IPSC-teknologibasert regenerativ medisin for nyresykdommer
Feb 23, 2022
AbstraktMed få kurative behandlinger fornyresykdommer, har økende oppmerksomhet blitt rettet mot regenerativ medisin som et nytt terapeutisk alternativ. Nylig fremgang inyreregenerering ved bruk av human-induserte pluripotente stamceller (hiPSCs) er bemerkelsesverdig. Basert på kunnskap omnyreutvikling, rettet differensiering av hiPSCs til to embryonalenyrestamfader, nefron stamceller (NPCs) og ureteric knopp (UB), er etablert, noe som muliggjør generering av nefron og samlekanalorganoider. Dessuten menneskelignyrevev kan genereres fra disse hiPSC-avledede stamceller, der NPC-avledede glomeruli ognyretubuli og UB-avledede samlekanaler er sammenkoblet. Det indusertenyrevev blir ytterligere vaskularisert når det transplanteres inn i immundefekte mus. I tillegg til detnyrerekonstruksjon for bruk i transplantasjon, har det blitt vist at celleterapi ved bruk av hiPSC-avledede NPC-er forbedrer akuttnyreskade(AKI) hos mus. Sykdomsmodellering og forskning på medikamentoppdagelse ved bruk av sykdomsspesifikke hiPSC-er har også blitt utført kraftig for vanskelige å behandlenyrelidelser, som autosomal dominant polycystisknyresykdom(ADPKD). I et forsøk på å adressere komplikasjonene forbundet mednyresykdommer, ble hiPSC-avledede erytropoietin (EPO)-produserende celler vellykket generert for å oppdage medisiner og utvikle celleterapi fornyreanemi. Denne anmeldelsen oppsummerer nåværende status og fremtidige perspektiver for utviklingsbiologinyreog iPSC teknologibasert regenerativ medisin fornyresykdommer.
Nøkkelord:iPSC; nyregenerering; Nephron stamceller; Ureterisk knopp; Celleterapi; Sykdomsmodellering, nyre, nyre.
Introduksjon Nyresykdommerforårsake enorme medisinske problemer og økonomisk byrde over hele verden, men det er få kurative behandlinger bortsett franyretransplantasjon, som er hemmet av alvorlig donororganmangel [1]. En løsning er utviklingen av en regenerativ medisinstrategi ved bruk av humane pluripotente stamceller (hPSCs), som embryonale stamceller (hESCs) og induserte pluripotente stamceller (hiPSCs) [2]. På grunn av deres potensial til å spre seg uendelig og å differensiere til en hvilken som helst celletype i kroppen, inkludertnyreceller, forventes hPSCs å tjene som en cellekilde for regenerativ medisin, som f.eksnyrerekonstruksjon og celleterapi. I tillegg kan sykdomsspesifikke hPSC-er som har den genetiske predisposisjonen til å forårsake den spesifikke sykdommen brukes til å utvikle modeller for patologisk analyse og medikamentoppdagelse, der de skadede celletypene differensiert fra hPSC-ene reproduserer sykdomsfenotypene in vitro [2]. I denne artikkelen oppsummerer jeg de siste fremskrittene innennyreregenerasjonsforskning basert på utviklingsbiologi og beskrive fremtidige perspektiver for regenerativ medisin og sykdomsmodellering fornyresykdommer.
