Jujube Polysaccharides dempet anemi hos rotter med kronisk nyresykdom

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Shiying Huang, et al

Abstrakt

Jujube polysaccharides (JP) er en av de aktive glykanene fra maten i kostholdsfrukten til Ziziphus jujuba, som har blitt vurdert for behandling av blodmangel. I denne studien, akronisknyresykdom(CKD) rottemodell ble brukt til å evaluere effekten av JP og dens mekanisme på CKD-assosiert anemi. Hos CKD-rotter ble JP-behandlingen betydelig forbedretnyrefunksjon, nyrepatologiskskade, og hematologiske parametere, inkludert økende røde blodlegemer, hemoglobin, hematokrit og antall blodplater. Dessuten viste LC-MS/MS-målrettede metabolomiske resultater at JP fremmet frigjøring av kortkjedede fettsyrer (SCFAs) hos CKD-rotter. Dessuten vekslet JP serum erytropoietin (EPO) nivået, nyre EPO mRNA, ognyreEPO-protein via HIF-signalering. Samlet gir disse resultatene bevis på at effekten av JP på CKD-assosiert anemi kan være involvert i reguleringen av SCFA-frigjøring og erytropoietinproduksjon, og støtter videre utvikling av JP som kosttilskudd ved behandling av CKD-assosiert anemi.

Nøkkelord: Jujube polysakkariderKronisknyre sykdomAnemi Erytropoietin Hypoksi-induserbar faktor- Kortkjedede fettsyrer

Klikk her for å få mer informasjon om Cistanche

1. Introduksjon

Kronisknyre sykdom(CKD) er definert som et klinisk syndrom av nyrestrukturelle abnormiteter eller funksjonssvikt og blir en stadig mer folkehelsebelastning over hele verden (Webster, Nagler, Morton, & Masson, 2017). Nyreanemi er blant de vanligste komplikasjonene ved CKD som bidrar til økt risiko for død (Locatelli et al., 2019). Manglende produksjon av erytropoietin (EPO) er en anerkjent hoveddrivende faktor for anemi ved CKD (Pappa, Dounousi, Duni, & Katopodis, 2015). EPO produseres i leveren ognyre, som er avgjørende for erytrocyttproduksjon (Lappin & Lee, 2019). Under hypoksiske forhold kan hypoksi-induserbar faktor (HIF) aktivere uttrykket av EPO (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). Å målrette HIF for å indusere EPO-produksjon har derfor blitt ansett som en ny terapeutisk strategi for å behandle CKD-assosiert anemi.

Jujube er fruktene av Ziziphus jujuba Mill. (Rhamnaceae), også kjent som kinesisk dato. Jujube har en lang tradisjonell bruk som strekker seg over tusenvis av år som medisinsk urt og kosttilskudd. Jujube brukes som et helsetilskudd for personer som har hematogene eller lidd av kronisk underernæring. Jujube polysaccharides (JP), en vannløselig komponent sammensatt med forskjellige forhold mellom monosakkarid og uronsyre (Ji, Hou, Yan, Shi, & Liu, 2020), er en av de aktive ingrediensene i jujube (Ji et al., 2017) ), som har blitt godt akseptert for å vise hepatobeskyttende effekt og immunmodulerende aktivitet og forbedre tarmbarrierefunksjonen (Liu et al., 2015, Yue et al., 2015). Faktisk anses JP også ofte for å ha potensielle effekter på anemi. Imidlertid er den molekylære mekanismen til JP ved behandling av anemi fortsatt mindre kjent.

De siste årene har metabolomikk blitt mye brukt for å forstå potensielle faktorer som bidrar til sykdomsprogresjon. Målrettet metabolomikk har blitt mye brukt for å identifisere molekylære markører for komplekse menneskelige sykdommer som CKD. Indoksylsulfat (IS) og p-cresylsulfat (PCS) ble bekreftet å være biomarkøren for CKD-progresjon (Meijers & Evenepoel, 2011), og økt grad av trimetylamin-N-oksid (TMAO) kan direkte føre til nyretubulointerstitiell fibrose og dysfunksjon (Tang et al., 2015). Kortkjedede fettsyrer (SCFA), de mikrobielle avhengige metabolittene i tarmen, er energisubstratene med evne til å påvirke ulike fysiologiske prosesser (LeBlanc et al., 2017), og reduksjonen av SCFA er rapportert å bidra til CKD-progresjon (Koh, De Vader, Kovatcheva-Datchary, & B¨ ackhed, 2016, Wang et al., 2019). Dessuten var SCFAer i stand til å beskytte nyrestrukturen mot skade gjennom hemming av oksidativt stress (Li, Ma, & Fu, 2017). Samtidig har SCFA vist seg å vise en gunstig effekt på jernabsorpsjon og oppregulere embryonal/føtalt globin-genuttrykk, som induserer erytropoese og korrigerer anemi (Tako, Glahn, Knez, & Stangoulis, 2014). Mekanismen til SCFA ved nyreanemi er imidlertid fortsatt nødvendig å bli belyst.

