Forbedring av Echinacosid- og Acteosid-produksjon ved to-trinns fremkalling i cellesuspensjonskultur av Cistanche Deserticola

for mer informasjon:ali.ma@wecistanche.com

Wen-Hao Chen et al

Abstrakt

Ved passende konsentrasjoner fremmet polyaminer kallusveksten ogechinacosideinnhold avCistanche deserticolamens Ag pluss økte innholdet avechinacosideogakteosid. I en 20-dagers kulturperiode, da putrescine (25 lM) og Ag pluss (10 lM) ble tilsatt på henholdsvis dag 8 og dag 16,echinacosideproduksjon(1,7 gl–1) ogakteosidproduksjonen (0.4 gl–1) nådde maksimumet, som var 1.4-fold og 1.5-fold av disse insingle putrescine-behandlingene, 1.6-fold og 1.4-fold av de i henholdsvis enkelt Ag pluss-behandling. Eksogent putrescin forbedret cellelevedyktighet og antioksidantenzymaktivitet markant og økte dermed den endelige biomassen. Ag pluss tilsetning økte H2O2-innholdet og fenylalanineammoniakklyaseaktiviteten betydelig, noe som førte til høyereechinacosideogakteosidinnhold.

NøkkelordActeosid,Cistanche deserticola, Echinacoside, Elicitor, Suspensjonskultur

Forkortelser

APOX askorbatperoksidase

CAT Catalase

H2O2 Hydrogenperoksid

PAL Fenylalanin ammoniakk-lyase

PeGs Fenylethanoid glykosider

ROS-reaktive oksygenarter

SOD Superoxide dismutase

Cistanche deserticola

Klikk for å Cistanche UK og Cistanche ekstraktprodukter

Introduksjon

Cistanche deserticolaYC Ma er mye brukt i tradisjonell kinesisk medisin. Fenyletanoidglykosider (PeGs) er viktige bioaktive bestanddeler i denne planten. Blant PeGs,echinacosideogakteosider hovedkomponentene for å forbedre seksuell potens, regulere immunfunksjonen, fjerne frie radikaler og anti-aldringsegenskaper (Song et al. 2003). På grunn av overutnyttelse, vanskelig dyrking og forverret miljø, vill Cistanche deserticolaplanter er på randen av utryddelse. Plantecellekultur kan være et attraktivt alternativ for å oppnå disse bioaktive komponentene. De viktigste problemene oppstått i vitro-kultur avCistanche deserticolaer lav biomasse og lavt PeG-innhold. Mange elicitorer ble rapportert å stimulere PeGsyntese (Cheng et al. 2005, 2006; Lu og Mei 2003; Ouyang et al. 2003a; Xu et al. 2005), men dessverre reduserte de fleste elicitorer cellebiomassen.

I de siste årene har kombinasjonen av forskjellige fremkallere blitt utforsket i suspensjonskulturen av planteceller. På grunn av de forskjellige handlingene til forskjellige fremkallere, kan kombinasjonen av forskjellige fremkallere oppnå en synergisk effekt. Elicitorene kan tilsettes samtidig, for eksempel i suspensjonskulturen til Taxus spp. (Yuan et al. 2002) og ginseng (Bae et al. 2006). På den annen side ga tilsetning av forskjellige utløser på henholdsvis biomassevekststadiet og sekundær metabolittproduksjon maksimal biomasse- og taxolproduksjon i suspensjonskulturen til Taxus baccata ( Khosroushahiet al. 2006). Imidlertid er få rapporter tilgjengelige angående bruken av de kombinerende fremkallerne i cellekulturen til Cistanche deserticola.

