HPLC-bestemmelse av Echinacoside i Cistanche Cistanche

HPLC-bestemmelse av echinacosid i Cistanche Cistanche

For mer informasjon:ali.ma@wecistanche.com

Objektiv:HPLC bestemte mengden avechinacosideiCistanchemalt i flytende nitrogentilstand så vel som i naturlig lufttørket tilstand, sammenlignet medvill cistancheogkunstig dyrket Cistanche.

Metoder:lc{{0}}et HPLC-system (Shimadzu, Japan) ble brukt. Kolonnen var YMC inertsil ods-sp (4,6 mm × 150 mm, 5 μm; YMC Co Ltd, Japan); Mobil fase: acetonitril-metanol -1 prosent maursyre (10:15:75); Deteksjonsbølgelengde 334 nm; Strømningshastighet 0,7 mg · ml-1. Kolonnetemperatur 30 grader C.

Resultater:forskjellige behandlingsforhold hadde en veldig tydelig effekt på echinakosidinnholdet, med generelt høyere nivåer av echinakosid i Cistanche malt under flytende nitrogen enn i de som ble malt under naturlige lufttørkede forhold; Innholdet av den aktive ingrediensen i villCistanchevar mye høyere enn for kunstig kultur.

Klikk for å ekstrahere pulverprodukter fra Cistanche

Cistanche er en truet art, en parasittisk plante som bor i røttene til Clostridium, Salix rubrum. I Kina er Cistanche hovedsakelig distribuert i Indre Mongolia, Ningxia, Gansu og Xinjiang, med et utmerket rykte for "ørkenginseng", som er av stor medisinsk verdi. Dens viktigste medisinske ingredienser er fenyletanoliske glykosider, som kan deles inn i echinakosid, bladkohosid, Cistanche og andre avhengig av deres substituenter. Blant dem har echinacoside forbedret seksuell funksjon, antioksidant- og frie radikal-fjernende effekter, men har også noen anti-apoptotiske effekter. Siden 1980-tallet har HPLC-teknologi, som gir en enkel og rask metode for separering av fenyletanoliske glykosider, vært mye brukt i separering av naturlige produkter. En HPLC-metode ble valgt for å analysere innholdet i Cistanche, den viktigste aktive bestanddel av vill og kunstig dyrket Cistanche, ved forskjellige vekstperioder, og gir et vitenskapelig grunnlag for rasjonell utvikling og utnyttelse av Cistanche og for effektiv evaluering av kvaliteten.

Instrumenter og reagenser

Shimadzu, Japan lc-20et HPLC-apparat, lc-20ved tandem dobbel stempelpumpe, cto-20en kolonneovn, spda-20en UV Vis dobbel bølgelengdedetektor; Kunshan kq-100 ultralydrenser; Acetonitril (kromatografisk ren, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Metanol (kromatografisk ren, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); maursyre (kromatografisk ren, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); destillert vann

Kontroll: echineosid, innhold Større enn eller lik 98,43 prosent (Shanghai Yuanye Bio Technology Co., Ltd.).

Fem prøver av Cistanche: kunstig plantet i ett år med følgende Cistanche, kunstig plantet for Cistanche, kunstig tørket Cistanche, vill Cistanche, og kunstig plantet i mer enn tre år med Cistanche.

2 metoder og resultater

2.1 bestemmelse av kromatografiske forhold

For å skille toppen av det målte echineosid i LC-kromatogrammet fra andre stoffer, samt kontrollere pumpetrykket og tidstabellen til å være innenfor et passende område, ble den eksperimentelle modifikasjonen av de kromatografiske forholdene utført, og etter optimeringseksperimenter med mobil fase, ble det konkludert med at jo høyere temperatur, jo kortere retensjonstid og lavere konsentrasjon, jo kortere pumpetrykk og lavere retensjonstid, men topphøyden ble lavere, noe som var ugunstig for mål. Den mobile fasen ble til slutt bestemt til å være acetonitril-metanol-1 prosent maursyre (10:15:75), deteksjonsbølgelengden 334 nm, strømningshastigheten 0,7 ml/min og kolonnetemperaturen 30 grader C, i henhold til de objektive forholdene for romtemperatur og pumpens maksimale lagertrykk, noe som resulterte i rikelig informasjon med skarpe toppformer og god separasjon av bestanddelene.