Nyreutvikleret Nyreer avledet fra et tidlig embryonalt kimlag, den mellomliggende mesoderm (IM) [3] (Fig. 1a). Hos virveldyr gir IM suksessivt opphav til trenyrer,pronefros, mesonefros og metanefros (fig. 1b). Mesonephros er den voksnenyreav fsh og amfibier, mens metanephros er den voksnenyreav reptiler, fugler og pattedyr. Mens disse trenyrerer like ved at de består av nefroner, en funksjonell enhet avnyre, deres antall nefroner varierer. Voksen pattedyrnyremetanefros
Fig. 1 Rettet differensiering avnyreavstamningsceller. ac Skjematiske tegninger som viser mesoderm spesifikasjon (a), dannelsen av trenyrer(b) og metanefros utvikling (c). IM: mellomliggende mesoderm; MM: metanefrit mesenkym; UB: ureterisk knopp. d Immunfarging av hiPSC-avledede nefron stamceller (NPC) for OSR1, SIX2 og HOXD11. e Immunfarging av en nefronorganoid dannet fra hiPSC-avledede NPC-er etter 10 dager med luft-væske-grensesnittkultur. PODXL: Podocalyxin (podocyttmarkør; hvit); LTL: Lotus tetragonolobus lektin (proksimal tubulimarkør; rød); CDH1: CADHERIN 1 (distal tubulimarkør; grønn). f, g Immunfarging av fremre IM-celler for OSR1 (grønn) og GATA3 (rød; f) og et nefrisk kanalcelleaggregat for E-CADHERIN (grønn), GATA3 (rød) og kjerner (blå; g). h Morfologisk endring under rekonstruksjon av forgrenende iUB-organoider i 7 dager. i Immunfarging av en iUB-organoid for RET (grønn), CK8 (rød) og PAX2 (blå). j Toluidinblåfarging av en iUB-organoid som viser rørformede lumen. k Bright-feld (venstre) og immunfargingsbilder (midt og høyre) av samlende kanallignende rørformede strukturer avledet fra en iUB-organoid for FOXA1 (hvit), AQP2 (rød) og GATA3 (grønn). Skalastaver, 100 μm. (d) og (e) er tilpasset fra Tsujimoto et al. [12], (f) og (g)–(k) er tilpasset fra Mae et al. [14, 15] er henholdsvis dannet av en gjensidig interaksjon mellom to IM-avledede embryonale vev, det metanefriske mesenkymet (MM) og ureterknoppen (UB; Fig. 1c). MM gir opphav til nefroner og interstitium hos voksnenyrer, mens UB differensierer for å fordype de nedre urinveiene fra samlekanalene til en del av urinblæren [3]. Ved å lage en ny klonogen analyse, demonstrerte vi for første gang at MM inneholder multipotente stamceller som kan differensiere til flere epitelcelletyper som utgjør nefroner, som glomerulære podocytter ognyretubulær epitel [4]. Senere avslørte slektssporingseksperimenter at disse forfedre er merket av transkripsjonsfaktoren Six2 [5]. Disse stamceller kalles nå nefron stamceller (NPCs). Taguchi et al. demonstrert at IM er delt inn i fremre og bakre domener, som gir opphav til henholdsvis UB og MM [6]. Basert på disse funnene avnyreutvikling, har det blitt utført kraftige anstrengelser for å regenererenyreavstamningsceller fra hPSCs.
Rettet differensiering av hPSCs til nyrelinjer Som det første trinnet å direkte differensiere hiPSCs tilnyreavstamninger ved å etterlignenyreutvikling, fokuserte gruppen vår på generering av IM-celler og genererte reporter hiPSC-linjer for OSR1-genet, en spesifikk markør for IM [7], ved genredigering [8]. Ved å bruke et kvantitativt evalueringssystem og reporter-hiPSC-linjene utviklet vi en svært effektiv differensieringsprotokoll som induserer hiPSC-er til OSR-1-uttrykkende IM-celler. Disse induserte IM-cellene viste utviklingspotensialet til å differensiere seg ytterligere til voksne nyrecelletyper, som glomerulære podocytter ognyretubulusceller, in vitro og for å danne tredimensjonale (3D) rørformede strukturer ved å dyrke sammen med metanefrie museceller [8, 9].
Taguchi et al. for første gang utviklet selektive differensieringsmetoder for å indusere NPC-er gjennom posterior IM fra både muse-ESC-er (mESC-er) og hiPSC-er og genererte også nefronorganoider som inneholdt glomeruli ognyretubuli in vitro fra de induserte NPC-ene [6]. Takasato et al. rapporterte generasjonen avnyreorganoider som inneholdt flerenyrecelletyper, som glomeruli,nyretubuli, samlekanaler, stromaceller og vaskulære celler [10]. Ved å utvikle et 2D-kultursystem har Morizane et al. effektivt genererte NPC-er fra hiPSC-er og deretter nefron-organoider fra NPC-ene [11]. Mer nylig utviklet vår gruppe en trinnvis differensieringsmetode for effektivt å indusere hiPSCs til NPCer med differensieringspotensialet til å danne nefronorganoider [12] (fig. 1d, e). Vår differensieringsmetode, som består av 6 trinn, rekapitulerer den naturlige utviklingsprosessen til NPC-er nærmere enn de rapporterte metodene av Takasato et al. og Morizane et al. [10, 11] og genererer NPC-er mer effektivt i 2D-differensieringsformat enn metoden til Taguchi et al. som bruker 3D-kultur [6].