EhcinacosideiCistanche deserticola

Tidligere rapporter omCistanche deserticolafokusert på å øke PeG-innholdet, men fremkallende faktorer som polyaminer for å fremme biomassen ble delvis ignorert. Polyaminer kan fremme kallusbiomasse ved å øke celleproliferasjon og lindre cellealderdom (Bais og Ravishankar 2002). Det ble nylig rapportert at polyaminer var involvert i interaksjonen med etylen og abiotisk stresstoleranse, mens etylen og reaktive oksygenarter (ROS) fra abiotisk stress resulterte i cellealdring og død (Cona et al. 2006). På den annen side resulterte oksidativt stress forårsaket av elicitorer i akkumulering av ROS, inkludert hydrogenperoksid (H2O2) og superoksidanion (O2–), som ble rapportert å mediere med programmert celledød og sekundær metabolittsyntese som signalmolekyler (Yuan et al. 2001) ; Xu og Dong 2005). For eksempel induserte H2O2 genuttrykk av fenylalanin-ammoniakklyase (EC 4.3.1.5), et nøkkelenzym for forsvarsrespons og sekundær metabolisme (Desikan et al. 1998), som regulerte PeG-produksjonen i cellekultur avCistanche deserticola(Cheng et al. 2005; Ouyanget al. 2003a). På grunn av oksidativt stress fremmet noen metallioner, som Ni2 pluss, Co2 pluss, Ag plus, sekundær metabolittsyntese effektivt i mange planter (Zhao et al. 2005). Kanskje de kan øke PAL-aktiviteten og PeG-produksjonen. I denne studien ble polyaminer og metallioner, så vel som kombinasjonen av disse utløserne, brukt for å øke kallusveksten,echinacoside, ogakteosidinnhold av Cistanche deserticola. I tillegg ble forholdet mellom utløser og H2O2-innhold, så vel som deres effekter på aktivitetene til PAL og antioksidantenzymer også undersøkt.

Materialer og metoder

Plantematerialer

Cistanche deserticolacellelinjer ble indusert fra stammen. Etter sterilisering ble stilken kuttet i biter på ca. 1 cm3 og dyrket på et B5-medium (Gamborg et al. 1968) som inneholdt 5 lM naftaleneddiksyre (NAA), 9 lM 6-benzyladenin (6-BA), 4 lM 2,4-diklorfenoksyeddiksyre (2,4-D), og 30 g sukrose l–1. Etter 30 dager ble den lysegule kallusen tatt ut og subkulturert på B5-medium med 5 lMNAA, 9 lM 6-BA og 1 lM 2,4-D, og ​​cellesuspensjonskulturen ble etablert i henhold til metodene av Ouyang et al. (2003b).

Callus kultur

Omtrent 1,5 g fersk callus (0,125 g DW) fra 20-daggammel suspensjonskultur avCistanche deserticolable inokulert i en 250-ml Erlenmeyer-kolbe inneholdende 50 ml B5-medium. B5-medium ble supplert med 5 lM NAA, 9 lM 6-BA, 1 lM 2,4-D og 30 g sukrose l-1 ved en pH på 5,6 før autoklavering. Alle eksperimentene ble utført med tre replikasjoner ved 25 grader i mørket på en roterende shaker (110 omdreininger min–1) i 20 dager.

ActedosieiCistanche deserticola

Elicitor-behandlinger

I et enkelt fremkallingseksperiment ble filtersteriliserte løsninger av putrescin (Put), spermin (Spm), spermidin (Spd), sølvnitrat og koboltklorid tilsatt til mediet i beregnede konsentrasjoner for å undersøke effekten på vekst av kallus og PeG-innhold. Med optimal utløsertype og konsentrasjon ble effekten av fôringstiden undersøkt. Deretter, basert på den optimale konsentrasjonen og matetiden, ble kombinasjonen av forskjellige utløsere designet for å forbedre PeG-produksjonen i et to-trinns utløsningseksperiment. Kalluskulturen uten elicitorer fungerte som kontroll. For å undersøke virkningsmekanismen til utløsere, ble kallus tatt ut på et beregnet tidspunkt etter tilsetning av utløser for videre analyse i to-trinns utlysingseksperiment.

Biokjemiske analyser

På et beregnet tidspunkt etter utløsertilsetning ble cellene filtrert og vasket forsiktig med destillert vann. Deretter ble celleviabiliteten bestemt ved 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid-farging i henhold til metoden til Verleysenet al. (2004), Viabilitetsindeksen er definert som absorbansen målt per gram ferskt vev. H2O2-innholdet i friske celler ble bestemt i henhold til metoden til Velikova et al. (2000). Aktivitetsbestemmelsen av fenylalanin-ammoniakklyase (PAL) (EC 4.3.1.5) var basert på metoden til Koukol og Conn (1961). Metodene som ble brukt for superoksiddismutase (SOD) (EC1.15.1.1), katalase (CAT) (EC 1.11.1.6), askorbatperoksidase (APOX) ekstraksjon og bestemmelse var de samme som Jebara et al. (2005).

