Iridoide og asykliske monoterpenglykosider, kankanosider L, M, N, O og P fra Cistanche Tubulosa
Mar 06, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com
Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) er en flerårig parasittisk plante som vokser på røtter av Salvadora- eller Calotropis-arter, distribuert i Nord-Afrika, Arabia og asiatiske land.1) Stengler av denne planten (Kanka-nikujuyou på japansk) har tradisjonelt vært brukes til behandling av impotens, sterilitet, lumbago og kroppssvakhet, samt et fremmende middel for blodsirkulasjonen.1,2) I løpet av våre studier på bioaktive bestanddeler fra stammer av Cistanche tubulosa,3-6) har vi tidligere rapportert tjuefire fenyletanoide aminoglykosider inkludert kankanosidene H1, H2, I, J1, J2, K1 og K2, og to acylerte oligosukkere fra ferske stammer av Cistanchetubulosa.5,6) Videre, prinsipiellfenyletanoid glykosider,echinakosid, akteosid,og isoakteosid, ble funnet å hemme økningen i serum aspartat aminotransferase (sAST) og alanin aminotransferase (sALT) nivåer i musenes skadede lever indusert av D-galaktosamin (D-GalN)/lipopolysakkarid ved doser på 25-100 mg/kg per os ( po). Strukturelle krav til fenyletanoidglykosidene for den hepatobeskyttende aktiviteten ble også belyst.5) I denne pågående studien av bestanddeler i de friske stilkene til Cistanchetubulosa, isolerte vi videre elleve iridoidglykosider inkludert kankanosider L (1), M (2), og N (3), syv asykliske monoterpenglykosider inkludert kankanosider O (4) og P(5), tre fenylpropanoider og fire lignaner. Denne artikkelen tar for seg isolering og strukturbelysning av fem nye forbindelser (1–5).
Friske stilker av C. tubulosa (dyrket i Urumuqi, Xin jiang-provinsen, Kina) ble ekstrahert med metanol under tilbakeløp for å gi et metanolisk ekstrakt (8,36 prosent fra de friske stilkene). Fra det metanoliske ekstraktet ble H2O- og MeOH-eluerte fraksjoner (henholdsvis 5,63 prosent og 2,73 prosent) oppnådd ved Diaion HP-20 kolonnekromatografi (H2O→MeOH) som beskrevet tidligere.5) Den MeOH-eluerte fraksjonen ble utsatt for SiO2- og ODS-kolonnekromatografier og til slutt HPLC for å gi kankanosidene L (1, 0.0026 prosent ), M (2, 0.{{ 27}}001 prosent ), N (3, 0.00{{60}}7 prosent ) , O (4, 0.0{{90}}2{{105}} prosent ), og P (5, {{118} }.0002 prosent ), 6-deoxycatalpol3,7) (6, 0.197 prosent ), bartsioside3,7) (7, 0.0583 prosent ), gluroside3,7) (8, 0.0443 prosent ), kankanoisid A3) (9, 22,3 mg, 0,0010 prosent ), mussaenosidinsyre3,7) (10, 0,0056 prosent ), 8- epilogansyre3,8) (11, 0,0023 prosent ), 8-epideoksylogansyre3,7) (12, 0,0004 prosent ), geniposidinsyre3,7) (13, 0,0040 prosent ), kankanosid E3) (14, 0,0026 prosent ), (2E,6Z)-8-b D-glukopyranosyloksy-2,6-dimetyl-2,6-oktadiensyre3,9) (15, 31,0 mg, 0,0014 prosent), (2E,6E){{95 }},7-dimetyl-8-hydroksyoktadien-1-yl-ObD-glu copyranoside10) (16, 0,0082 prosent), 8-hydroksygeraniol 8-Ob-D-glucopyranoside11 ) (17, 0,0044 prosent ), betulalbusid A12) (18, 0,0004 prosent ), koniferin13) (19, 0,0002 prosent ), syringin13) (20, 0,0015 prosent ), sinapicaldehyd {{128}glucopyr1,1,4-4 0,0001 prosent ), ( )-pinoresinol ObD-glukopyranosid4,8,15) (22, 0,0010 prosent ), eucommin A16) (23, 0,0002 prosent ), isoeucommin A17) (24, 0,0010 prosent ), og ( ) sinol Ob-D-syring glucopyra noside4,8,18) (25, 0,0044 prosent ).