Når det gjelder den rettede differensieringen av UB-avstamninger, differensierte Taguchi og Nishinakamura mESCs og hiPSCs gjennom fremre IM og nephric duct (ND) til UB-lignende strukturer [13]. Imidlertid var induksjonseffektiviteten til ND-epitel lav, og rensing av ND-cellene ved fowcytometri er nødvendig for påfølgende analyser. Vi utviklet en mer effektiv 2D-differensieringsmetode som produserer ND-epitel fra hiPSCs gjennom fremre IM og inkluderer påfølgende differensieringstrinn uten rensing [14] (fig. 1f, g). De induserte ND-cellene dannet UB-lignende strukturer med RET (pluss) spiss og CK8(pluss) trunkdomener i 3D-kultur. Imidlertid viste de UB-lignende strukturene generert av begge gruppene begrenset forgreningspotensial. Mer nylig, ved å modifisere vår UB-differensieringsmetode, genererte vi med hell induserte UB (iUB) organoider som har epitelpolaritet, rørformede lumen og gjentatt forgreningsmorfogenese [15] (fig. 1h-j). Dessuten lyktes vi i å indusere disse iUB-organoidene til å differensiere til å samle kanalorganoider tilsvarende deres in vivo-motstykker i svangerskapsuke 7 menneskelige embryoer (fig. 1k).
Utvidelse av nyreforfedreFor å levere en enorm mengdenyreceller for grunnleggende og klinisk forskning, in vitro ekspansjonskulturmetoder for embryonalenyreforfedre har blitt undersøkt. Brown et al. og Tanigawa et al. rapporterte in vitro utvidelse av NPCer fjernet fra museembryoer [16, 17]. Li et al. utvidet og vedlikeholdt NPC-er avledet fra både muse- og menneskeembryoer in vitro i lang tid ved bruk av en 3D-celleaggregeringskultur i henholdsvis 17 og 7 måneder [18]. Gruppen utvidet også NPC-er differensiert fra hiPSC-er in vitro i 2 måneder ved å bruke de samme metodene. Selv om alle disse tre metodene bruker benmorfogenetisk protein (BMP) 7, er rollen til BMP7 i NPC-ekspansjon fortsatt ukjent. Ved å screene kjemiske forbindelser identifiserte vi en JAK3-hemmer, TCS21311, som en erstatning for BMP7 i ekspansjonskulturen utviklet av Li et al. [18] og avslørte en ny hemmende rolle til BMP7 i JAK3-STAT3-signalering for NPC-utvidelse [19]. Dessuten forbedret tilsetningen av TCS21311 i ekspansjonskulturen spredningshastigheten til både museembryo- og hiPSC-avledede NPC-er. Mer nylig utviklet vi en ekspansjonskultur for hiPSC-avledede UB-celler, der dissosierte enkeltceller fra iUB-organoider formerer seg for å danne kolonier som uttrykker UB-spissmarkører [15]. Disse spisskoloniene kan rekonstituere iUB-organoider med gjentatt forgreningspotensial, og denne rekonstitueringsprosessen kan gjentas minst tre ganger.