I denne studien antar vi at JP kan regulere frigjøringen av SCFA og stimulere HIF-mediert EPO-produksjon, hvis utfall er å korrigere nyreanemi. Her vil vi undersøke effekten av JP for å lindre nyreanemi hos 5/6 nefrektomiserte-induserte CKD-rotter, inkludert nyrefunksjoner og hematologiske parametere. En målrettet metabolomikk-tilnærming ved bruk av LC-MS/MS er utviklet for å bestemme åtte SCFA-er, inkludert eddiksyre, propansyre, isosmørsyre, smørsyre, 2-metylsmørsyre, isovalerinsyre, valeriansyre og heksansyre i fekal og nyreprøver, og nivåene av målrettede SCFAer blir evaluert hos friske og CKD-rotter. I tillegg avsløres også involveringen av HIF-signalering i JP-behandlede rotter.

Fig. 1. Typisk GC-MS kromatografi av JP. (A) Monosakkaridstrukturformler etter aldononitrilacetatderivatisering; (B) De representative GC-MS blandet ionekromatografi (MIC) profiler av standard monosakkarider blanding og JP hydrolyserte monosakkarider. Toppene i kromatografiprofiler tilsvarte den kjemiske markøren vist i (A): 1. rhamnose, 2. arabinose, 3. fucose, 4. xylose, 5. mannose, 6. glukose, 7. galaktose, 8. inositol (ISTD) ).

2. Materialer og metoder

2.1. Fremstilling av jujube polysakkarid

Fruktene av Z. jujuba ble kjøpt fra Shenzhen Huahui Pharmaceutical Co., Ltd. Materialene ble autentisert av Dr. Jianping Chen i henhold til Pharmacopoeia of the People's Republic of China 2015-utgaven. Kupongprøvene ble oppbevart på Shenzhen Traditional Chinese Medicine Hospital med nummeret 18100601.

Den rå JP ble ekstrahert fra jujuben som beskrevet tidligere, med mindre modifikasjoner (Ji et al., 2020). Kort fortalt ble jujuber inkubert med 10 volum vann (v/w) i et vannbad ved 80 ◦C i 3 timer og ekstrahert 3 ganger. Etter filtrering, kombiner filtratene og kondenser denne kombinasjonen i en rotasjonsfordamper under kontrollert vakuum. Konsentratløsningen ble presipitert ytterligere ved å tilsette fire ganger etanol (v/v) ved 4 ◦C i 12 timer. Bunnfallet ble samlet ved sentrifugering og ble tørket under redusert trykk til tørrhet for å oppnå den urene JP. Renheten til JP ble bestemt til å være 80 prosent ved å bruke kalorimetri.

2.2. Karakterisering av monosakkaridsammensetningen til jujube-polysakkarid

Et Shimadzu GC–MS-system (Shimadzu GC–MS TQ8040 koblet til Shimadzu GC 2010 pluss) utstyrt med EI-kilde, SH-Rxi-5Sil MS kapillærkolonne (30 m × 0,25 mm ID, 0,25 µm filmtykkelse, Shimadzu) ble brukt for å bestemme derivatiseringshydrolyserte monosakkarider med et splittforhold på 10:1. Injeksjonstemperaturen, ionekilden og grensesnittet var 250 ◦C, 200 ◦C og 250 ◦C. Kolonnens starttemperatur ble holdt ved 120 ◦C i 1 min, deretter økt med 15 ◦C/min til 160 ◦C og holdt i 4 min, 2 ◦C/min til 165 ◦C og holdt i 2 min, 20 ◦C /

min til 195 ◦C, 5 ◦C/min til 250 ◦C, og holdt i 3 min. Heliumbærergassstrømningshastigheten ble holdt på 46 cm/s og 2 μL av hver prøve ble injisert i instrumentet. Analyttene ble kvantifisert i den valgte ioneovervåkingsmodusen (SIM), målionet: rhamnose (m/z 129.00), arabinose (m/z 115.00), fucose (m/ z 103.00), xylose (m/z 115.00), mannose (m/z 115.00), glukose (m/z 115.00 ), galaktose (m/z 115.00), inositol (m/z 126.00). Monosakkaridstandardene ble oppført som følger: L (pluss )-arabinose (1506–200202), fukose (112014–201902), D-xylose (111508–201605), D-glukose (110833–201908) (–1216n808), 1216n. ), galaktose (100226–201807), D-mannose (140651–201805) ble kjøpt fra National Institutes for Food and Drug Control. Inositol ble oppnådd fra Sigma (I7508-50 g).

Den ekstraherte JP (10 mg) ble hydrolysert til monosakkarider med 10 ml 2 mol/L trifluoreddiksyre (TFA) ved 105 ◦C i 3 timer, og de hydrolyserte monosakkaridene fra JP ble konsentrert og vasket under redusert trykk ved 60 ◦C til fjerne TFA, og restene ble rekonstituert med 2 ml vann. Tilsatte 250 µL 20 mg/ml hydroksylaminhydroklorid/pyridinløsning i 100 µL hydrolyserte monosakkarider og holdt i et 90 ◦C vannbad i 45 minutter. Og så ble 250 µL eddiksyreanhydrid tilsatt og holdt i et 90 ◦C vannbad i ytterligere 45 minutter. Ved slutten av reaksjonen ble blandingen ekstrahert med 1 ml cykloheksan 5 ganger, og cykloheksanlaget ble konsentrert til 1 ml. Injiserte 1 µL supernatant i GC–MS for analyse (Li & Shi, 2013).

2.3. Dyr

Alle eksperimenter ble utført med protokoller godkjent av Institutional Animal Care Use Committee ved Guangzhou University of Chinese Medicine. Sprague-Dawley-rotter, hann- og hunnrotter med en vekt på 180–220 g, ble hentet fra Guangdong Medical Laboratory Animal Center (Foshan, Kina, tillatelse nr. SCXK (Yue) 2008–0002) og holdt i en spesifikk patogenfri (SPF) ) dyreanlegg under en 12 timers lys-mørke syklus, med mat og vann fritt.

