Identifikasjon av navgener assosiert med utvikling av akutt nyreskade

Ta kontakt med:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Xiao Lin Jianchun Li Ruizhi Tan Xia Zhong Jieke Yang Li Wang

Laboratorium for organfibroseprofylakse og behandling ved å kombinere tradisjonell kinesisk og vestlig medisin, forskningssenter for integrert tradisjonell kinesisk og vestlig medisin, tilknyttet sykehus for tradisjonell medisin, Southwest Medical University, Luzhou, Kina

bulk cistanche anmeldelser:veldig bra fornyrefunksjon

Nøkkelord

Vektet gen co-ekspresjon nettverksanalyse · Akuttnyreskade·Rplp1.Lgals1

Abstrakt

Bakgrunn: Akuttnyreskade(AKI) er et alvorlig klinisk syndrom som forårsaker en dyp medisinsk og sosioøkonomisk byrde over hele verden. Denne studien hadde som mål å utforske underliggende molekylære mål relatert til progresjonen av AKl. Metoder: En offentlig database stammer fra NCBI GEO-databasen (serienummer: GSE121190) og en veletablert og objektiv metode for vektet gen co-ekspresjonsnettverksanalyse (WGCNA) for å identifisere knutepunktgener og potensielle veier ble brukt. Videre ble de unbiasedhub-genene validert i 2 klassiske modeller av AKl i en gnagermodell: kjemisk etablert AKI av cisplatin- og iskemi-reperfusjon-indusert AKI. Resultater: Totalt 17 moduler ble til slutt oppnådd ved den objektive metoden til WGCNA, hvor genene i den turkise modulen viste en sterk korrelasjon med utviklingen av AKl. I tillegg viste resultatene av genontologi at genene i den turkise modulen var involvert i nyreneskadeog nyrefibrose. Dermed ble hub-genene ytterligere validert ved eksperimentelle metoder og først og fremst oppnådd Rplp1 og Lgals1 som nøkkelkandidatgener relatert til progresjonen av AKI ved fordelen av kvantitativ PCR, Western blotting og in situ vevsfluorescens. Det er viktig at uttrykket av Rplp1 og Lgals1 på proteinnivå viste en positiv korrelasjon med nyrefunksjon, inkludert serum Cr og BUN. Konklusjoner: Ved fordelen av den objektive bioinformatikkmetoden og påfølgende eksperimentell verifisering, legger denne studien grunnlaget for patogenesen og utviklingen av terapeutiske midler av AKI.

Introduksjon

Akuttnyreskade(AKI) er et vanlig klinisk syndrom, inkludert en rekke patofysiologiske prosesser [1, 2]. Faktisk er gjenopprettingen av nyrefunksjonen ved AKI ofte ufullstendig og utvikler seg gradvis til CKD, som til slutt utvikler seg til ESRD [3]. AKI er en sentral bidragsyter til CKD og påfølgende ESRD [4]. I progresjonen av AKI-overganger til CKD, manifesteres strukturelle abnormaliteter som matrise-ekspansjonsavsetning i både mesangium og tubulointerstitium. Rettet mot

på nyrefibrose etter at AKI har blitt ansett for å være en terapeutisk tilnærming for å minimere overgangene [5–7].

Forhøyet plasma Cr anses å være et klassisk kriterium for diagnostisering av AKI de siste tiårene. Men det er kanskje ikke en riktig biomarkør siden det ofte antyder balansen mellom produksjon og utskillelse av Cr [8]. Selv om det er presserende å eliminere kort- og langsiktige utfall av AKI, er terapeutiske terapier og biomarkører for tidlig oppdagelse fortsatt begrenset. I tillegg er det for tiden ingen klinisk gyldige biomarkører for diagnostisering av nyrefibrose etter AKI. Derfor er det fordelaktig å utvikle flere terapeutiske terapier og finne ut de potensielle biomarkørene for behandling av fibrose og forsinke progresjonen [1, 8].