Fig. 2 Rekonstruksjon avnyrestrukturer. a Et skjema som viser generering av pronefros-strukturer fra dyrehette til Xenopus-embryoer. b–d Hele monteringen (b) og seksjonsdoble immunfargingsbilder (c, d) av et stadium 42 ekvivalent Xenopus-eksplantat (b, c) og en stadium 40-larver (d) ved bruk av et pronefrit tubulusspesifikt antistoff (3G8, rød) og et pronefrit kanalspesifikt antistoff (4A6, blått). e Et skjema som viser in vitro-rekonstruksjonen avnyrestrukturer fra hiPSCs. f Trippel immunfarging av dag 20nyreorganoider for markører av podocytter (PODXL), proksimale tubuli (LTL) og distale tubuli og samlekanaler (CDH1; venstre), og for PODXL og markører av distale tubuli og samlekanaler (AVPR2) og kun samlekanaler (CALB1; høyre) . Merk at svake CDH1-signaler også ble funnet i deler av LTL pluss proksimale tubuli i venstre panel. g Et skjema som viser in vivo-rekonstruksjonen avnyrestrukturer fra hiPSCs. h Et bilde med lavere forstørrelse som viser hele vertennyreog hiPSC-avledetnyregraft (grønt) etter administrering av rhodamin B-konjugert dekstran gjennom halevenen til vertsmus. i Et intravitalt multifotonmikroskopisk bilde etter haleveneinjeksjon av rhodamin B-konjugert dekstran som viser karlumenene til vertsmusene trenge inn i den hiPSC-avledede glomerulus-lignende strukturen (grønn). Målestokker, 100 μm i (b)–(d) og (f), 500 μm i (h) og 40 μm i (i). (b)–(d) og (e)–(i) er tilpasset fra Osafune et al. [22] og Tsujimoto et al. [12], henholdsvis [22]
Nyrekonstruksjon Tidligere arbeider for rekonstruksjonnyrestrukturer brukte den presumptive ektoderm-regionen til amfibie-befruktede egg, kalt animal cap, som er en multipotent cellemasse (fig. 2a). Moriya et al. rapporterte at kombinatorisk behandling med aktivin A og retinsyre (RA) induserte dyrehette til å differensiere til pronefrie tubuli in vitro [20]. Brennan et al. viste at pronefri glomus også ble indusert i eksplantatene [21]. Vi demonstrerte at de induserte eksplantatene inneholdt pronefrie kanaler og at pronefrit vev kan regenereres fra amfibie multipotente celler in vitro [22] (fig. 2b-d). Selv om in vitro regenereringssystem for pronefrinyrerkan ikke direkte oversettes til klinisk forskning, det kan tjene som et enkelt og nyttig system for å studerenyreutvikling.I tillegg til generering av nefron-organoider fra mESC- og hPSC-avledede NPC-er og innsamling av kanalorganoider fra hPSC-avledede UB-celler, som beskrevet ovenfor, Taguchi et al. generert musnyreorganoider ved å kombinere mESC-avledede NPC-er og UB-er og interstitielle stamceller fjernet fra museembryoer, som inneholder glomeruli,nyretubuli og samlekanaler [13]. Vi skapte menneskernyreorganoider in vitro ved å dyrke NPC-er og UB-celler som ble separat indusert fra hiPSC-er og hvor NPC-avledede glomeruli ognyretubuli og UB-avledede samlekanaler er sammenkoblet [12] (Fig. 2e, f). Når transplantert inn inyresubkapsulære rom av immundefekte mus, disse hiPSC-avlededenyreorganoider integrert i blodårene til vertsmusene (fig. 2g–i).
Angående regenerering avnyreorganer som har urinveier, metoder som bruker forsøksdyrenes kropp, som blastocystkomplementering mellom arter [23] og organogen nisjemetode [24], er undersøkt. Goto et al. injiserte villtype-mESC-er i blastocystene til anefrie Sall1(−/−)-rotter og lyktes i interspesifikk generering av musnyrerhos vertsrotten [23]. Fujimoto et al. utviklet en celletransplantasjonsmetode der hiPSC-avledede NPC-er ble transplantert inn inyreutviklingsområde (dvs. organogen nisje) av museembryoer i livmoren, der de transplanterte og verts-NPCene sammen bidro til det kimære cap-mesenkymet, som var koblet til vertsmusen UB [24]. Imidlertid, mens MM avledet glomeruli ogrenal tubuli ble avledet fra de injiserte PSC-ene eller NPC-ene, de gjenværende nyrebestanddelene celletypene, slik som UB-avledede samlekanaler og nedre urinveier og vaskulære celler, var fra vertsdyrene i disse to strategiene.
