et al., "Farmakokinetikk og effekt av fluvoksamin og amitriptylin ved depresjon," Journal of Pharmacological Sciences, vol. 110, nei. 1, s. 98–104, 2009.

[6] CH Halsted, "Kosttilskudd og funksjonell mat: 2 sider av en mynt?" American Journal of Clinical Nutrition, vol. 77, s. 1001S–1007S, 2003.

[7] J.-S. Tian, ​​C.-C. Liu, H. Xiang et al., "Undersøkelse av den antidepressive effekten av havtornfrøolje gjennom den GC-MS-baserte metabolomiske tilnærmingen kombinert med multivariat analyse," Food and Function, vol. 6, nei. 11, s. 3585–3592, 2015.

[8] Y. Hou, MA Aboukhatwa, D.-L. Lei, K. Manaye, I. Khan og

Y. Luo, "Anti-depressive naturlige flavonoler modulerer BDNF og

beta-amyloid i nevroner og hippocampus av doble TgAD-mus," Neuropharmacology, vol. 58, nr. 6, s. 911–920, 2010.

[9] J. Wattanathorn, P. Chonpathompikunlert, S. Muchimapura,

A. Priprem og O. Tankamnerdthai, "Piperine, den potensielle funksjonelle maten for humør og kognitive lidelser," Food and Chemical Toxicology, vol. 46, nei. 9, s. 3106–3110, 2008.

[10] M. Shirai, Y. Kawai, R. Yamanishi og J. Terao, "Tilnærming til nye funksjonelle matvarer for stresskontroll 5. Antioksidantaktivitetsprofiler av antidepressive urter og deres aktive komponenter," Journal of Medical Investigation, vol. 52, s. 249–251, 2005.

[11] PS Kumar, T. Praveen, NP Jain og B. Jitendra, "En gjennomgang av Griffonia simplicifollia - et ideelt urte-antidepressivt middel," International Journal of Pharmacy & Life Sciences, 2010.

[12] Z.-L. Jin, N. Gao, W. Xu et al., "Reseptor- og transportørbindings- og aktivitetsprofiler for albiflorin ekstrahert fra Radix Paeonia Alba," Scientific Reports, vol. 6, artikkel-ID 33793, 2016.

[13] S.-H. Lin, M.-L. Chou, W.-C. Chen et al., "En medisinsk urt, Melissa officinalis L. forbedrer depressiv-lignende oppførsel av rotter i tvungen svømmetest ved å regulere den serotonerge nevrotransmitteren," Journal of Ethnopharmacology, vol. 175, artikkelnr. 9741, s. 266–272, 2015.

[14] H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, S.-J. Shan og M.-H. Su, "De hypokolesterolemiske effektene av Cistanche tubulosa-ekstrakt, en kinesisk tradisjonell råmedisin, hos mus," American Journal of Chinese Medicine, vol. 37, nei. 6, s. 1125–1138, 2009.

[15] LI Xia, MA Yong-Qing, YX Song, JF Shui og LI Xiu-Wei, "Effekten av forskjellige plantevekstregulatorer på transplantasjonsoverlevelsesforholdet for halokyfopammodendronfrøplante og parasittisk forhold mellom cistanche deserticola," Journal of Chinese Medisinske materialer, vol. 32, s. 1651–1654, 2009.

[16] Q. Xiong, S. Kadota, T. Tani og T. Namba, "Antioxidative effects of phenylethanoids from Cistanche deserticola," Biological and Pharmaceutical Bulletin, vol. 19, nei. 12, s. 1580–1585, 1996.

[17] Y. Wu, L. Li, T. Wen og Y.-Q. Li, "Beskyttende effekter av echinacoside på karbontetraklorid-indusert levertoksisitet hos rotter," Toxicology, vol. 232, nr. 1-2, s. 50–56, 2007.

[18] T. Wang, C. Chen, M. Yang, B. Deng, GM Kirby og X. Zhang, "Cistanche tubulosa etanolekstrakt medierer rottekjønnshormonnivåer ved induksjon av testikkelsteroidogene enzymer," Pharmaceutical Biology, vol. 54, nei. 3, s. 481–487, 2016.

[19] L. Gu, WT Xiong, YL Zhuang, JS Zhang og X. Liu, "Effects of Cistanche deserticola extract on penis erectile response in castrated rats," Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 29, nei. 2, s. 557–562, 2016.

[20] SG Lin, SF Ye, JM Huang, et al., "Hvordan hemmer kinesiske medisiner som tonifiserer nyrene dopaminerge nevronapoptose?" Neural Regeneration Research, vol. 8, nei. 30, s. 2820–2826, 2013.

[21] C.-R. Wu, H.-C. Lin og M.-H. Su, "Reversering av vandige ekstrakter av Cistanche tubulosa fra atferdsmessige mangler i Alzheimers sykdomslignende rottemodell: relevans for amyloidavsetning og sentral nevrotransmitterfunksjon," BMC Complementary and Alternative Medicine, vol. 14, s. 1–11, 2014.

[22] DR Lara, LW Bisol og LR Munari, "Antidepressive, humørstabiliserende og prokognitive effekter av svært lavdose sublingualt ketamin ved refraktær unipolar og bipolar depresjon," International Journal of Neuropsychopharmacology, vol. 16, nei. 9, s. 2111–2117, 2013.

[23] W. Lin, C. Yao, J. Cheng, S. Kao, F. Tsai og H. Liu, "Molekylære veier relatert til fremme av lang levetid og kognitiv forbedring av Cistanche tubulosa i Drosophila,"

Fytomedisin, vol. 26, s. 37–44, 2017.