Måling av biomasse, echinakosid og akteosid

For tørrvektsbestemmelse (DW) ble kallus filtrert og vasket med destillert vann, og deretter frysetørket til konstant vekt for å registrere tørrvekten.

Tørre celler (20 mg) ble ekstrahert med 10 ml 50 prosent (v/v) metanol ved romtemperatur i ultralydbehandling (40 kHz, 160 W) i 15 minutter. Etter filtrering gjennom et filter på 0,22 lm ble 20 ll prøver injisert i et HPLC-system (Waters 2695) utstyrt med en C18 kolonne (Diamonsil, 250 mm · 4,6 mm, 5 μm partikkelstørrelse). Den mobile fasen besto av metanol og 0,05 prosent eddiksyre-vannløsning (v/v) i forholdet 35:65 (v/v). Strømningshastigheten var 1,0 ml min^–1, kolonnetemperaturen var 30 grader og UV-deteksjonsbølgelengden (Waters 2996) var 334 nm.

Kalibreringskurvene tilechinacosideogakteosidvar i god linearitet over området {{0}}.2–6.4 lg(r=0.9997) og 0.16–4.6 lg (r {{1{{ 24}}}}.9995), henholdsvis.Den gjennomsnittlige gjenvinningen av echinacoside og acteosid(n=5) var 98,7 prosent (RSD=1,5 prosent ) og 98,2 prosent (RSD=1 ,28 prosent ), henholdsvis. Presisjons- og nøyaktighetseksperimentene viste gode resultater, det relative standardavviket var mindre enn 2 prosent. Kvantifiseringsgrensene var 0,04 og 0,06 lg for henholdsvis echinakosid og akteosid. Echinakosid- og akteosidstandarder ble kjøpt fra NICPBP (National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, Beijing, Kina). Echinakosid/akteosidproduksjon=echinakosid/akteosidinnhold (mg g–1 DW) x Biomasse (g DW l^–1).

statistiske analyser

Alle eksperimenter og bestemmelser ble gjentatt tre ganger, og alle verdier var gjennomsnittet for triplikater ± SE. Dataene ble sendt til variansanalyse (enveis ANOVA, Tukey-test) for å oppdage signifikante forskjeller ved PROC ANOVA av SAS versjon 6.12.

Resultater

Effekter av polyaminer på callusvekst,echinacoside, ogakteosidinnhold.

Tabell 1 viser effekten av polyaminer på kallusveksten,echinacoside, ogakteosidinnhold avCistanche deserticola. Put og Spm fremmet callusvekst betydelig ved en passende konsentrasjon. Omtrent 25 lM Put var mest effektiv og biomassen (11,2 g DW l–1) var 1.3- ganger kontrollen. Samtidig forbedret polyaminerechinacosideinnhold betydelig. Når 25 lM Put ble tilsatt,echinacosideinnholdet ble økt med 46 prosent sammenlignet med kontrollen mens det ikke ble funnet noen signifikant økning av akteosidinnholdet.

Effekter av Ag plus og Co2 plus på kallusvekst, echinacoside og acteosidinnhold

Effektene av metallioner på kallusvekst,echinacoside, ogakteosidinnhold er illustrert i tabell 2. Echinakosid- og akteosidinnhold ble fremmet sterkt av Ag plus mens kallusveksten ble hemmet noe. Når 10 lM Ag pluss ble tilsatt,echinacosideinnhold ogakteosidinnholdet ble økt med henholdsvis 73 prosent og 62 prosent sammenlignet med kontrollen. Samtidig var det ingen signifikant forskjell i biomassen mellom Ag pluss behandling og kontrollen. Co2 pluss viste knapt positive effekter på kallusveksten og PeG-innholdet.

Effekter av fôringstid på kallusvekst, echinakosid og akteosidinnhold

Put (25 lM) og Ag pluss (10 lM) ble valgt for ytterligere eksperimenter. Effekten av fôringstid på hard hudvekst,echinacoside, ogakteosidinnholdet er vist i tabell 3. Når Put (25 lM) ble tilsatt på dag 8, ble den maksimale biomassen (11,8 g DW l–1) oppnådd. I mellomtiden harechinacosideinnhold ble hevet til 107,2 mg g-1 DW mensakteosidinnholdet var nesten det samme som kontrollen.