For å indusere nyresvikt ble 5/6 nefrektomi utført i henhold til forrige beskrivelse (Chen et al., 2019). All den kirurgiske operasjonen ble utført i narkose med 10 prosent kloralhydrat. Den falske operasjonsgruppen (n=6) tok de samme trinnene for å åpne bukhulen og avslørte nyren. De 5/6 nefrektomirottene ble tilfeldig delt inn i to grupper. Rotter uten behandling (CKD-gruppe, n=6), og rotter som mottar JP (CKD pluss JP-gruppe, n=6) ​​oralt ved sondemating i en dose på 1,2 g/kg/d. Etter 90 dagers drift begynte 90 dagers administrasjon. Den 90. dagen var den endelige administrasjonstiden for JP til rotter, og etter 24 timer ble dyrene avlivet ved å ta blod fra abdominal aorta, og urin, avføring, serum og nyreprøver ble samlet fra hver rotte. Alle prøver ble lagret ved -80 ◦C før videre analyse.

2.4. Biokjemisk analyse

I henhold til produsentens instruksjoner ble blodurea-nitrogen (BUN) og serumkreatinin (Scr) målt med kreatinin-serumdeteksjonssett og BUN-deteksjonssett (WAKO, Ginza, Japan), og urinprotein ble målt med Elisa-settet (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institution, Nanjing, Kina). Røde blodlegemer (RBC), hemoglobin (Hb), hematokrit (HCT) og antall blodplater (PLT) ble analysert av Hematology Systems (Siemens 2021i, Erlangen, Tyskland) i henhold til produsentens instruksjoner.

2.5. Histologisk undersøkelse

Periodisk syre-Schiff (PAS) og Masson-farging ble brukt for å vurdere den nyrepatologiske skaden, blant dem ble PAS-farging brukt for å avsløre renal tubulær atrofi og glomerulært område, og Masson-farging var for nyre-interstitiell fibrose (Xie et al. , 2020). Den kvantitative analysemetoden ble utført i henhold til tidligere studier (Chen et al., 2019). Kort fortalt ble tubulær atrofi-score i PAS-farging definert som følger: 1. sjelden enkelt atrofisk tubuli; 2. flere klynger av atrofiske tubuli; 3. massiv atrofi. Det glomerulære området ble målt med ZEN 3.1-programvare (Axio Scope A1, ZEISS, Jena, Tyskland). Det fibrotiske området i Masson-farging ble målt ved å bruke Image J-programvare (NIH, Bethesda, MD, USA). Minst ti mikroskopiske felt (200×) med 6 rotter per gruppe ble fanget tilfeldig for å måle atrofi-skåren, glomerulært område og fibrotisk område, med minst én glomerulus i hvert mikroskopisk felt.

2.6. Immunhistokjemi analyse

Nyreparafindelen (4 μm) fra hver prøve ble gradvis dehydrert av xylen to ganger, og gradientetanol (100–95–90–80–70 prosent), antigen ble hentet med sitronsyrebuffer (pH 6,0) ) i 30 minutter, blokkert med 3 prosent hydrogenperoksid i 10 minutter og geiteserum i 30 minutter ved romtemperatur. Vevsseksjonene ble inkubert separat av primært antistoff HIF-1 (Bioss, bs-0737R, 1:500, Lot: BA01279129), HIF-2 (Bioss, bs-1447 R, 1: 500, Lot: BJ2044786) ved 4 ◦C i 10 timer og HRP-konjugert geit-anti-kanin sekundært antistoff (Abcam, ab6712, 1:1000) ved romtemperatur i 30 minutter, DAB (diaminobezid in) ble brukt til å detekterer HRP-aktiviteten, ble kjernen motfarget av hematoksylin. de. Immunhistokjemien ble analysert under mikroskopiske felt 400× fra hver gruppe og fikserte skalastangen=20 μm av Axio Scope A1, ZEISS, Jena, Tyskland. Kjernen var blåfarging av hematoksylin og immunopositiviteten til DAB var brun, jo dypere DAB-farging betyr sterkere immunhistokjemi positiv.

2.7. EPO-deteksjon

Serum-EPO-innhold ble detektert av ELISA-settet (Abcam, ab274398), og eksperimentet refererte til ELISA-settprotokollen. Som oppsummert, tilsatt EPO-antistoffcocktail i prøven og inkubert i 1 time. etter inkubering, vasket hver brønn med vaskebuffer 3 ganger, tilsatt TMB til den andre inkuberte i 15 minutter og stanset reaksjonen.

Nyre totalt mRNA ble ekstrahert fra frosset nyrevev ved bruk av Trizol og oversatt mRNA til cDNA. Sanntids-PCR ble utført med Maxima SYBR Green/ROX qPCR Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA USA, K0223) i henhold til produsentens protokoll. SYBR grønt signal ble innhentet og målt av ABI Prism 7300 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA). Primerne var: 5'-CCG TCC CAG ATA CCA AAG TC-3' og 5'-ACC CGA AGC AGT GAA GTG-3' for rotter EPO (214 bps, NM_017001. 2); 5′- GTC GGT GTG AAC GGA TTT G-3′ og 5′-TCC CAT TCT CAG CCT TGA C- 3′ for GAPDH (181 bps, NM_017008.3), husholdning gens som internkontroll i alle saker. Og den relative kvantifiseringen av genuttrykk ble beregnet ved den normaliserte genuttrykksmetoden (2− ΔΔCT).