[24] JF Cryan, C. Mombereau og A. Vassout, "Halesuspensjonstesten som en modell for å vurdere antidepressiv aktivitet: Gjennomgang av farmakologiske og genetiske studier på mus," Neuroscience and Biobehavioral Reviews, vol. 29, nei. 4-5, s. 571–625, 2005.

[25] CV Vorhees og MT Williams, "Morris vannlabyrint: prosedyrer for vurdering av romlige og relaterte former for læring og hukommelse," Nature Protocols, vol. 1, nei. 2, s. 848–858, 2006.

[26] R. Morris, "Utviklinger av en vannlabyrint-prosedyre for å studere romlig læring hos rotter," Journal of Neuroscience Methods, vol. 11, nei. 1, s. 47–60, 1984.

[27] A. Wolf, B. Bauer, EL Abner, T. Ashkenazy-Frolinger og A.

MS Hartz, "Et omfattende atferdstestbatteri for å vurdere læring og minne hos 129S6/Tg2576-mus," PLoS ONE, vol. 11, nei. 1, artikkel-ID e0147733, 2016.

[28] BP Rourke, GC Young og AA Leenaars, "En barndoms lærevansker som disponerer de som er rammet for depresjon og selvmordsrisiko for ungdom og voksne.," Journal of Learning Disabilities, vol. 22, nei. 3, s. 169–175, 1989.

[29] R. D'Hooge og PP De Deyn, "Applikasjoner av Morris vannlabyrint i studiet av læring og hukommelse," Brain Research Reviews, vol. 36, nei. 1, s. 60–90, 2001.

[30] JC Shih, K. Chen og MJ Ridd, "Monoaminoksidase: fra gener til atferd," Annual Review of Neuroscience, vol. 22, s. 197–217, 1999.

[31] SR Bornstein, WC Engeland, M. Ehrhart-Bornstein og JP Herman, "Dissociation of ACTH and glucocorticoids," Trends in Endocrinology and Metabolism, vol. 19, nei. 5, s. 175–180, 2008.

[32] S. Whirledge og JA Cidlowski, "Glukokortikoider, stress og fertilitet," Minerva Endocrinologica, vol. 35, nei. 2, s. 109–125, 2010.

[33] L. Wang, H. Ding, H. Yu et al., "Cistanches Herba: Chemical Constituents and Pharmacological Effects," Chinese Herbal Medicines, vol. 7, nei. 2, s. 135–142, 2015.

[34] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao og C.-M. Tzeng, "Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): En av de beste farmasøytiske gaver innen tradisjonell kinesisk medisin," Frontiers in Pharmacology, vol. 7, artikkel 41, 2016.

[35] HM Shi, J. Wang, MY Wang, PF Tu og XB Li, "Identifisering av Cistanche-arter ved kjemisk og inter-enkel sekvens gjentatt fingeravtrykk," Biological and Pharmaceutical Bulletin, vol. 32, nei. 1, s. 142–146, 2009.

[36] JG Choi, M. Moon, HU Jeong, MC Kim, SY Kim og

MS Oh, "Cistanches Herba forbedrer læring og hukommelse ved å indusere nervevekstfaktor," Behavioral Brain Research, vol. 216, nr. 2, s. 652–658, 2011.

[37] Q. Guo, Y. Zhou, C.-J. Wang et al., "En åpen, ikke-placebokontrollert studie på cistanche tubulosa glykosidkapsler (Memoregain®) for behandling av moderat Alzheimers sykdom," American Journal of Alzheimer's Disease and other Dementias, vol. 28, nei. 4, s. 363–370, 2013.

[38] M. Popoli, M. Gennarelli og G. Racagni, "Modulation of synaptic plasticity by stress and antidepressants," Bipolar Disorders, vol. 4, nei. 3, s. 166–182, 2002.

[39] AJ Cleare, A. McGregor og V. O'Keane, "Neuroendokrine bevis for en sammenheng mellom hypotyreose, redusert sentral 5-HT-aktivitet og depresjon," Clinical Endocrinology, vol. 43, nei. 6, s. 713–719, 1995.

[40] NL Lopez-Duran, M. Kovacs og CJ George, "Hypothalamus-hypofyse-binyreakse dysregulering hos deprimerte barn og ungdom: en metaanalyse," Psychoneuroendocrinology, vol. 34, nei. 9, s. 1272–1283, 2009.

[41] N. Barden, "Implication of the hypothalamus-hypofyse-binyre-aksen i fysiopatologien til depresjon," Journal of Psychiatry and Neuroscience, vol. 29, nei. 3, s. 185–193, 2004.

[42] M. Zhu, C. Lu og W. Li, "Forbigående eksponering for echinacosid er tilstrekkelig til å aktivere Trk-signalering og beskytte nevronceller fra rotenon," Journal of Neurochemistry, vol. 124, nr. 4, s. 571–580, 2013.

[43] T.-H. Lu, C.-C. Su, F.-C. Tang et al., "Kloreddiksyre utløser apoptose i nevronale celler via en reaktiv oksygenarter-indusert endoplasmatisk retikulumstresssignalvei," Chemico-Biological Interactions, vol. 225, s. 1–12, 2015.

[44] Y.-H. Wang, Z.-H. Xuan, S. Tian og G.-H. Du, "Echinacoside beskytter mot 6-hydroksydopamin-indusert mitokondriell dysfunksjon og inflammatoriske responser i PC12-celler ved å redusere ROS-produksjon," Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, vol. 2015, artikkel-ID 189239, 9 sider, 2015.

[45] WF Chiou, LC Lin og CF Chen, "Acteosid beskytter endotelceller mot frie radikaler-indusert oksidativt stress," Journal of Pharmacy and Pharmacology, vol. 56, nei. 6, s. 743–748, 2004.