På grunn av mangelfulle metoder for molekylærbiologi, er det fortsatt visse begrensninger i den omfattende utforskningen av hele det biologiske systemet i sykdommer [9]. Som en systematisk biologisk metode for å beskrive de genetiske assosiasjonsmønstrene mellom forskjellige prøver, brukes vektet gen-samekspresjonsnettverksanalyse (WGC-NA) hovedsakelig for å screene og identifisere svært samarbeidende moduler. I henhold til interniteten til modulen og forholdet mellom moduler og fenotyper, har den blitt mye brukt i studiet av omics-analyse for å utvinne potensielle biomarkører eller terapeutiske mål [10–12]. Sammenlignet med data som kun fokuserer på differensielt uttrykk, har WGCNA følgende fordeler: det kan dra full nytte av informasjon, assosiere interessante vekslinger av fenotyper og unngå defektene ved differensiell uttrykksanalyse som kunstig setter terskler. Dessuten kan WGCNA ikke bare analysere mRNA-nivået til prøver, men også brukes til mikro-RNA og proteomikkforskning, noe som er til stor hjelp for å finne potensielle biologiske markører og terapeutiske mål [13, 14].

I denne studien utførte vi en veletablert bioinformatisk metode – WGCNA – for å analysere ekspresjonsprofilen (NCBI GEO serienummer: GSE121190) og hadde som mål å identifisere de potensielle veiene og genene assosiert med progresjonen av AKI. Viktigere, vi brukte eksperimentelle metoder for å verifisere nav-genene ytterligere, for å gi ny innsikt for forekomst, utvikling og behandling av AKI.

cistanche reddit nyrekurmetode

Materialer og metoder

Dataforbehandling

Datasettet ble hentet fra GEO-databasen. I denne studien ble 12 prøver av GSE121190-datasettet brukt til WGCNA-analyse. Tolv prøver inkluderte kontrollgruppen og folsyreindusert 3-/7-/14-dag AKI-gruppe (3 prøver per gruppe). R-pakken "limma" brukes til bakgrunnskorreksjon og normaliseringsbehandling med originaldata. Hvis flere prober samsvarer med 1 gen, beregnes gjennomsnittsverdien som genekspresjonsverdien [9, 15].

Samuttrykksnettverkskonstruksjon og funksjonsanalyse

Deretter beregnes den myke terskelen av WGCNA-algoritmen. Den skala-uavhengige verdien og gjennomsnittlig tilkobling av moduler under forskjellige myke terskler ble testet med gradientmetoden for å bestemme den passende myke terskelen [13, 16, 17]. Ved å velge passende myke terskelverdier, ble samekspresjonsnettverket konstruert for å sikre autentisiteten til resultatene, og minimumsantallet av gener i hver modul var ikke<30. then,="" use="" the="" r="" package="" "clusterprofiler"="" toolkit="" to="" perform="" go="" analysis="">

Verifikasjon av Hub Gene

Deretter analyserte vi hub-genene i henhold til terskelverdien i hver modul og visualiserte dem ved hjelp av Cytoscape-programvare. Nav-genene ble behandlet som følgende kriterium: (a) absolutt verdi av gensignifikans (GS), FA 3/7/14 dager større enn eller lik 0.2, og (b) genene i Hovedmodulen ble analysert av STRING-databasen for å generere protein-protein-interaksjonsnettverket (PPI), og de 5 beste genene med høyest tilkobling ble behandlet som hub-gener for ytterligere verifisering [20].

Cisplatin- og hypoksi-iskemi-induserte dyremodeller

C57BL/6 hannmus (SPF-nivå, 6∼8-uker gamle, 20-25 g) ble kjøpt fra Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd. (SCXK [Sichuan] 2015-030) og plassert og avlet under standard pleieforhold ved Experimental Animal Center ved Southwest Medical University (SYXK [Sichuan] 2018-065). Musene

Fig. 1. Konstruksjon av kollaborativ uttrykksmodul. Et clustering-dendrogram med 12 prøver. B Analyse av nettverkstopologi for ulike myke terskelverdier (effekt). C Samuttrykksmodul konstruert av den dynamiske hybridalgoritmen. Hver bladnode representerer et gen, og de forskjellige fargene representerer forskjellige moduler i trediagrammet.

ble klassifisert i 3 grupper (n=6 per gruppe): kontroll, Cis-AKI og IRI-AKI; Mus i Cis-AKI-gruppen ble injisert med cisplatin (Sigma-Aldrich, USA) (15 mg/kg) ved intraperitoneal injeksjon [21]. Mus i IRI-gruppen ble bedøvet med 1 prosent pentobarbitalnatrium og plassert på et lite termostatisk elektrisk teppe for å holde kroppstemperaturen på 36 grader. Etter anestesi ble bilaterale flankerende snitt tatt, og de arteriovenøse arteriene ble klemt fast

med arterielle klips i 35 min. Saltvann ble tilsatt dråpevis for å beholdenyrerfuktig hvert 5. min. Etter at arterieklemmen ble fjernet, ble snittene suturert, og musene ble plassert i 37 graders miljø [22, 23]. På slutten av forsøksperioden ble musene drept på henholdsvis dag 3 og 7. Muse blodprøver ble

oppnådd før cervikal dislokasjon. Alle eksperimentelle prosedyrer ble godkjent av den etiske komiteen ved Southwest Medical University (godkjenningsnummer: 201812-55).