Cistanche tubulosaforbedre seksuell funksjon
Strukturer av kankanosidene L (1), M (2) og N (3)
Kankanoside L (1) ble oppnådd som et hvitt pulver med negativ optisk rotasjon ([a]D 26 45,7 i MeOH). IR-spekteret viste et sterkt absorpsjonsbånd ved 3433 og 1{{20}}80 cm 1, noe som tyder på en glykosiddel. Det raske atombombardementet (FAB)-MS av 1 kjøring i positiv- og negativ-ion-modus viste kvasimomolekylære ionetopper ved henholdsvis m/z 371 [M Na] og 347 [MH], og molekylformelen ble bestemt som C15H24O9 ved høyoppløselig FAB-MS-måling. Syrehydrolyse av 1 med 1,0 M saltsyre (HCl) frigjorde D-glukose, som ble identifisert ved HPLC-analyse ved bruk av en optisk rotasjonsdetektor.3—6) 1 H- og 13C-NMR-spektrene på 1 (CD3OD, tabell 1, 2), som ble tildelt ved forskjellige NMR-eksperimenter,19) viste signaler som kan signeres for fire metylener [d 1,43 (1H, br dd, J ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 (1H, br dd, J ca. 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= ca. 8, 14 Hz, 6b-H), 3,50 ( 1H, ddd, J 2,4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J=ca. 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (1H hver, begge d, J 13,1 Hz, 10-H2)], to metiner [d 2,15 (1H, dd, J 7,2, 8,9 Hz, 9-H) og 2,23 (1H, m, 5- H)], og en acetalgruppe [d 4,81 (1H, d, J 8,9 Hz, 1-H)] sammen med en b-glukopyranosyldel [d 4,70 (d, J 7,9 Hz, 1 - H)]. Som vist i fig. 1, indikerte 1 H–1H korrelasjonsspektroskopi (1 H–1 H COSY) eksperimentet på 1 tilstedeværelsen av delstrukturer skrevet med fete linjer. I det heteronukleære multiple-binding korrelasjonseksperimentet (HMBC) på 1, ble det observert langdistansekorrelasjoner mellom følgende protoner og karboner (1-H og 3-C, 8-C; {{ 124}}H og 1-C; 7-H og 8-C, 10-C; 9-H og 8-C; {{131 }}H2 og 7-C, 8-C; 1 -H og 1-C) som vist i fig. 1. Deretter ble den relative stereostrukturen til 1 karakterisert av fasefølsom kjernekraft Overhauser-forsterkningsspektroskopi (fasefølsom NOESY) eksperiment, som viste NOE-korrelasjoner mellom følgende protonpar (1-H og 3a H; 3a-H og 4a-H; 3b-H og 4b-H; 4b-H; 4b-H og 5-H, 9-H; 5- H og 6b-H, 9-H; 6a-H og 7-H; 7-H og 10-H2), som vist i fig. 1. 1H- og 13C-NMR-spektrene til 1 kunne legges over de av hovediridoidbestanddelen 6-deoksykatalpol (6), bortsett fra signalene pga. til den mettede d-laktoldelen. Til slutt ga hydrogenering av 6 1, slik at stereostrukturen til kankanosid L ble belyst til å være 3,4- dihydro-6-deoksykatalpol (1).