Ag pluss tilsetning på et tidligere tidspunkt førte til mindre biomasse. Ved å legge til Ag pluss (10 lM) på dag 16, begge delerechinacosideinnhold (127,9 mg g–1 DW) ogakteosidinnholdet (34,2 mg g–1 DW) nådde maksimumet, som var henholdsvis 2.2- ganger og 1.4- ganger av de i kontrollen.

Kombinasjonseffektene av Put og Ag plus på kallusvekst, echinakosid og acteosidproduksjon

Som vist i resultatene av enkeltfremkallere, økte tilsetning i det tidlige stadiet biomassen, og Ag pluss tilsetning i det sene stadiet fremmet echinakosid- og akteosidinnhold uten å redusere biomassen markant. Så en to-trinns protokoll ble designet. Put (25 lM) og Ag pluss (10 lM) ble tilsatt ved deres respektive optimale stadier.

Figur 1 viser effekten av å kombinere tilsetningen av Putand Ag pluss på kallusvekst,echinacoside, ogakteosidproduksjon i motsetning til kontrollen. Når Put (25 lM) ble tilsatt på dag 8 og Ag pluss (10 lM) ble tilsatt på dag 16, var den optimale biomassen (11,4 g DW l–1), echinacoside-innhold (152,4 mg g–1 DW) og akteosidinnhold (36,1) mg g–1 DW) ble oppnådd på dag 20 (fig. 1). Deechinacosideproduksjon (1,7 gl–1) ogakteosidproduksjonen (0.4 gl–1) utgjorde henholdsvis 3.3- og 2.1- ganger av de i kontrollen, som var høyere enn de i enkeltfremkalling (tabell 3) . Sammenlignet med single elicitor-behandlingechinacosideogakteosidproduksjon ved å kombinere elicitorene var 1.4-fold og 1.5-fold av de i enkeltput-behandling, 1.6-fold og 1.4-fold av de enkeltstående Ag pluss-behandlingen , henholdsvis. Langvarig kultur redusert biomasse, echinakosidproduksjon og akteosidproduksjon (fig. 1)

Fig. 1 Profilene til biomasse (A),echinacoside, ogakteosidproduksjon (B) med/uten å kombinere elicitorer i suspensjonskultur avCistanche deserticola. Vertikale søyler representerer standardfeilen for tre replikasjoner. Callus, 0.125 g DW, ble inokulert i 250-ml Erlenmeyer-kolber inneholdende 50 ml B5-medium. Put (25 lM) og Ag pluss (10 lM) ble tilsatt på henholdsvis dag 8 og dag 16. Eksperimentene ble utført ved 25 grader i mørket på en roterende shaker (110 omdreininger min–1) i 20 dager

Effekt av Put og Ag plus på cellelevedyktighet, H2O2-innhold og aktivitetene til PAL og antioksidantenzymer

For å forstå virkningsmekanismen til fremkallere på cellevekst og sekundær metabolisme avCistanche deserticola, endringene i cellelevedyktighet, H2O2-innhold og aktivitetene til PAL og antioksidantenzymer etter tilsetning av Put og Ag plus ble undersøkt i to-trinns fremkallingskulturen. Når Put ble tilsatt på dag 8 (0 t i fig. 2), sank H2O2-innholdet raskt, som var bare 48,9 prosent av kontrollen ved henholdsvis 6. time, og kom seg gradvis til nivået for kontrollen etter 24 timer (fig. 2A). Cellelevedyktigheten økte til 12 timer og falt deretter jevnt, som var 26,9 prosent og 16,7 prosent høyere enn kontrollen ved henholdsvis 24 og 48 timer (fig. 2B). Aktivitetene til SOD og APOX økte markant etter 6 timer, og SOD-aktiviteten sank til et tilsvarende nivå for kontrollen etter 24 timer mens APOX-aktiviteten fortsatt var 1.3- ganger for kontrollen (fig. 2C, D). Putaddition viste ingen signifikant innflytelse på CAT-aktivitet (fig. 2E). Nedgangen i H2O2-innholdet og veksten av antioksidative enzymaktivitet betydde mindre oksidativ skade og holdt flere celler levedyktige enn kontrollen.