SykdomsmodelleringiPSC-teknologi har gjort det mulig å lage in vitro sykdomsmodeller, der sykdomsspesifikke hiPSC-er avledet fra pasientens somatiske celler eller ved å redigere de forårsakende genene i hiPSC-er avledet fra friske givere blir differensiert til de skadede celletypene for å etterligne sykdomsfenotypene [2 ] (fig. 3a). Tidligere arbeid av Freedman et al. genererte hiPSCs fra pasienter med autosomal dominant polycystisknyresykdom(ADPKD), som er forårsaket av mutasjoner i PKD1-genet, og fant at hiPSCs og deres differensierte celler viste en nedregulering av polycystin 2, som belyser en ny mekanisme der polycystin 1 kodet av PKD1-genet regulerer uttrykket av polycystin 2 [25]. Vår gruppe genererte hiPSC-er fra ADPKD-pasienter, inkludert de som var kompliserte med intrakranielle aneurismer, og bekreftet at de vaskulære cellene som ble differensiert fra hiPSC-ene viste endret intracellulær kalsiumhåndtering og ekspresjon av ekstracellulære matriksrelaterte gener, i samsvar med de vaskulære cellene til ADPKD-musemodeller ognyrecysteceller hentet fra ADPKD-pasienter [26].
Nylige fremskritt innen generering av nefronorganoider fra hiPSCs har muliggjort modellering avnyrelidelser, som nefronoftise [27], medfødt nefrotisk syndrom [28] og autosomal recessiv polycystisknyresykdom(ARPKD) [29].Nyrecystemodeller av ADPKD ved bruk av nefronorganoider har blitt generert fra genredigerte homozygote PKD1/2-mutante hESC-er [30]. Disse modellene rekapitulerte imidlertid ikkenyrecystefenotyper sett i ADPKD ved bruk av ADPKD pasientavledet eller genredigert heterozygot PKD1-mutant hiPSC. Derimot genererte vi nylig nefronorganoider fra både ADPKD-pasientavledet og genredigerte heterozygote og homozygote
Fig. 3 Modellering av ADPKD ved bruk av sykdomsspesifikke hiPSCs. a Et skjema som viser sykdomsmodelleringsforskning for ADPKD. Sykdomsspesifikke hiPSC-er er avledet ved å omprogrammere de somatiske cellene til ADPKD-pasienter eller genredigering av PKD1/2 i hiPSC-er avledet fra friske givere. Sykdomsmodeller genereres ved å differensiere ADPKD-spesifikke hiPSC-er tilnyrevev for patologisk analyse og medikamentoppdagelse. b Representative lyse feltbilder av villtype og genredigert PKD1-mutant hiPSC-avledetnyreorganoider etter 7 dager med forskolinbehandling. c Kvantifisering av de cystiske områdene inyreorganoider i (b). Data er representert som gjennomsnitt ± SE fra tre uavhengige eksperimenter med fire replikater i hver. **s<0.005 and=""><0.001 by="" one-way="" anova="" and="" bonferroni's="" method.="" d="" representative="" bright-feld="" images="" of="" normal="" subject-="" and="" adpkd="" patient-derived="">nyreorganoider etter 7 dager med forskolinbehandling. e Representative lyse feltbilder av pasientavledetnyreorganoider etter 7 dagers behandling med CFTR-hemmer 172 (100 μM) eller everolimus (10 μM) i nærvær av forskolin. Målestokker, 300 μm i (b), (d, høyre) og (e) og 500 μm i (d, venstre). Tilpasset fra Shimizu et al. [31]
PKD1-mutante hiPSC-er for å reproduserenyrecystelegioner av for skolinbehandling [31]. Merk at vi bekreftet detnyrecyster kan dannes fra alle tre hiPSC-typene (fig. 3b-d). Disse nyrecystene reagerte på noen medikamenter som er kjent for å hemme cystedannelse i ADPKD, slik som pattedyrmålet for rapamycin (mTOR), noe som indikerer at disse modellene kan brukes til å screene legemiddelforbindelser som forhindrernyrecystedannelse [31] (Fig. 3e). Vi setter for tiden opp kjemiske screeningssystemer med høy gjennomstrømning ved å modifisere cystemodellene for terapeutisk medikamentoppdagelse for ADPKD.