2.2 bestemmelse av kolonner

YMC-Inertsil ODS-SP(4,6 mm × 150 mm,5 μm;YMC Co Ltd, Japan).

2.3 eksperimentell oppløsningsfremstilling

2.3.1 tilberedning av standardløsninger

En passende mengde echineosidstandard ble nøyaktig veid og tilsatt mobilfase acetonitril-metanol -1 prosent maursyre (10:15:75) for å lage 0.0 6 mg · ML - 1, 0.05 mg · ML {{1{{20}}}}, 0,04 mg · ML - 1 , 0,03 mg · ML - 1, 0,02 mg · ML - 1, 0,01 mg · ML - 1 og 0,005 mg · ML - 1 løsninger av echinacoside-standard.

2.3.2 klargjøring av testløsning

Passende mengder kunstig plantet fersk Cistanche (under ett år), kunstig fersk Cistanche og villfersk Cistanche ble malt til pulver med en morter under flytende nitrogen; Dessuten ble en passende mengde av de ovennevnte 3 Cistanche kuttet i blokker, lufttørket naturlig i skyggeventilasjon, og etter tørking ble den pulverisert og malt til pulver. Kunstig tørr cistanche og vill over tre år tørre Cistanche ble malt direkte inn i pulveret. 0,5 g Cistanche-pulver fremstilt ovenfor ble tatt og plassert i et sentrifugerør, 25 ml mobil fase ble tilsatt, veid og bløtlagt i 30 minutter, sonikert i 40 minutter, avkjølt og deretter veid igjen for å gjøre opp den manglende vekten med mobil fase, ristet og sentrifugert, og supernatanten ble tatt for 0,45 μM mikroporøs filtermembranfiltrering.

2,4 plott av regresjonskurver for standardprøven av echinacoside

De forberedte standardprøvene av echineosid ble injisert i LC-apparatet separat, og konsentrasjonen av kontrollen (mg · L{{0}}) ble brukt som abscisse, og de tilsvarende toppområdene ble ordinert for å plotte standardkurve, som resulterer i regresjonsligningen: y=66 867 100x-46 360.83, R2=0.98637, som viste echineosiden ved 0,1 ~ 1,2 ug innenfor et godt lineært forhold.

3 Diskusjoner

Echinacoside er en av de viktigste aktive komponentene i Cistanche, som godt kan representere det kjemiske grunnlaget for den farmakologiske effekten av Cistanche, noe som gjør at kvalitetsevalueringen av det medisinske materialet og dets farmakologiske effekt samsvarer, og forbedrer relevansen av Cistanche-kvalitetsevaluering.

De ulike behandlingsforholdene hadde en klar effekt på echinakosidinnholdet, med generelt høyere nivåer av echinakosid i Cistanche malt under flytende nitrogen enn i de som ble malt under naturlige lufttørkede forhold. Vanlig lufttørking reduserte mengden echineosid, som kan ha blitt konsumert under lufttørking eller omdannet. For å forhindre reduksjon av innholdet av aktiv ingrediens og garantere effektiviteten til Cistanche, bør en passende behandling velges.

Konsekvent mente de fleste at det kunstige dyrkingsmiljøet i Cistanche så vel som vekstvaner ikke kunne skilles fra naturen uten forskjell i kvalitet, hadde en tendens til å bare legge vekt på utbytte og analyserte ikke kvalitet. Den nåværende studien viste at mengden kunstig dyrket Cistanche echinacoside var lavere enn mengden av vill Cistanche echinacoside. Den høyeste var {{0}}.3360 prosent av vill cistanche og den laveste var 0.007 0 prosent av kunstig Cistanche. Derfor må det fortsatt studeres i dyrkingsteknologi for å forbedre innholdet av aktive ingredienser.

Kvaliteten på Cistanche avhenger av mengden av dens aktive ingrediens, echinacoside, som igjen har et sterkt forhold til sesongen, tidspunktet og høstingsmetoden, så innhøsting av Cistanche bør ta hensyn til akkumuleringsstatusen til den aktive ingrediensen og stadium av vekst og utvikling. Vurder både kvalitet og utbytte.

Metoden nevnt i denne artikkelen er enkel, presis, reproduserbar og nøyaktig for å bestemme echineosid. Nyttig for Cistanche-bestemmelse.