Fig. 2 Endringene i H2O2-innhold, cellelevedyktighet, APOX-, SOD-, CAT- og PAL-aktivitet etter tilsetning på dag 8 insuspensjonskultur avCistanche deserticola. Vertikale streker representerer standardfeilen for tre replikasjoner

Samtidig nådde PAL-aktiviteten maksimum den 12. timen og sank deretter gradvis til nivået tilsvarende kontrollen etter 48 timer (fig. 2F).

Cellene ble kontinuerlig dyrket etter Put-tilsetning, og Ag plus ble tilsatt til mediet på dag 16 (0 timer i fig. 3). H2O2-innholdet økte raskt og holdt et betydelig høyere nivå enn kontrollen til 48 timer (fig. 3A). Imidlertid ble cellelevedyktigheten hemmet betydelig og ble mindre (fig. 3B). APOX-aktivitet holdt et konstant nivå og avtok etter 24 timer (fig. 3C). SOD- og CAT-aktivitetene økte kraftig etter 3 timer og nådde sitt maksimum ved henholdsvis 12 og 6 timer, som var 1.6-fold og 1.{16}}fold høyere enn kontrollene, og sank deretter sakte (fig. 3D) , E). PAL-aktiviteten økte til 2.1- ganger av kontrollen etter 24 timer, som fortsatt var 22,5 prosent høyere enn kontrollen etter 48 timer (fig. 3F).

Fig. 3 Endringene i H2O2-innhold, cellelevedyktighet, APOX-, SOD-, CAT- og PAL-aktivitet etter Ag pluss tilsetning på dag 16 insuspensjonskultur avCistanche deserticolamed tillegg på dag 8. Vertikale søyler representerer standardfeilen for tre replikasjoner.

Diskusjon

Polyaminer og metallioner viste forskjellig påvirkning på kallusveksten og PeG-produksjonen avCistanche deserticola. Ved riktige konsentrasjoner forbedret polyaminer hovedsakelig kallusveksten, mens Ag plus fremmet produksjonen avechinacosideogakteosidbetydelig. Når både Put og Ag plus i optimal konsentrasjon ble tilsatt til forskjellige tider, oppsto noen synergiske effekter.

For callusveksten var promosjonseffekten avhengig av typen polyaminer, konsentrasjon og fôringstid. 25 lMPut var mest effektivt for kallusveksten når den ble tilsatt på dag 8. Utløseren viste den optimale promoteringseffekten i det tidlige vekststadiet. Selv om Ag plus og Co2 plus ble funnet å forbedre sekundære metabolitter i forskjellige planter (Zhao et al. 2005), viste bare Ag plus en positiv effekt på innholdet iechinacosideogakteosid. Fordi Ag plus kunne hemme cellelevedyktighet og celleproliferasjon, økte Ag plus-tilsetning på dag 16 produksjonen avechinacosideogakteosiduten å redusere biomassen vesentlig.

Når planteceller utsettes for fremkallerbehandling, initierer utløseren signaltransduksjon fra overflaten av plasmamembranen og ROS-produksjon, induserer planteforsvarsrespons og forbedrer plantesekundær metabolisme ved å regulere nøkkelenzymer som katalyserer biosyntesen av sekundære målmetabolitter (Zhao et al. 2005). Oksidativt stress på grunn av elicitorbehandling resulterer i ROSakkumulering og kan lindres av antioksidantenzymer, inkludert SOD, APX, CAT og POD. Når oksidativ skade er utenfor funksjonene til antioksidantenzymer, kan planteceller dø ettersom cellenes levedyktighet reduseres.

H2O2, en type ROS, antas å mediere med programmert celledød og regulere sekundær metabolittsyntese ved å indusere ekspresjonen av mange forsvarsgener og sekundære metabolittbiosyntetiske gener, slik som PAL. H2O2, en type ROS, antas å mediere med programmert celledød og regulere sekundær metabolittsyntese ved å indusere ekspresjonen av mange forsvarsgener og sekundære metabolittbiosyntetiske gener, slik som PAL.