En like mengde protein fra nyrecortexlysater ble lastet og separert med 10 prosent SDS-gel og deretter overført til nitrocellulosemembraner. Etter å ha blitt blokkert i 5 prosent ikke-fettholdig melk i 2 timer ved romtemperatur, ble membranene inkubert med primært antistoff ved 4 ◦C over natten. Deretter ble membranene inkubert med HRP (pepperrotperoksidase)-konjugert anti-mus IgG (Life Technologies) ved romtemperatur i 45 minutter. HRP-aktivitet ble visualisert ved bruk av Clarity Western ECL Substrate og analysert av Tanon-bildesystemet. Følgende primære antistoff ble brukt i denne studien: monoklonalt EPO (B- 4) fra mus (Santa Cruz Biotechnology, sc-5290, 1/500 fortynning), monoklonalt -aktin fra mus (cellesignalteknologi, 8H10D10, 1/1000 fortynning).

2.8. Kortkjedede fettsyrer analyse

Et Shimadzu UHPLC-LCMS/MS-system (Shimadzu LC-MS 8045 koblet til Shimadzu LC-20AD) utstyrt med ESI-kilde.

Kromatografiske separasjoner ble utført på Shim-pack GIST C18 (2,1 × 100 mm, 2 μm) kolonne, ved bruk av {{10}}.1 prosent maursyre i vann ( løsningsmiddel A) og acetonitril (løsningsmiddel B) ved en strømningshastighet på 0,3 ml/min ved en gradienteluering: 0–9 minutter, 25–30 prosent B; 9–11 min, 30–40 prosent B; 11–20 min, 40–50 prosent B; 20–20,1 min, 50–100 prosent B; 20,1–23 min, 100 prosent B; 23,1 min–25 prosent B for re-ekvilibrering. Kolonnetemperaturen var 35 ◦C, og autosampleren ble holdt ved 4 ◦C under analyse, 1 μL av hver prøve ble injisert i instrumentet. Analyttdeteksjonen ble utført i multippelreaksjonsovervåkingsmodus (MRM), operert i positiv ionemodus. MS-parametrene: Strømning av forstøvergass: 3,0 l/min; Tørking Gassstrøm: 10 l/min; Oppvarming Gassstrøm: 10 L/min; DL-temperatur: 250 ◦C; grensesnitttemperatur: 300 ◦C; Varmekloss: 400 ◦C. MRM-overganger og kollisjonsenergi (CE) ble valgt og optimalisert ved direkte infusjon av hvert standardderivat. Analytmengdene MRM-overganger ble oppsummert i tabell S1.

Fekale SCFAer: Tilsatte 100 μL 50 prosent acetonitril i 3 mg av den lyofiliserte avføringen og vortexet i 2 minutter. Deretter ble blandingen sentrifugert ved 12000 rpm i 10 minutter ved 4 ◦C og pipettert supernatanten.

Nyre SCFAer: Vektet 100 mg nyrevev og vortexet på is med 4 ganger normal saltvann (100 mg/400 μL) for å forberede vevshomogenat. Tilsatt 3 ganger kald metanol i 300 μL vevshomogenat og vortexet i 2 minutter, deretter ble blandingen sentrifugert ved 12000 rpm i 10 minutter ved 4 ◦C og pipettert supernatanten. Supernatanten ble tørket med N2 og rekonstituert med 100 μL 50 prosent acetonitril.

Tilsatt 500 mmol/L N-(3-dimetylaminopropyl)-Ń-etylkarbodiimidhydroklorid (EDC, Aladdin, Shanghai, Kina), 50 mmol/L 3H-[1,2,3]-Triazolo[4, 5-b] pyridin-3-ol (HOAT, Aladdin, Shanghai, Kina) og 50 mg/mL 12C-Dansylhydrazin (12C-DnsHz, J&K, Beijing, Kina) inn i 20 μL av prøveekstraksjonen i sekvens med samme volum. EDC og HOAT ble tilberedt med fersk 500 mmol/L 2-(N-Morpholino) etansulfonsyre (MES, Macklin, Shanghai, Kina). Etter inkubering ved 20 ◦C i 90 minutter, ble 20 μL 50 mmol/L CuCl2 (Macklin, Shanghai, Kina) tilsatt til blandingen for å stoppe derivatiseringsreaksjonen ved 40 ◦C i 30 minutter (Zhao & Li, 2018). Ved slutten av derivatiseringen ble blandingen 10 ganger fortynnet med 25% acetonitril. Før analyse ble 100 μL supernatant blandet med en 100 μL intern standardløsning. 13C-DnsHz-etiketten ble brukt som interne standarder (ISTD1-8) i samsvar med den samme derivatiseringsreaksjonen. SCFA-standarden: eddiksyre (AA, A116173), propansyre (PA, P110446), isosmørsyre (IBA, I103524), smørsyre (BA, B110438), 2-metylsmørsyre (2- BA, M107377), isovalerinsyre (IVA, I108280), valerinsyre (VA, V108271), heksansyre (HA, H103632) ble levert fra Aladdin (Shanghai, Kina).