Histologisk analyse og påvisning av nyrefunksjon

Denyreble laget til parafinseksjoner i henhold til konvensjonelle metoder. Kort fortaltnyrevev ble fiksert med 10 prosent formaldehyd, dehydrert og innebygd i parafin [24]. Seksjonene ble dehydrert og farget med hematoxylin og eosin (Beyotime, Kina). Til slutt ble seksjonene fotografert med et virtuelt lysbildemikroskop (VS120-S6-W, Olympus, Japan).Samtidig ble serum Cr og BUN målt i henhold til instruksjonene for settet (Nanjing JianCheng, Kina).

RNA-isolering og kvantitativ PCR

Totalt RNA ble ekstrahert ved bruk av et RNA-ekstraksjonssett (Tiangen, Beijing) og komplementært DNA ble oppnådd ved bruk av reverstranskripsjonssettet (Promega, Shanghai, Kina) i henhold til produsentens instruksjoner. Deretter ble kvantitativ PCR utført i LightCycler® 480 II Real-Time PCR System (Roche, Tyskland). Primere ble syntetisert av Sangon Biotech (Shanghai, Kina), og sekvenser er tilgjengelige i tabell 1.

Western Blot

Totale proteiner ble isolert og oppløst i RIPA-buffer. Deretter ble proteinkonsentrasjoner påvist ved bruk av et BCA Protein Assay Kit (Beyotime Biotechnology, Kina). Proteinprøvene ble kjørt på 12 prosent natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgel og overført til PVDF-membraner (Millipore, Danvers, MA, USA). Membraner ble blokkert med 5 prosent bovint serumalbumin ved romtemperatur i 1 time og inkubert ved 4 grader over natten med de indikerte primære antistoffene: anti-Lgals1 (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA, 1:1,{{10 }}) og anti-Rplp1-antistoffer (Invitrogen, Waltham, MA, USA, 1:500). Etterpå ble PVDF-membraner vasket med Tris-bufret saltvanns Tween og inkubert kl.

romtemperatur i 1 time med et sekundært antistoff (Invitrogen, Waltham, MA, USA; 1:10,000). Bånd ble visualisert ved hjelp av ECL Chemiluminescence Kit (Thermo, Waltham, MA, USA) og analysert ved hjelp av ImageJ-programvare.

In situ immunfluorescens

For vevsimmunfluorescens,nyrevev ble fiksert med 10 prosent formaldehydløsning og dehydrert med henholdsvis 10, 20 og 30 prosent sukrose, etterfulgt av innleiring i OCT. Prøvene ble deretter laget til 4-μm seksjoner og vasket 3 ganger med PBS i 5 min. Vevene ble blokkert med 5 prosent BSA i 1 time ved romtemperatur og deretter inkubert ved 4 grader over natten med de angitte primære antistoffene: anti-Lgals1 (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA; 1:200) og anti-Rplp1 antistoffer (Invitrogen, Waltham, MA, USA; 1:100). Dagen etter ble vev vasket med PBS i 5 minutter 3 ganger, etterfulgt av inkubasjon med Alexa Fluor® 488-konjugerte sekundære antistoffer (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA; 1:200) og ved romtemperatur for 1 t. Bildene ble tatt med et virtuelt lysbildemikroskop (VS120-S6-W, Olympus, Japan).

Statistisk analyse

Sanntids PCR og Western blot statistiske analyser ble utført av GraphPad Prism 7.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). Enveis ANOVA ble brukt hvis det eksisterer mer enn 2 sammenligningsgrupper. p < 0.05="" ble="" betraktet="" som="" en="" statistisk="">

Fig. 3. Funksjonsanalysen av den turkise modulen. En anrikningsanalyse for genfunksjoner av den turkise modulen. B PPI-nettverk av hub-genene i den turkise modulen, og resultatene ble visualisert av Cytoscape. PPI, protein-protein interaksjon; ECM, ekstracellulær matrise.