Polyaminer forbedret abiotisk stresstoleranse ved å rense ROS effektivt, beskytte nukleinsyre og membran (Alca´zar et al. 2006) og forbedre antioksidantenzymaktivitet (Tang og Newton 2005). I følge rapporten fra Papadakis og Roubelakis-Angelakis (2005), viste Put en bedre blokkeringseffekt på ROS-akkumulering enn Spd og Spm. Som vist i resultatene våre, var den endelige biomasse inPut-behandlingen mer enn de i Spd- og Spm-behandlinger. Eksogent redusert H2O2-innhold, økt antioksidant enzymaktivitet og cellelevedyktighet effektivt. Sannsynligvis bidro høyere cellelevedyktighet til mer spredning og høyere biomasse. Deretter kan det forklares hvorfor Ag pluss-tilsetning på et tidligere tidspunkt førte til mindre biomasse for Ag pluss forbedret H2O2-akkumulering og redusert celleviabilitet betydelig. Aktivitetene til antioksidantenzymer ble forbedret for å lindre oksidativt stress uten å påvirke cellenes levedyktighet. Ag pluss tillegg fremmet også PALaktivitet samt produksjon avechinacosideogakteosidmye. Mekanismen kan være i samsvar med resultatene til Desiken et al. (1998) og Yuan et al. (2001). H2O2 kan spille en nøkkelrolle i celleproliferasjon og PeG-produksjon. Sett økt PAL aktivitet ogechinacosideinnhold i en grad, muligens på en annen måte for Sett redusert H2O2-innhold.

De siste årene har de fleste rapporter fokusert på effekten av en enkelt fremkaller på kallusveksten og PeG-innholdet iCistanche deserticola. Imidlertid forsterket mange utløser ikke kallusveksten ved optimal konsentrasjon, slik som aschitosan, funal utløser (Fusarium solani), metyljasmonat og salisylsyre (Cheng et al. 2006; Lu og Mei2003; Xu et al. 2005). En blanding av sjeldne jordartselementer forbedret cellevekst og PeG-produksjon, henholdsvis 26 prosent og 167 prosent høyere enn kontrollen (Ouyanget al. 2003b). Gjentatt fremkalling med en enkelt utløser forbedret også PeG-produksjonen betraktelig (Cheng et al. 2005, 2006). Det er et godt alternativ for å oppnå optimal biomasse og PeG-produksjon ved å legge til forskjellige elicitorer i forskjellige stadier. Når 25 lM Put og 10 lM Ag plus ble tilsatt på henholdsvis dag 8 og dag 16,echinacosideproduksjonen (1,7 gl–1) og akteosidproduksjonen (0,4 gl–1) nådde maksimum, som var høyere enn de fra enkelt Put eller Ag pluss fremkalling så vel som de tidligere rapportene.

Fra: ' Forbedring avechinacosideogakteosidproduksjon ved to-trinns fremkalling i cellesuspensjonskultur avCistanche deserticola' avWen-Hao Chen et al

---World J Microbiol Biotechnol (2007) 23:1451–1458 / Springer Science plus Business Media BV 2007