2.9. Statistisk analyse

Dataene for hver gruppe ble uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik (SD). Statistisk signifikans blant grupper ble utført ved enveis ANOVA og post hoc analyse med Student-Newman-Keuls (SNK) test eller Dunnetts T3 test. Verdien av P < 0.05="" ble="" ansett="" som="" statistisk="" signifikant.="" alle="" data="" ble="" utført="" ved="" bruk="" av="" spss="" statistikkprogramvare="" (versjon="" 22.0,="" spss="" inc.,="" chicago,="" il,="">

3. Resultater

3.1. JP forbedret nyrefunksjonen til CKD-rotter

Monosakkaridet til JP ble karakterisert før behandling på dyr. JP brukt i denne studien var sammensatt av syv monosakkarider, det vil si rhamnose (1,62 prosent), arabinose (15,79 prosent), fukose (0,21 prosent), xylose (4,56 prosent), mannose (3. 00 prosent ), glukose (73,44 prosent) og galaktose (4,99 prosent) (fig. 1). Vår analysemetode ble validert av linearitet, presisjon, repeterbarhet, stabilitet og gjenoppretting (tabeller S2–S3). Analyttene ble bekreftet å være stabile ved romtemperatur i 24 timer. Utbyttet av JP bør være høyere enn 8,63 prosent, og renheten bør ikke være mindre enn 77,16 prosent. Den nevnte kjemiske analysen av JP fungerte som kvalitetskontrolltilnærming for å sikre reproduserbarheten av dyrestudiene nedenfor.

Scr, BUN og urinprotein var mest representative for nyrefunksjoner. Scr-, BUN- og urinproteinnivåer i CKD-rotter var signifikant høyere enn i sham-gruppen (P < {{0}}.01).="" etter="" 90="" dagers="" behandling="" med="" jp="" ble="" nivåene="" av="" scr,="" bun="" og="" urinprotein="" redusert="" sammenlignet="" med="" ckd-gruppen="" (p="">< 0,01)="" (fig.="">

3.2. JP forbedret den nyrepatologiske skaden hos CKD-rotter

Vekten av hele høyre nyre for sham-gruppen og den resterende høyre nyren for CKD og CKD pluss JP-gruppen ble brukt til nyremorfologivurdering etter nyrevekt (KW) og nyrevekt/kroppsvekt (KW/BW). På slutten av eksperimentene ble KW og KW/BW for CKD-gruppen økt sammenlignet med den falske gruppen (alle P < {0}}.05).="" i="" den="" 5/6="" nefrektomi-induserte="" ckd-modellen="" forårsaket="" reduksjonen="" av="" nyreproteinaseaktiviteten="" kompenserende="" nyrevekst,="" selskaper="" med="" nyrehypertrofi="" (morton="" &="" griffiths,="" 1985),="" og="" vår="" bekreftet="" denne="" uttalelsen.="" etter="" jp-behandling="" ble="" kw="" redusert="" signifikant="" (p="">< 0.05)="" og="" lukket="" for="" en="" falsk="" gruppe="" (p="" ˃="" 0,05);="" mens="" kw/bw="" ble="" noe="" redusert="" (p="" ˃="" 0,05).="" (fig.="">

Fig. 2. JP beskyttet nyrefunksjonen hos CKD-rotter. Nivået av Scr (A), BUN (B) og urinprotein (C) i forskjellige grupper. (D) nyrevekt, (E) KW/BW. Data ble presentert som gjennomsnitt ± SD, n=6 per gruppe (**P < 0.01="" sammenlignet="" med="" falsk="" gruppe;="" #p="">< 0.05="" ,="" ##p="">< 0,01="" sammenlignet="" med="">

I CKD-gruppen ble renal tubulær atrofi vist massiv atrofi sammenlignet med sham-gruppen (P < {{0}}.01),="" og="" glomerulus-området="" og="" nyre-interstitiell="" fibrose="" var="" nesten="" to="" ganger="" mer="" enn="" den="" til="" den="" falske="" gruppen="" i="" kvantitativ="" analyse="" (p="">< 0.01).="" etter="" jp-behandling="" ble="" den="" tubulære="" atrofi-skåren="" redusert="" med="" nesten="" to="" ganger="" (p="">< 0,01),="" glomerulusområdet="" ble="" nesten="" gjenvunnet="" til="" en="" falsk="" gruppe="" (p="">< 0,01),="" og="" nyre-interstitiell="" fibrose="" ble="" redusert="" med="" en="" tredjedel="" (p="">< 0,01)="" som="" sammenlignet="" med="" ckd-gruppen="" (fig.="">

Fig. 3. JP beskyttet nyrestrukturen hos CKD-rotter. (A) PAS-farging. (B) Masson-farging. (C) Tubulær atrofi score. (D) Glomerulært område (E) Fibrotisk område. Alle bildene presenteres med identisk forstørrelse, 200×, skalalinje=100 μm. Data ble presentert som gjennomsnitt ± SD, n=6 per gruppe (**P < 0.01="" sammenlignet="" med="" falsk="" gruppe;="" #p="">< 0.05,="" ##p="">< 0.01="" sammenlignet="" med="" ckd-gruppen="">