Resultater

Dataforbehandling

De 12 prøvene av array-data i det nedlastede datasettet GSE121190 ble forhåndsbehandlet ved å bruke limma-pakken til R-språket. For å få gener assosiert med AKI, er det nødvendig å sammenligne genuttrykksendringer mellom normale og AKI-prøver og screene ut de 25 prosentene av genene før variansen. Som et resultat ble det oppnådd totalt 5418 gener for sistnevnte WGCNA-analyse.

Konstruksjon av Collaborative Expression Module

Først av alt ble prøver først gruppert for å fjerne uteliggere ved hjelp av R language hclust-verktøyet. Resultatene er presentert i figur 1A. Deretter målte vi uavhengigheten og den gjennomsnittlige tilkoblingen til moduler ved forskjellige terskler. Som vist i figur 1B, kan det bedømmes fra figuren at når terskelverdien er lik 8, noe som ikke bare gjør den gjennomsnittlige tilkoblingsgraden til nettverket ikke for lav, men også sikrer at nettverket som er konstruert er nær det skalafrie Nettverk.

I neste trinn konverterte vi tilstøtningsmatrisen til en topologisk overlappingsmatrise for å redusere støy og falske korrelasjoner. Et systemklyngetre ble etablert gjennom en topologisk overlappingsmatrise, som vist i figur 1C. Og antallet gener i hver modul ble satt til ikke mindre enn 30 av den dynamiske hybridskjæralgoritmen. Til slutt ble 17 moduler hentet fra systemklyngetreet, og antall gener inneholdt i hver samekspresjonsmodul er vist i tabell 2.

Nøkkelmoduler og hub-genscreening

Etterpå analyserte vi de 3 beste modulene (brune, blå og turkise moduler) og søkte å finne ut navgenene. Ekspresjonsmønstrene til gener i de 3 modulene ble analysert. Som presentert i figur 2 viste resultatet at blå og brune moduler er negativt korrelert med AKI-progresjon, mens den turkise modulen er positivt korrelert med AKI-progresjon. Vi utførte deretter funksjonsanalysen i hver modul og fant ut at genene i de brune, blå og turkise modulene er strengt relatert tilnyre, utvikling av genitourinary system, noen essensielle metabolske prosesser og ekstracellulær matrise (ECM) avsetning, som er strengt relatert til nyrefibrose; Spesielt antas den turkise modulen å spille en viktig rolle i utviklingen av nyrefibrose etter AKI (detaljer presentert i Fig. 3A og se netttillegg Fig. 1A, 2A; se www.karger.com/doi/ 10.1159/000511661 for alt materiell på nett). Vi søkte deretter å finne hub-gener i hver modul, og etter foreløpig filtrering ble de 5 beste genene – Lgals1, Rplp1, Col3a1, Col6a2 og Mgp – i den turkise modulen behandlet som hub-gener (som vist i fig. 3B). Vi utførte også en lignende analyse i de blå og brune modulene, men klarte ikke å finne hub-gener med tanke på deres ekspresjonsmønstre og GS (som presentert i online-tillegg Fig. 1B, 2B).

Evaluering av histologisk patologi og nyre

Funksjon

Deretter konstruerte vi Cis-AKI og IRI-AKI dyremodeller. Som vist i netttillegg. Figur 3a, HE-fargingsresultater antydet at tubulær nekrose eksisterte i Cis-AKI/IRI-AKI-modeller, ogskadeble fremhevet over tid. I mellomtiden kunne vi også observere at sammenlignet med kontrollgruppen, en rask økning i serum Cr og BUN på en tidsavhengig måte. Samlet indikerte alle disse resultatene den vellykkede konstruksjonen av AKI-dyremodeller.