Kankanoside M (2) ble oppnådd som et hvitt pulver med negativ optisk rotasjon ([a]D 26 18,7 i MeOH). IR-spekteret på 2 viste absorpsjonsbånd ved 3433, 1736, 1655 og 1076 cm 1 som kan tilskrives hydroksyl-, d-lakton-, olefin- og etergrupper. Det positive ion-FAB-MS-spekteret på 2 viste en kvasimomolekylær ionetopp ved m/z 353 [M Na] , og molekylformelen ble bestemt som C15H22O8 ved høyoppløselig positiv-ion FAB-MS-måling. Syrehydrolyse av 2 med 1,0 M HCl frigjort D-glukose. 1H- og 13C NMR-spektrene til 2 (CD3OD, tabell 1, 2) viste signaler som kan tilordnes fire metylener [d 1,66, 2,11 (1H hver, begge m, 4-H2), 2,15, 2,75 (1H hver , begge m, 6-H2), 4,29 (1H, ddd, J 2,8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (1H hver, begge d, J 13,1 Hz, 10- H2), 4,35 (1H, ddd, J 3,1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], to metiner [d 2,97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, {{ 84}}H)], et olefin [d 5,94 (1H, m, 7-H)], og en mettet laktongruppe (d C 174,9) sammen med en bD-glukopyranosyldel [d 4,32 (1H, d J 7,9 Hz, 1-H)]. Som vist i fig. 1, indikerte 1 H–1H COSY-eksperimentet på 2 tilstedeværelsen av delstrukturer skrevet med fete linjer, og i HMBC-eksperimentet ble det observert langdistansekorrelasjoner mellom følgende proton- og karbonpar ({{105 }}H og 1-C; 7-H og 9-C; 9-H og 1-C, 8-C; {{112} }H2 og 7-C, 8-C, 9-C; 1 -H og 10-C). Den relative stereostrukturen til 2 ble karakterisert av et fasefølsomt NOESY-eksperiment, som viste NOE-korrelasjoner mellom følgende protonpar (3a-H og 4a-H; 3b-H og 4b-H; 4b-H og 5- H; 5-H og 6b-H, 9-H) som vist i fig. 1. Dermed ble stereostrukturen til 2 belyst som vist.
Kankanosid N (3) ble isolert som et hvitt pulver med negativ optisk rotasjon ([a]D 25 24,6 i MeOH). I positiv-ion FAB-MS på 3 ble en kvasimomolekylær ionetopp observert ved m/z 371 [M Na]. Molekylformelen C16H28O8 ble bestemt ved høyoppløselig FAB-MS-måling. Syrehydrolyse av 3 med 1.0 M HCl frigjort D-glukose. 1H- og 13C-NMR-dataene (CD3OD, tabell 1, 2) viste signaler som kan tilordnes en metyl [d 1.07 (3H, d, J 7,2 Hz, 10-H3)] , fire metylener {d 1,37, 1,87 (1H hver, begge m, 7-H2), 1,65, 1,81 (1H hver, begge m, 6-H2), [3,65 (1H, dd, J 9,1 , 9,8 Hz), 3,90 (1H, dd, J 5,9, 9,8 Hz), 11-H2] og [3,70 (1H, dd, J 3,3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), {{ 71}}H2]}, fire metiner [d 1,69 (1H, m, 4-H), 1,75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8- H), 2,16 (1H, m, 5-H)], og en hemiacetalgruppe [d 4,67 (1H, d, J 7,4 Hz, 1-H)] sammen med en bD-glukopyranosyldel [ d 4,26 (1H, d, J 7,9 Hz, 1-H)]. Den iridoide strukturen til 3 ble avklart ved 1 H–1 H COSY- og HMBC-eksperimenter og den relative stereostrukturen ble karakterisert ved et fasefølsomt NOESY-eksperiment som vist i fig. 1. Følgelig ble sterostrukturen til 3 belyst som vist.