3.3. JP modulerte de hematologiske parametrene hos CKD-rotter

For hematologiske parametere ble biokjemisk analyse, RBC, Hb, HCT og PLT målt. Hos CKD-rotter ble nivået av RBC redusert fra 9.06 til 7,20 × 1012 /L, Hb fra 15,28 til 13,22 g/dL, HCT fra 47,1 til 40,4 prosent, og PLT økt fra 1012 til 1526 × 109 /L sammenlignet med en falsk gruppe (P < 0,01),="" som="" indikerte="" at="" tegn="" på="" anemi="" ble="" observert="" hos="" ckd-rotter.="" de="" reduserte="" nivåene="" av="" rbc,="" hb,="" hct="" og="" plt="" i="" jps-behandlede="" ckd-rotter="" ble="" gjenopprettet="" (p="">< 0,01)="" (fig.="">

Fig. 4. JP rehabiliterte de hematologiske parameterne hos CKD-rotter. Nivået av PLT (A), RBC (B), Hb (C), HCT (D). Data ble presentert som gjennomsnitt ± SD, n=6 per gruppe (**P < 0.01="" sammenlignet="" med="" falsk="" gruppe;="" #p="">< 0.05="" ,="" ##p="">< 0,01="" sammenlignet="" med="">

3.4. JP stimulerte EPO-uttrykk

Sammenlignet med sham-gruppen var serum-EPO-nivået og nyre-EPO-mRNA-mengden signifikant redusert hos CKD-anemi-rotter (P < 0.01).="" western="" blotting-analyse="" avslørte="" at="" epo-proteinnivået="" viste="" en="" liten="" reduksjon="" i="" ckd-gruppen="" uten="" signifikant="" forskjell.="" etter="" jp-behandling="" ble="" serum-epo-nivået,="" nyre-epo-mrna="" og="" protein="" betydelig="" oppgradert="" sammenlignet="" med="" ckd-gruppen="" (p="">< 0.01="" eller="" p="">< 0.05)="" (fig.="">

I nyrebarken ble HIF-1 hovedsakelig produsert av renale tubulære epitelceller, HIF-2 ble hovedsakelig uttrykt i endotelceller og nyreinterstitielle fibroblaster (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). Immunohistokjemianalyse viste at, som for HIF-1, hos CKD-rotter, var tubularene sterkere farget enn den falske gruppen. Etter JP-behandling hadde nyretubularet sterkere og større områdefarging sammenlignet med CKD-gruppen som den røde pilen indikert i fig. 5E. HIF-2 viste relativt svak immunhistokjemi positiv ved nyreinterstitial i Sham-gruppen. I CKD-gruppen viste HIF-2 immunhistokjemi positiv. Etter JP-behandling viste HIF-2 sterkere immunhistokjemi sammenlignet med CKD-gruppen (fig. 5F).

Fig. 5. JP stimulerte EPO-ekspresjonen. (A) Serum EPO-innhold. (B)NyreEPO-relativt mRNA. GAPDH ble betraktet som husholdningsgen. (C) De representative western blot-bildene av EPO-proteinuttrykk. (D) Densitometrisk analyse av EPO. (E) Immunhistokjemi av HIF{{0}}. (F) Immunhistokjemi av HIF- 2 normalisert til -aktininnhold. Immunhistokjemibildene presenteres med identisk forstørrelse, 400×, skala bar=20 μm. Kjernen var blåfarging av hematoksylin og immunopositiviteten til DAB var brun, jo dypere DAB-farging betyr sterkere immunhistokjemi positiv. Den røde pilen peker på immunhistokjemi positiv. Data ble presentert som gjennomsnitt ± SD, n=6 per gruppe (*P < 0,05="" sammenlignet="" med="" falsk="" gruppe;="" #p="">< 0,05,="" ##p="">< 0,01="" sammenlignet="" med="">

3.5. JP induserte utgivelsen av SCFAer

En LC-MS-basert målrettet metabolomikk-tilnærming ble utviklet for å kvantifisere frigjøringen av åtte SCFA-er i fekale prøver. Den etablerte metoden ble validert ved å vurdere linearitet, sensitivitet, presisjon, matriseeffekt, nøyaktighet og stabilitet. Kvalitetskontrollprøver med lav, middels og høy konsentrasjon (LQC, QMC, HQC) for sensitivitet, presisjon, nøyaktighet og stabilitetsvalidering, ble valgt i henhold til de laveste, middels og høyeste konsentrasjonspunktene i matrisestandardkurven, og resultatene ble vist i tabellene S4–S6. Analyttene ble bekreftet å være stabile ved 4 ◦C i 48 timer. LC-MS/MS-kromatogrammet til SCFAer ble vist i fig. 6.

Fig. 6. UHPLC-MS/MS-kromatografi av SCFAer. (A) Den øvre var SCFAs derivatisering kjemisk ligning; under var SCFAs strukturformel etter dansylhydrazin-derivatisering; (B) UHPLC/MRM-MS-kromatogrammet av blandingsstandarder og fekal prøve, de kromatografiske toppene i (B) ble korrespondert med den kjemiske markøren vist i (A):1. 12C-eddiksyre; 2. 13C-eddiksyre (ISTD1); 3. 12C-propansyre; 4. 13C-propansyre (ISTD2); 5. 12C-iso smørsyre; 6. 12C-smørsyre; 7. 13C-isosmørsyre (ISTD3); 8. 13C-smørsyre (ISTD4); 9. 12C-2-metylsmørsyre; 10. 12C-isovalerianesyre; 11. 12C valerinsyre; 12. 13C-2-metylsmørsyre (ISTD5); 13. 13C-isovalerianesyre (ISTD6); 14. 13C-valerinsyre (ISTD7); 15. 12C-heksansyre; 16. 13C-heksansyre (ISTD8).