Referanser

Alca´zar R, Marco F, Cuevas JC, Patron M, Ferrando A, Carrasco P, Tiburcio AF, Altabella T (2006) Involvering av polyaminer i planterespons på abiotisk stress. Biotechnol Lett 28:1867–1876
Bae KH, Choi YE, Shin CG, Kim YY, Kim YS (2006) Forbedret ginsenosidproduktivitet ved en kombinasjon av etefon og metyljasmonat i tilfeldige rotkulturer av ginseng (Panax ginseng CA Meyer). Biotechnol Lett 28:1163–1166
Bais HP, Ravishankar GA (2002) Rollen til polyaminer i ontogeni av planter og deres bioteknologiske anvendelser. Plantecellevevsorgankult 69:1–34
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ (2005) Gjentatt fremkalling øker akkumulering av fenyletanoidglykosider i cellesuspensjonskulturer avCistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) Forbedring av phenylethanoid glykosider biosyntese iCistanche deserticolacellesuspensjonskulturer av kitosan-elicitor. J Biotechnol 121:253-260
Cona A, Rea G, Angelini R, Federico R, Tavladoraki P (2006) Funksjoner av aminoksidaser i planteutvikling og forsvar. Trender Plant Sci 11:80–88
Desikan R, Reynolds A, Hancock JT, Neill SJ (1998) Harpin og hydrogenperoksid initierer begge programmert celledød, men har differensielle effekter på forsvarsgenuttrykk i Arabidopsis-suspensjonskulturer. Biochem J 330:115-120
Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Næringsbehov for suspensjonskulturer av soyabønnerotceller. Exp Cell Res 50:151–158Jebara S, Jebara M, Limam F, Aouani ME (2005) Endringer i
askorbatperoksidase-, katalase-, guaiakolperoksidase- og superoksiddismutaseaktiviteter i vanlige bønneknuter (Phaseolus vulgaris) under saltstress. J Plant Physiol 162:929–936
Khosroushahi AY, Valizadeh M, Ghasempour A, Khosrowshahli M, Naghdibadi H, Dadpour MR, Omid Y (2006) Forbedret taxolproduksjon ved kombinasjon av induserende faktorer i suspensjonscellekultur av Taxus baccata. Cell Biol Int 30:262–269
Koukol J, Conn EE (1961) Metabolismen av aromatiske og egenskapene til fenylalanindeaminasen til Hordeum vulgare. J Biol Chem. 236:2692-2698
Lu CT, Mei XG (2003) Forbedring av produksjon av fenyletanoidglykosider av en soppfremkaller i cellesuspensjonskultur avCistanche deserticola. Biotechnol Lett 25:1437–1439
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003a) Dannelse av fenyletanoidglykosider vedCistanche deserticolakallus dyrket på faste medier. Biotechnol Lett 25:223–225
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003b) Effekter av sjeldne jordartselementer på veksten avCistanche deserticolaceller og produksjon av fenyletanoidglykosider. J Biotechnol 102:129-134
Papadakis AK, Roubelakis-Angelakis KA (2005) Polyaminer hemmer NADPH-oksidase-mediert superoksidgenerering og putrescin forhindrer programmert celledød indusert av polyaminoksidasegenerert hydrogenperoksid. Planta 220:826–837
Song ZH, Lei L, Tu PF (2003) Fremskritt innen forskning på farmakologisk aktivitet i planter avCistancheHoffing og Link. Chin Tradit Herbal Drugs 34:16–18
Tang W, Newton RJ (2005) Polyaminer reduserer saltindusert oksidativ skade ved å øke aktivitetene til antioksidantenzymer og redusere lipidperoksidasjon i virginiafuru. Plantevekstregulativ 46:31–43
Velikova V, Yordanov I, Edreva A (2000) Oksidativt stress og noen antioksidantsystemer i sur nedbør-behandlet vært planters beskyttende rolle for eksogene polyaminer. Plant Sci 151:59–66
Verleysen H, Samyn G, Van Bockstaele E, Debergh P (2004) Evaluering av analytiske teknikker for å forutsi levedyktighet etter kryokonservering. Plantecellevevsorgankult 77:11–21
Xu MJ, Dong JF (2005) O2– fra det fremkallende oksidative utbruddet er nødvendig for å utløse aktivering av fenylalanin ammoniakklyase og katarantinsyntese i Catharanthus roseus cellekulturer. Enzyme Microb Technol 36:280–284
Xu LS, Xue XF, Fu CX, Jin ZP, Chen YQ, Zhao DX (2005) Effekter av metyljasmonat og salisylsyre på syntese av fenyletanoidglykosider i suspensjonskulturer avCistanche deserticola. Chin J Biotechnol 21:402–406
Yuan YJ, Li C, Hu ZD, Wu JC (2001) Signaltransduksjonsvei for oksidativt utbrudd og taxolproduksjon i suspensjonskulturer av Taxus Chinensis var. mairei indusert av oligosakkarid fra Fusarium oxysprum. Enzyme Microb Technol 29:372–379
Yuan YJ, Wei ZJ, Miao ZQ, Wu JC (2002) Fungerende veier til utløser på Taxol-biosyntesevei og deres synergistiske effekt. Biochem Eng J 10:77–83
Zhao J, Davis LC, Verpoorte R (2005) Elicitor signaltransduksjon som fører til produksjon av plantesekundære metabolitter. Biotechnol Adv 23:283–333