Strukturer av kankanosidene O (4) og P (5)
Kankanosidene O (4) og P (5), C16H26O8, ble også oppnådd som hvite pulvere med negative optiske rotasjoner (4: [a]D 23 26,1; 5: [a]D 21 32,7 begge i MeOH). IR-spektrene på 4 og 5 viste absorpsjonsbånd ved 3433, 1696, 1647 og 1076 cm 1 for 4, og ved 3434, 1701, 1647 og 1{{96} }76 cm 1 for 5, kan tilskrives glykosid-, karboksyl- og olefinfunksjoner. Deres UV-spektra viste et felles absorpsjonsmaksimum ved 217 nm, noe som indikerer tilstedeværelsen av en b-umettet karboksylsyredel i dem begge. Syrehydrolyse av 4 og 5 frigjorde D-glukose, mens ved enzymatisk hydrolyse med b-glukosidase ga 4 og 5 (2E,6E)-8-hydroksy-2,6-dimetyl{{39 }},{{40}}oktadekensyre20) (4a) og (2E,6E)-8-hydroksy-3,7-dimetyl{{ 48}}, henholdsvis6-oktadekensyre21) (5a). 1H- og 13C-NMR-data av 4 (CD3OD, tabell 2, 3) viste signaler som kan tilordnes to metyler [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J 1,0 Hz , 9-H3)], tre metylener {d 2,19 (2H, br t, J ca. 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [ 4,24 (1H, dd, J 7,6, 12,0 Hz), 4,33 (1H, dd, J 6,2, 12,0 Hz), 8-H2]} og to trisubstituerte olefiner [d 5,41 (1H, ddd, J 1,2, 6,2, 7,6 Hz, 7- H), 6,75 (1H, tq, J 7,2, 1,0 Hz, 3-H)] sammen med en bD glukopyranosyldel [d 4,34 (d, J 7,8 Hz, 1 -H)]. Ved sammenligning av karbonsignaler i 13C-NMR-spekteret på 4 med de for 4a, ble det observert et glykosyleringsskift ved 8--posisjonen (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). Posisjonen til glukosidbindingen ble også bekreftet av HMBC-eksperimenter som vist i fig. 2. Følgelig ble stereostrukturen til 4 avklart til å være (2E,6E)-8-bD-glucopyranosyloksy-2,{{ 143}}dimetyl-2,6-oktadekensyre. På den annen side indikerte 1H- og 13C-NMR-dataene til 5 (CD3OD, tabell 2, 3) tilstedeværelsen av en (2E,6E)-8-hydroksy-3,{{158} }dimetyl-2,6-oktadekensyredel [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9-H3), 2,24 ( 2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (1H hver, begge br d, J ca. 12 Hz, 8-H2) , 5,47 (1H, tq, J 7,1, 0,9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H)] sammen med en bD-glukopyranosyldel [d 4,23 (d, J 7,7 Hz, 1-H)]. Konnektiviteten til bD-glucopyranosyl-delen i 5 ble belyst på grunnlag av HMBC-eksperimenter som vist i fig. 2. Videre ble det observert et typisk glykosyleringsskifte for signalene i 8--posisjon (d C 5: 75,6; 5a: 68,8). På grunnlag av de ovennevnte bevisene ble stereostrukturen til 5 bestemt til å være (2E,6E)-8-bD-glukopyranosyloksy-3,7-dimetyl-2,{ {230}}okta dienoic acid.