Når det gjelder fekal prøve, i CKD-gruppen, ble nivåene av AA og PA markant redusert nesten 4 ganger og 5 ganger sammenlignet med en falsk gruppe (P < 0.01);="" mens="" etter="" jp-behandling="" ble="" mengder="" av="" aa="" og="" pa="" gjenopprettet="" til="" 4/5="" av="" den="" falske="" gruppen="" (p="">< {{10}}.01).="" på="" samme="" måte="" ble="" nivåene="" av="" ba="" og="" va="" kraftig="" redusert="" nesten="" 30="" ganger="" og="" 4="" ganger="" i="" ckd-gruppen="" sammenlignet="" med="" en="" falsk="" gruppe="" (p="">< 0.01).="" jp-behandling="" viste="" en="" økende="" trend,="" men="" ingen="" signifikant="" forbedring.="" innholdet="" i="" iba,="" iva="" og="" 2-ba="" viste="" ingen="" merkbar="" endring="" mellom="" ckd="" og="" falsk="" gruppe.="" etter="" jp-behandling="" ble="" iba-,="" iva-="" og="" 2-ba-nivået="" økt="" (p="">< 0,01).="" imidlertid="" viste="" ikke="" ha="" åpenbar="" endring="" blant="" de="" tre="" gruppene="" (fig.="" 7a).="" dessuten,="" som="" for="" nyrevev,="" i="" ckd-gruppen,="" var="" mengden="" av="" åtte="" scfa-er="" signifikant="" redusert="" (p="">< 0,01),="" mens="" etter="" jp-behandling="" ble="" nivåene="" av="" scfa-er="" økt="" med="" unntak="" av="" ba="" og="" ha="" (p="">< 0,01="" eller="" p="">< 0,5).="" ba="" var="" noe="" økt="" uten="" signifikant,="" og="" ha="" viste="" ingen="" endring="" etter="" jp-behandling="" (fig.="">

Fig. 7. SCFA-innhold i forskjellige grupper. (A) Fekale SCFAer. (B) nyre-SCFAer. Data ble presentert som gjennomsnitt ± SD, n=6 per gruppe (**P < 0.01="" sammenlignet="" med="" falsk="" gruppe;="" ##p="">< 0.="" 01,="" #p="">< 0,05="" sammenlignet="" med="">

4. Diskusjon

I den nåværende 5/6 nefrektomi CKD rottemodellennyrefunksjonindikatorer (Scr, BUN og urinprotein) ble betydelig økt, den gjenværende nyrehypertrofien og den nyrepatologiske skaden dukket opp, ledsaget av endrede hematologiske parametere. Disse dataene var i tråd med tidligere studier (Garrido et al., 2015, Morton & Griffiths, 1985). Indikatorene ovenfor viste at CKD-anemi rotter indusert av 5/6 nefrektomi ble vellykket etablert og kunne verifiseres for den gunstige effekten av JP ved behandling av CKD-anemi rotter. Mednyrefunksjonytterligere forverret, har anemi blitt anerkjent som en kjent opportunistisk CKD-komplikasjon, som påvirket pasientenes livskvalitet negativt (Locatelli, Fishbane, Block, & Macdougall, 2017). Å forstå risikofaktorene knyttet til utviklingen av nyreanemi vil bidra til å utvikle terapeutiske tilnærminger. I dag har sammenhengen mellom sykdom og metabolsk tarmmikrobiota tiltrukket seg stadig mer oppmerksomhet, mens forholdet mellom SCFA og nyreanemi er fortsatt mindre kjent. SCFA-er, hovedsakelig metabolisert av Clostridium, Coprococcus og Bacteroides (Koh et al., 2016), er rettet mot spesifikke membranbundne reseptorer, som spiller en viktig rolle i å opprettholde balanse i tarmmiljøet og helse for hele kroppen. SCFA-er har allerede vist seg å ha en uadskillelig sammenheng med CKD, og ​​nivåene av eddiksyre, propionsyre, smørsyre ble redusert i CKD (Wang et al., 2019). Hos adenin-induserte CKD-rotter ble forekomsten og mangfoldet av tarmmikrobiota betydelig endret, selskaper reduserte nivået av propansyre, smørsyre og valerinsyre (Lakshmanan, Al, Ali, & Terranegra, 2021). Basert på vår tidligere studie, viste 16S rDNA-sekvensering at tarmmikrobiota dysbiose ble vist i 5/6 nefrektomiserte-induserte CKD-rotter sammenlignet med sham-gruppen. Noen av SCFA-er som produserer slekter, spesielt smørsyre fra Clostridium, Coprococcus utførte forskjeller i CKD-rotter (Zheng et al., 2020). I tråd med dette viste resultatene våre at mengder av eddiksyre, propionsyre, smørsyre, valeriansyre ble redusert med omtrent 60 prosent, 80 prosent, 85 prosent og 60 prosent hos CKD-rotter, noe som indikerer at reduksjonen av SCFA tilsvarte med ubalanse i tarmmiljøet. Merk at CKD-indusert tarmmiljøforstyrrelse utløste unormal metabolisme av tarmmikrobiota (Feng et al., 2019). I tillegg fant vi at hos rotter med CKD-anemi ble åtte typer SCFA-nivåer redusert. For eksempel kan unormaliteten til metabolske sluttprodukter, dvs. SCFAer, skyldes progresjon av CKD.