Håndtere komplikasjoner av nyresykdommer De viktigste komplikasjonene forbundet med kroniskenyresykdom(CKD) inkluderernyreanemi forårsaket av utilstrekkelig produksjon av det hematopoetiske hormonet erytropoietin (EPO) avnyrer. Selv omnyreanemi har blitt behandlet med suksess ved periodisk administrering av rekombinante humane EPO-midler, mer fysiologiske terapier er nødvendig. Tatt i betraktning at EPO også produseres av leveren i embryonale stadier eller i tilfelle av alvorlig anemi selv hos voksne, modifiserte vi en tidligere rapportert leverdifferensieringsprotokoll og lyktes i å generere EPO-produserende celler fra hiPSCs (hiPSC-EPO-celler) [32 ] (fig. 4a). Disse hiPSC-EPO-cellene oppregulerer EPO-produksjonen som respons på hypoksiske stimuli, som etterligner deres in vivo-motstykker (fig. 4b, c). EPO-proteinet inneholdt i kultursupernatanten viste differensieringsfremmende effekter på erytroide linjer basert på en kolonidannende analyse ved bruk av humane hematopoietiske stamceller (fig. 4d). Videre ble disse hiPSC-EPO-cellene forbedretnyreanemi i 7 måneder etter transplantasjon i musemodeller indusert av adeninadministrasjon (fig. 4e). Dermed kan hiPSC-EPO-celler brukes til å oppdage nye medisiner og utvikle celleterapier mot nyreanemi [32].
CelleterapiForskning mot celleterapi ved bruk av hiPSC-avledet embryonalnyreforfedre har blitt utført. I et forsøk på å undersøke deres terapeutiske potensial motnyresykdommer, transplanterte vi NPC-lignendenyreforfedre generert fra hiPSCs med vår differensieringsmetode inn i subkapselen av akuttnyreskade(AKI) musemodeller indusert av iskemi/reperfusjonsskade, og fant at transplantasjonen undertrykte ine (Cre) betydelig i vertsmusene [33] (fig. 5a). Dessuten forbedret behandlingen betydelig histologiske skader forårsaket av AKI, slik som tubulær nekrose (fig. 5b). Spesielt ble interstitiell fibrose, som reflekterer progresjonen til kronisk sykdom, også betydelig forhindret. De transplanterte forfedre forbedret AKI uten å bli integrert i vertennyrevev, noe som indikerer at parakrine effekter av renotrofiske faktorer utskilt fra hiPSC-avledetnyreforfedre er den primære årsaken til de terapeutiske fordelene. Å belyse disse faktorene vil bidra til å utvikle en celleterapi så vel som nye medikamenter mot AKI [33, 34].
Imberti et al. rapporterte også terapeutiske fordeler av en celleterapi ved bruk av hiPSC-avledetnyrestamfader mot cisplatin-induserte AKI-musemodeller [35]. De injiserte hiPSC-avledet NPC-lignendenyreforfedre generert med deres protokoll til AKI-musemodeller gjennom halevenen. Denne transplantasjonsterapien forbedret også AKI betydelig, noe som fremgår av reduserte BUN-nivåer og histologiske funn. Selv om differensieringsprotokollene for å genererenyrestamfader og AKI-musemodeller var forskjellige, disse to rapportene demonstrerte for første gang de potensielle terapeutiske fordelene ved celleterapi ved bruk av hiPSC-avledede nyreprogenitorer pånyresykdommer.