Verifikasjon av Hub Gene

For ytterligere å bekrefte påliteligheten til WGCNA-metoden og screene hub-gener nært relatert til progresjonen av nyrefibrose, på grunnlaget ovenfor, hadde vi som mål å validere uttrykket av topp 5 hub-gener i Cis-AKI og IRI-AKI dyremodeller med fordel. av sanntids PCR, Western blotting og in situ immunfluorescens. mRNA-ekspresjonsnivåene til Lgals1, Rplp1, Col3a1, Col6a2 og Mgp inyreav mus ble oppdaget ved sanntids PCR. Det er mange forskningsrapporter som tyder på at Col3a1, Col6a2 og Mgp er relatert til prosessen med nyrefibrose [23, 25, 26]. For Lgals1 og Rplp1 er det imidlertid ikke gjort studier på nyrefibrose etter AKI, så Western blot og in situ immunfluorescens ble brukt for å verifisere uttrykket av Lgals1 og Rplp1 ytterligere. Som vist i figur 4B, sammenlignet med den normale gruppen, ble ekspresjonsnivåene av Lgals1 og Rplp1 i Cis-AKI og IRI-AKI mus også betydelig økt. Videre evaluerte vi plasseringen av Lgals1 og Rplp1 ved in situ immunfluorescens. Som vist i figur 5 er Rplp1 hovedsakelig lokalisert i glomeruli og renal tubular, og Lgals1 distribueres i interstitial og renal tubular. Viktigere, vi validerte også korrelasjonen mellom Rplp1/Lgals1 og BUN/Cr, og resultatene indikerte at Rplp1/Lgals1 på proteinnivået var positivt korrelert med BUN/Cr (alle R > 0.5,p < 0.05)="" (fig.="">

Diskusjon

Økende bevis tyder på at AKI til slutt vil utvikle seg til CKD/ESRD, med høyere forekomst [4, 27]. Så langt er det begrensede terapier på overgangen fra AKI til CKD [28–30]. Derfor er en bedre forståelse av den patofysiologiske mekanismen og identifisering av potensielle biomarkører til stor hjelp for å forhindre denne overgangen og forbedre prognosen. I denne studien utførte vi WGCNA for å analysere mikroarray-data relatert til overgangen fra AKI til CKD. Totalt 17 moduler ble oppnådd, og de 3 viktigste genmodulene ble brukt for videre analyse. Resultatene fra denne studien antydet at de 3 genmodulene er nært beslektet med

Fig. 4. Validering av hub-genene i den turkise modulen. En kvantifisering av mRNA-ekspresjonen av Lgals1, Col3a1, Rplp1, Mgp og Col6a2 ved Q-PCR. B Western blot ble brukt for å undersøke det indikerte proteinuttrykket. C Kvantifisering av proteinuttrykk ved skanning av densitometri. ***p < 0.001="" sammenlignet="" med="" kontrollgruppen.="" d,="" e="" korrelasjonen="" mellom="" rplp1/lgals1="" og="" bun/cr="" (alle="" r=""> 0,5,p <>

Fig. 5. Validering av plasseringen av hub-genene i den turkise modulen. A, B Plasseringen og uttrykket av Lgals1 og Rplp1 ved henholdsvis in situ immunfluorescenser.

utvikling av nyrefibrose etter AKI i GO-klassifisering, for eksempel utvikling av nyresystem, renal vaskulær utvikling [31, 32], noen metabolske prosesser [33, 34], mitokondriell indre membran, organell indre membran og ECM [35–37 ]. ECM-ubalanse er en viktig årsak til nyrefibrose. Etter AKI påvirkes fibrose av flere faktorer som akkumulerte inflammatoriske celler, aktiverte myofibroblaster og så videre [30, 33]. Derfor fokuserte denne studien på den turkise modulen da modulen er nært knyttet til ECM.

Deretter filtrerte vi genene i den turkise modulen ved å beregne GS, etterfulgt av generering av PPI-nettverket. Fra PPI-nettverket i den turkise modulen kan det konkluderes med at 6 gener S100a6, Col3a1, Col6a2, Mgp, Rplp1 og Lgals1 viste den høyeste tilkoblingen med andre nabogener og plassert i sentrum av PPI-nettverket. S100a6 er kodet ved å være medlem av S100-proteinfamilien. Det er rapportert i litteraturen at S100a6 kan regulere celleproliferasjon og delta i immunmedierte patologiske prosesser med nyreepitel-mesenkymal overgang og fibrose [38, 39]. Col3a1 og Col6a2 er henholdsvis kollagen type III alfa-1 og kollagen type VI alfa-2 kjeder. De koder for kollagen, binder seg til ekstracellulære maskineriproteiner og er ekstremt viktige i cellematrisekomponenter. Når fibrose oppstår i organer som lever og nyre, er uttrykket av disse kollagenene forhøyet, noe som er en essensiell indikator for å bedømme utviklingen av sykdommen og observasjonen av den terapeutiske effekten [23, 25]. Mgp, en matrise av Gla-protein, er et medlem av osteocalcin/Mgp-familien som kommer til uttrykk etter CKD og er assosiert med nyreprognose [26, 40]. I tråd med tidligere studier avslørte vår forskning også at S100a6, Col3a1, Col6a2 og Mgp er potensielle tidlige diagnostiske markører for nyrefibrose etter AKI.