Effekter av bestanddelene på tumornekrosefaktor-a (TNF-a)-indusert cytotoksisitet i L929-celler
TNF-a er kjent for å formidle en rekke organskader gjennom sin induksjon av cellulær apoptose. Når det gjelder leveren, har de biologiske effektene av TNF-a vært implisert i leverskade indusert av levertoksiner, iskemi/reperfusjon, viral hepatitt og alkohol.22–24) Derfor anses TNF-a for å være en viktig mål for å oppdage betennelsesdempende og hepatobeskyttende midler. På bakgrunn av det ovennevnte konseptet undersøkte vi beskyttende bestanddeler fra naturlig forekommende produkter på TNF-a-indusert celledød i L929-celler, en TNF-a-sensitiv cellelinje.25) Tidligere har vi rapportert at flere bestanddeler fra Piper Chaba, 26–29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33–35) og Sapindus rarak, 36–38) ble funnet å vise seg i hemmende effekter av TNF-a -indusert cytotoksisitet i L929-celler. Siden fenylethanoid-bestanddelene av C. tubulosa (f.eks. echinacoside, acteosid og isoacteosid, etc.) 5) også ble hemmet denne cytotoksisiteten, undersøkte vi videre iridoid-, phenylpropanoid- og lignanbestanddeler som vist i tabell 4. Som et resultat ble kankanoside A (9, hemming: 16,3 2,0 prosent ved 100 mM), mussaenosidinsyre (10, 44,7 8,7 prosent), 8-epilogansyre (11, 10,7 0,4 prosent), 8-hydroksygeraniol 8-ObD-glukopyranosid (17, 21,3 2,4 prosent) og ( )-pinoresinol ObD-glukopyranosid (22, 22,3 1,6 prosent), ble funnet å vise signifikant aktivitet. Selv om aktivitetene deres var svakere enn aktivitetene til echinacoside (IC50 31,1 mM), acteosid (17,8 mM) og isoaceteosid (22,7 mM), er de viktigste fenyletanoid-bestanddelene.5)
Eksperimentell
Følgende instrumenter ble brukt for å innhente spektrale og fysiske data: spesifikke rotasjoner, Horiba SEPA-300 digitalt polarimeter (l 5 cm); UV-spektre, Shimadzu UV-1600-spektrometer; IR-spektre, Shimadzu FTIR-8100-spektrometer; 1H- og 13C-NMR-spektra, JEOL JNM-ECA600 (600, 150 MHz) og JEOL JNM-ECS400 (400, 100 HMz) spektrometre med tetrametylsilan som intern standard; FAB-MS og høyoppløselig FAB-MS, JEOL JMS-SX 102A massespektrometer; HPLC-detektor, Shimadzu RID-10A brytningsindeks, Shimadzu SPD-10A UV–VIS og Shodex OR-2 optiske rotasjonsdetektorer. HPLC-kolonne, Cosmosil 5C18-MS-II og pNAP (Nacalai Tesque Inc., 250 4,6 mm id) og (250 20 mm id) kolonner ble brukt til henholdsvis analytiske og forberedende formål.
Følgende eksperimentelle forhold ble brukt for kromatografi: normalfase silikagelkolonnekromatografi (CC), silikagel 60N (Kanto Chemical Co., Ltd., 63—210 mesh, sfærisk, nøytral); omvendt fase silikagel CC, Diaion HP-20 (Nippon Rensui) og Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., 100–200 mesh); normalfase TLC, forhåndsbelagte TLC-plater med silikagel 60F254 (Merck, 0,25 mm); omvendt fase TLC, forhåndsbelagte TLC-plater med silikagel RP-18 F254S (Merck, 0,25 mm); omvendt fase HPTLC, forhåndsbelagte TLC-plater med silikagel RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm), deteksjonen ble oppnådd ved å spraye med 1 prosent Ce(SO4)2–10 prosent vandig H2SO4, etterfulgt av oppvarming .
Plantemateriale
Dette elementet ble beskrevet i en tidligere rapport.