Konklusjon og fremtidsperspektiv Betydelige fremskritt i genereringen av embryonalenyreforfedre ognyrevev fra hPSCs er laget. Imidlertid er det hindringer å overvinne før klinisk bruk. Angående rekonstruksjon avnyre, generasjonen av størrenyrevev ognyrebekken- og urinlederlignende strukturer, som samlekanaler samles inn i, er ikke oppnådd. I tillegg er integrasjonen av hiPSC-avledetnyrekonstruksjoner til store fartøy er nødvendig. Celleterapi ved bruk av hiPSC-avledetnyreforfedre bør også undersøkes med CKD-modeller. Til slutt er det utviklet hiPSC-baserte modeller for noennyresykdommerinkludert ADPKD, og identifisering av kandidatmedisinforbindelser motnyresykdommerer forventet.
Fig. 4 Differensiering av EPO-produserende celler og celleterapi motnyreanemi. a Immunfarging av hiPSC-avledede EPO-produserende celler (hiPSC-EPO-celler) for EPO (grønn) og AFP (rød). b Tidsforløpsanalyser av EPO mRNA-ekspresjon (venstre) og proteinsekresjon (høyre) av hiPSC-EPO-celler dyrket under lave (1 prosent ) og normale oksygen (21 prosent ) forhold. EPO mRNA-ekspresjon og proteinsekresjon ble analysert med henholdsvis qRT-PCR og ELISA. c Effektene av PHD-hemmere på EPO mRNA-ekspresjon (venstre) og proteinsekresjon (høyre) i HepG2-celler og hiPSC-EPO-celler. d Representative bilder av utbruddsdannende enhetserytroid (BFU-E) indusert av rekombinant humant EPO (rhEPO; øvre) og hiPSC-EPO-protein (nedre) i klonogene hematopoietiske progenitoranalyser ved bruk av metylcellulosebasert halvfast medium. e Hematokritverdier ble evaluert i opptil 28 uker etter transplantasjonen av hiPSC-EPO-celler til adenin-indusertenyreanemi immundefekte mus (NOD. CB17-Prkdcscid/J mus). Det grå skraverte området indikerer de normale hematokritområdene. Målestokker, 40 μm i (a) og 200 μm i (d). Tilpasset fra Hitomi et al. [32]
Takk Forfatteren vil takke alle medlemmene av CiRA, Kyoto University, spesielt Dr. Peter Karagiannis for kritisk lesning og revidering av manuskriptet og Misaki Ochiuda for å tegne illustrasjonene, og beklager til forfattere hvis studier ikke kunne siteres på grunn av plassbegrensninger. Forskningen til forfatteren er støttet av det japanske byrået for medisinsk forskning og utvikling (AMED) gjennom forskningsstipendet "Core Center for iPS Cell Research, Technological Development and The Acceleration Program for Intractable Diseases Research using Disease-spesifc iPS-celler, forskning Senternettverk for realisering av regenerativ medisin".
Overholdelse av etiske standarder
InteressekonfliktKO er en grunnlegger og medlem uten lønn av de vitenskapelige rådgivende styrene til iPS Portal, Inc., og en grunnlegger og sjefsvitenskapelig rådgiver for RegeNephro Co., Ltd.Menneske- og dyrerettigheterAlle eksperimenter med iPSC-er ble godkjent av de institusjonelle etiske komiteene og utført i henhold til retningslinjene til institusjonene og Helsinki-erklæringen. Alle dyreforsøk ble godkjent av de institusjonelle dyreforsøkskomiteene og utført i henhold til institusjonens retningslinjer.Informert samtykkeInformert samtykke ble innhentet fra alle individer hvis iPSC-er ble brukt i studiene.
Åpen tilgangDenne artikkelen er lisensiert under en Creative Commons Attribution 4.0 internasjonal lisens, som tillater bruk, deling, tilpasning, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium eller format, så lenge du gir passende kreditt til den eller de originale forfatterne. og kilden, oppgi en lenke til Creative Commons-lisensen, og angi om endringer ble gjort. Bildene eller annet tredjepartsmateriale i denne artikkelen er inkludert i artikkelens Creative Commons-lisens, med mindre annet er angitt i en kredittgrense til materialet. Hvis materiale ikke er inkludert i artikkelens Creative Commons-lisens og din tiltenkte bruk ikke er tillatt av lovbestemt regulering eller overskrider tillatt bruk, må du innhente tillatelse direkte fra opphavsrettsinnehaveren. For å se en kopi av denne lisensen.