Rplp1, et gen som koder for et ribosomalt protein som er en del av 60S-underenheten, spiller en viktig rolle i forlengelsestrinnet i proteinsyntesen. Rplp1 er sterkt uttrykt i flere humane kreftceller og mangel på det vil påvirke proteinsyntesen, noe som fører til apoptose [41, 42]. Lgals1, også kjent som Galectin-1, er medlem av -galacto-side-bindende proteinfamilien og spiller en rolle i å regulere apoptose, celleproliferasjon og celledifferensiering. Lgals1 er et forskningsfelt innen svulster, og mange nyere studier har rapportert at det også spiller en viktig rolle i prosessen med organfibrose. Det har blitt indikert at Lgals1 er sterkt uttrykt i nyrer av type I og type II diabetes og er en ny markør for nyrefibrose [43-45]. Det er imidlertid verdt å merke seg at Rplp1 og Lgals1 ikke er rapportert ved nyrefibrose etter AKI. I denne studien har vi foreløpig bevist at Rplp1 og Lgals1 kan brukes som potensielle biomarkører i nyrefibrose etter AKI ved bioinformatikk og eksperimentell måte. Våre flere eksperimentelle analyser indikerte at Lgals1 og Rplp1 viser dramatisk økt i nyrene til IRI-AKI og Cis-AKI, og uttrykket av de 2 genene økes etter 3 dager og reduseres etter 7 dager, noe som er i samsvar med resultatene analysert av WGCNA bioinformatikkmetoden.

Det skal bemerkes at det er flere begrensninger ved studien: For det første er antallet prøver som brukes til analyse relativt utilstrekkelig, noe som kan utelate eller redusere nøyaktigheten til analysen. For det andre ble hub-genene videre undersøkt bare i AKI-gnagermodellen i stedet for menneskelige prøver, noe som også kan hemme oversettelsen av funnene fra mus til menneske. Det er mange studier på LGALS1 i kreft hos mennesker, og uttrykket er forhøyet i nyrekreft. Målretting mot LGALS1 kan hemme utviklingen av svulstene. Selv om RPLP1 er funnet i endometriose, gynekologiske svulster og andre sykdommer, har det ikke blitt studert i menneskelige nyrer. Ytterligere undersøkelser av hub-gener på humane prøver som urinutskillelse kan bedre belyse deres biologiske rolle klinisk. Avslutningsvis la denne studien grunnlaget for videre studier av rollen til Rplp1 og Lgals1 i AKI.

cistanche fantastisktilnyregjenoppretting

Konklusjoner

Oppsummert identifiserte denne studien nøkkelgener relatert til AKI gjennom WGCNA-analyse, og fant eksperimentelt 2 hub-gener med potensial for videre forskning, Rplp1 og Lgals1. Imidlertid forblir den spesifikke mekanismen i patogenesen til AKI videre forskning. De utvalgte kritiske kandidatgenene gir nye forskningsretninger for forebygging, diagnose, behandling og prognose av nyrefibrose.

Etikkerklæring

Alle dyrene ble behandlet i henhold til National Institutes of Health Guidelines for bruk og stell av forskningsdyr.

Erklæring om interessekonflikt

Forfatterne erklærte at det ikke er noen interessekonflikter.

Finansieringskilder

Dette arbeidet ble støttet av Luzhou – Southwest Medical Joint Platform Project (2017LZXNYD-P01 og 2018LZXNYD-PT03), konstruksjonsprosjektet til Sichuan Provincial Key Laboratory of Medicine (2018#53), Sichuan Science and Technology Project (2020YJ0442); Luzhou Municipal – Southwest Medical University Joint Special Grant for introduksjon av høyt nivå talenter (Lan Hui-Yao Team); og Southwest Medical University and Affiliated Traditional Medicine Hospital Joint Program (2018XYLH-029).

Forfatterbidrag

Li Wang og Jianchun Li unnfanget og koordinerte studien. Xiao Lin skrev avisen. Jianchun Li reviderte papiret. Jianchun Li utførte bioinformatikkanalysen. Xiao Lin utførte dyreforsøket og utførte sanntids PCR, IHC og IF. Xia Zhong og Jieke Yang utførte WB og samlet inn nyreprøver fra mus. Ruizhi Tan utførte den statistiske analysen. Alle forfattere gjennomgikk resultatene og godkjente den endelige versjonen av manuskriptet.

cistanche supplerer erfaring med regulering av nyrefunksjon