Ekstraksjon og isolasjon
Friske stilker av C. tubulosa (2,98 kg) ble finkuttet og ekstrahert tre ganger med metanol under tilbakeløp i 3 timer. Fordampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga et metanolisk ekstrakt (249,1 g, 8,36 prosent). Metanolekstraktet ble utsatt for Diaion HP-20 CC (5,0 kg, H2O→MeOH) for å gi H2O- og MeOH-eluerte fraksjoner (167,84 g, 5,63 prosent og 81,21 g, 2,73 prosent, henholdsvis). Den MeOH-eluerte fraksjonen (61,00 g) ble utsatt for normalfase silikagel CC [1,8 kg, CHCl3–MeOH–H2O (15 : 3 : 0.4→1{{ 36}} : 3 : 0.5→6 : 4 : 1, v/v/v)→MeOH] for å gi syv fraksjoner [Fr. 1 (1,12 g), 2 (9,56 g), 3 (0,89 g), 4 (10,69 g), 5 (8,84 g), 6 (12,52 g) og 7 (4,6{{104}} g)], som beskrevet tidligere.5) Fraksjon 1 (1,12 g) ble separert med reversfase silikagel CC [55 g, MeOH–H2O (4) 0 : 60, v/v)→MeOH] for å gi fem fraksjoner [Fr. 1-1 (132,8 mg), 1-2 (267,0 mg), 1-3 (182,8 mg), {{80}} (31{{ 156}},9 mg), og 1-5 (91,4 mg)]. Fraksjonen 1-1 (132,8 mg) ble ytterligere renset ved HPLC [Cosmosil 5C{{9{{160}}}}MS-II, CH3CN–1 prosent vandig AcOH (1{{166} } : 90, v/v)] for å gi kankanosid M (2, 2,8 mg, 0.{{203}}{{22{{24{{248 }}}}}}01 prosent ), bartsiosid (7, 5,2 mg, 0.0002 prosent ), sinapicaldehyd {{1{{295 }}6}}O-bD-glukopyranosid (21, 1,4 mg, {{3{{3{{3{{310}}9}}5}}{{320} }}}.0001 prosent ). Fraksjonen 1-2 (267,{{350}} mg) ble ytterligere renset ved HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 prosent vandig AcOH (7 : 93, v/v)] for å gi (2E,6E)-3,7-dimetyl-8-hydroksyoktadien{{13{{360}}}}yl-O-bD -glukopyranosid (16, 15,8 mg, {{370}}.{{406}}007 prosent ), 8-hydroksygeraniol 8-ObD glukopyranosid (17, 5,2 mg, 0,0002 prosent ), ( )-pinoresinol ObD-glucopyra noside (22, 22,0 mg, 0,0010 prosent ), eucommin A (23, 5,0 mg, 0,000 prosent ), isoeu2 prosent (24, 21,3 mg, 0,0010 prosent) og ( )-syringaresinol ObD-glucopy ranoside (25, 98,0 mg, 0,0044 prosent). Fraksjon 2 (9,56 g) ble separert med revers-fase silikagel CC [400 g, MeOH–H2O (10:90, v/v)→MeOH→aceton] for å gi fem fraksjoner [Fr. 2-1 (55,9 mg), 2-2 (4,48 g), 2-3 (3,42 g), 2-4 (1,16 g) og 2-5 (31,9 mg) ], som beskrevet tidligere.5) Fraksjonen 2-2 (500,0 mg) ble utsatt for HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 prosent vandig AcOH (5:95, v/v) )] for å gi kankanosid L (1, 6,6 mg, 0,0026 prosent) og 6-deoksykatalpol (6, 455,5 mg, 0,182 prosent). Fraksjonen 2-3 (1,00 g) ble utsatt for HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 prosent vandig AcOH (7:93, v/v)] for å gi syv fraksjoner [Fr . 2-3-1 (66,5 mg), 2-3-2 (20,4 mg), 2-3-3 (26,0 mg), 2-3-4 (136,6 mg), 2-3-5 [ 7 (380,6 mg) , 0,0581 prosent )], 2-3-6 [ gluroside (8, 285,1 mg, 0,0435 prosent )], og 2-3-7 (84,9 mg)]. Fraksjonen 2-3-4 (106,6 mg) ble ytterligere renset ved HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN–1 prosent vandig AcOH (5:95, v/v)] for å gi 6 (68,4 mg, 0,0134 prosent) sammen med salidroside5) (13,7 mg, 0,0027 prosent). Fraksjonen 2-4 (1,16 g) ble utsatt for HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 prosent vandig AcOH (15:85, v/v) og Cosmosil pNAP, CH3CN–1 prosent vandig AcOH (10:90 eller 15:85, v/v)] for å gi kankanosider N (3, 15,6 mg, 0,0007 prosent), O (4, 44,1 mg, 0,0020 prosent) og P (5, 4,2 mg, 0,0002) prosent), 6 (24,0 mg, 0,0011 prosent), 8 (17,7 mg, 0,0008 prosent), kankanoisid A (9, 22,3 mg, 0,0010 prosent), 8-epideoksylogansyre (12, 8,1 mg, 0,0004 prosent). kankanosid E (14, 58,1 mg, 0,0026 prosent), (2E,6Z)-8-bD-glucopy ranosyloxy-2,6-dimetyl-2,6-oktadiensyre syre (15, 31,0 mg, 0,0014 prosent), 16 (168,6 mg, 0,0075 prosent), 17 (94,3 mg, 0,0042 prosent), betulalbusid A (18, 8,1 mg, 0,0004 prosent), 0,03 mg, 0,002 prosent, 0,03 mg, 0,02 prosent. ), og syringin (20, 33,9 mg, 0,0015 prosent). Fraksjon 4 (10,69 g) ble separert med reversfase silikagel CC [500 g, MeOH–H2O (30:70, v/v)→MeOH→aceton] for å gi fire fraksjoner [Fr. 4-1 (878,2 mg), 4-2 (7,06 g), 4-3 (1,57 g) og 4-4 (792,8 mg)], som beskrevet tidligere.5) fraksjon 4-1 (500,0 mg) ble renset ved HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 prosent vandig AcOH (10:90, v/v)] for å gi mussaenosidinsyre (10, 39,1) mg, 0,0031 prosent) og geniposidinsyre (13, 51,2 mg, 0,0040 prosent). Fraksjon 5 (8,84 g) ble separert med revers-fase silikagel CC [400 g, MeOH–H2O (20 : 80 → 30 : 70, v/v) → MeOH → aceton] for å gi syv fraksjoner [Fr. 5-1 (870,2 mg), 5-2 (478,9 mg), 5-3 (3,72 g), 5-4 (979,9 mg), 5-5 (1,19 g), 5-6 (1,27 g), og 5-7 (130,1 mg)], som beskrevet tidligere.5) Fraksjonen 5-1 (870,2 mg) ble ytterligere renset ved HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN –1 prosent vandig AcOH (5:95, v/v)] for å gi 10 (55,3 mg, 0,0025 prosent) og 8-epilogansyre (11, 51,5 mg, 0,0023 prosent).
Kankanosid L (1): Et hvitt pulver, [a]D 26 45,7 (c 0.48, MeOH). Høyoppløselig positiv-ion FAB-MS: Beregnet for C15H24O9Na [M Na] 371,1318; Funnet 371,1309. IR (KBr, cm1): 3433, 2928, 1080. 1H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) dC: gitt i tabell 2. Positiv- ion FAB-MS m/z: 371 [M Na]. Negativ-ion FAB-MS m/z: 347 [MH].
Kankanosid M (2): Et hvitt pulver, [a]D 26 18,7 (c 0.11, MeOH). Høyoppløselig positiv-ion FAB-MS: Beregnet for C15H22O8Na [M Na] 353,1212; Funnet 353,1208. IR (KBr, cm1): 3433, 2924, 1736, 1655, 1076. 1H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) dC: gitt i tabell 2. Positiv-ion FAB-MS m/z: 353 [M Na].
Kankanosid N (3): Et hvitt pulver, [a]D 25 24,6 (c 1.00, MeOH). Høyoppløselig positiv-ion FAB-MS: Beregnet for C16H28O8Na [M Na] 371,1682; Funnet 371,1686. IR (KBr, cm1): 3415, 2874, 1076, 1028. 'H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) dC: gitt i tabell 2. Positiv-ion FAB-MS m/z: 371 [M Na].
Kankanosid O (4): Et hvitt pulver, [a]D23 26,1 (c 2,30, MeOH). Høyoppløselig positiv-ion FAB-MS: Beregnet for C16H26O8Na [M Na] 369,1525; Funnet 369,1528. UV [1 maks (log e), MeOH, nm]: 217 (4,04). IR (KBr, cm1): 3433, 2926, 1696, 1647, 1076. 'H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 3. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) dC: gitt i tabell 2. Positiv-ion FAB-MS m/z: 369 [M Na].
Kankanosid P (5): Et hvitt pulver, [a]D 21 32,7 (c 0.18, MeOH). Høyoppløselig positiv-ion FAB-MS: Beregnet for C16H26O8Na [M Na] 369,1525; Funnet 369,1520. UV [1 maks (log e), MeOH, nm]: 217 (4,08). IR (KBr, cm1): 3434, 2926, 1701, 1647, 1076. 'H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 3. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) dC: gitt i tabell 2. Positiv-ion FAB-MS m/z: 369 [M Na].
Syrehydrolyse av kankanosider L-P (1-5): Løsninger på 1-5 (hver 1.0 mg) i 1.0 M HCl (1.0 ml) ble oppvarmet til 80 grader i 3 timer. Etter avkjøling ble reaksjonsblandingen nøytralisert med Amberlite IRA-400 (OH-form), og harpiksene ble fjernet ved filtrering. Etter fjerning av løsningsmidlet under redusert trykk, ble resten separert av Sep-Pak C18 patronkolonnen (H2O→MeOH). Den H2O-eluerte fraksjonen ble utsatt for HPLC-analyse under følgende forhold: HPLC-kolonne, Kaseisorb LC NH2-60-5, 4,6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Japan); deteksjon, optisk rotasjon [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokyo, Japan); mobil fase, CH3CN–H2O (85:15, v/v); stipendhastighet 0,8 ml/min]. Identifikasjon av D-glukose tilstede i de H2O-eluerte fraksjonene på 1-5 ble utført ved sammenligning av retensjonstidene og den optiske rotasjonen med den til en autentisk prøve [tR 17,9 min (positiv)].
Hydrogenering av {{0}}Deoxycatalpol (6) En suspensjon på 6 (12.0 mg) og 10 prosent palladiumkarbon (5.0 mg) i MeOH (2,0 ml) ble omrørt ved romtemperatur under en H2-atmosfære i 2 timer. Katalysatoren ble filtrert av, og filtratet ble kondensert under redusert trykk for å gi 1 (12,0 mg, kvant.).
Enzymatisk hydrolyse av kankanosidene O (4) og P (5) med b-glukosidase Til en løsning av 4 (8,0 mg) i H2O (1,5 ml) ble det tilsatt b-glukosidase (4,7 mg, fra mandel, Oriental Yeast Co., Tokyo, Japan), og løsningen ble omrørt ved 37 grader i 24 timer. Reaksjonen ble stoppet ved tilsetning av EtOH (5,0 ml), blandingen ble kondensert under redusert trykk. Resten ble ekstrahert med EtOAc og fordampning av løsningsmidlet ga (2E,6E)-8-hydroksy-2,{{20}}dimetyl-2,{{22} }oktadekensyre20) (4a, 3,9 mg, 92 prosent). Gjennom en lignende prosedyre, (2E,6E)-8-hydroksy-3,7-dimetyl-2,6-oktadekensyre21) (5a, 0,9 mg, 94 prosent ) ble oppnådd fra kankanosid P (5, 1,8 mg).
Bioassaymetode Hemmende effekt på TNF-a-indusert cytotoksisitet i L929-celler ble analysert ved metoden beskrevet i en tidligere artikkel.5)
Statistikk Verdier er uttrykt som gjennomsnitt SEM Enveis variansanalyse (ANOVA) etterfulgt av Dunnetts test ble brukt til statistisk analyse. Sannsynlighetsverdier (p) mindre enn 0.05 ble ansett som signifikante.
cistanche urt