Polysakkarider, en av de aktive ingrediensene, er funnet i forskjellige urter, som Dioscoreae Rhizoma, Schisandra Chinensis, Astragali Radix og Jujubae Fructus. Polysakkarider kan fermenteres og brytes ned av tarmmikrobiota. Som et resultat blir polysakkarider presentert som et substrat for tarmmikrobiota for å metabolisere til SCFA-er eller anses å ha en prebiotisk-lignende effekt for å forbedre sammensetningen av tarmmikrobiota for å lette produksjonen av SCFA-er (Cai et al., 2019). I denne studien avslørte funnene våre at polysakkarider fra jujube stimulerte tarmmikrobiotafrigjøringen av SCFAer, slik som eddiksyre, propansyre, isosmørsyre, 2-metylsmørsyre hos CKD-rotter. Videre, etter JP-behandling, ble SCFA-nivået i CKD-anemi rottenyrer forbedret, og endringstendensen var i samsvar med fekalprøven. Basert på eksisterende forskning hadde forholdet mellom SCFAer og CKD blitt gradvis klart. For eksempel ble eddiksyre rapportert å modulere immunsystemet og lindre akuttnyreskadeved å hemme NADPH-oksidasesignalering i T-celler (Al-Harbi et al., 2018). Propansyre har vist seg å forhindre progresjon av adenin-indusert CKD via fri fettsyrereseptor 2 (FFA2) og FFA3 (Mikami et al., 2020). Derfor konkluderte vi med at det gjenvinnende nyre-SCFA-nivået var fordelaktig for en syk nyre. Det har blitt rapportert at JP økte tarmmikrobiotadiversiteten og øker SCFAs aktive mikrobiota (Bacteroides) relative overflod i kolorektal kreftmus (Ji et al., 2020). Dessuten økte JP konsentrasjonen av totale SCFA-er i fekale prøver (Ji et al., 2019). Derfor konkluderte vi med at JP kunne stimulere SCFA-produksjon for å oppnå formålet med å forsinke CKD-progresjon. JP kan også være et metabolismesubstrat for SCFAs dominerende mikrobiota for å stimulere SCFA-produksjonen i CKD, eller en prebiotisk-lignende komponent for å gjenopprette tarmmiljøet, spesielt mangfoldet av SCFAs dominerende mikrobiota, og fremme frigjøringen av SCFAs ytterligere, for å forhindre CKD-progresjon.

Generelt er det vanskelig å analysere SCFA-er (karbonfri enn 6) med liten molekylvekt og høy kjemisk polaritet direkte ved kromatografimetoder. En isotopmerket kjemisk derivatisering av SCFAs strategi kan forbedre instrumentsensitiviteten og redusere analysefeil, noe som ga en nyttig strategi for SCFA-bestemmelse i LC-MS/MS-analyse (Higashi & Ogawa, 2016). Nylig har dansylhydrazin-merkede tilnærminger blitt tilfredsstillende brukt for å detektere humane plasmametabolitter som inneholder karboksylsyre (Chen & Zhang, 2020). Til støtte for dette, i denne studien, videreutviklet vi kjemisk derivatisering basert på LC-MS/MS-tilnærmingen for bestemmelse av 8 SCFAer i rotteavføring. SCFA er produsert av tarmmikrobiota, og nesten 10 prosent SCFA skilles ut gjennom avføring (Boets et al., 2015). Derfor kan en avføringsprøveanalyse av SCFA-er reflektere endringene i tarmmiljøet direkte og har mer referanse i multi-omics-fellesanalysen mellom SCFA-er og tarmmikrobiota. Spesielt ustabilitetsvalidering fant vi at de dansylhydrazin-merkede SCFA-ene var ustabile ved romtemperatur, og deres intensitet på massespekteret viste en nedadgående tendens over tid, men den kunne forbli stabil i 48 timer ved 4 ◦C. Derfor, etter SCFA-derivatisering, bør analyttene holdes ved 4 ◦C før analyse.

I avanserte CKD-stadier 4–5 begrenser mangel på EPO-produksjon erytropoesen, noe som bidrar til den mest kritiske faktoren i utviklingen av nyreanemi (Sakashita, Tanaka, & Nangaku, 2019). Rutinebehandling med erytropoese-stimulerende midler (ESA) for anemi er foreslått av kliniske retningslinjer. Imidlertid må sikkerheten til ESA-er som er assosiert med økt risiko for død og kardiovaskulære hendelser være bekymret (Thavarajah & Choi, 2019). Hos nyreanemipasienter skulle EPO-uttrykket være konsistent eller forhøyet svakt sammenlignet med de friske kroppene (Babitt & Lin, 2012). På et tidlig stadium presenterte EPO-nivået oppgraderingstrenden, mens på det sene stadiet viste EPO-nivået en nedadgående trend sammenlignet med tidlig stadium, enda lavere enn normalt (Panjeta, Tahirovi´c, Sofi's, ' Cori's, & Derviˇsevi 'c, 2017). Tilsvarende tidligere eksperimenter (Chen et al., 2019; Wang et al., 2020), indikerte resultatene våre at serum-EPO-nivået ble redusert hos CKD-anemi rotter. Vi oppdaget henholdsvis nyre-EPO-mRNA og proteinnivå i CKD-rotter, og nyre-EPO-proteinnivået ble redusert noe sammenlignet med sham-gruppen mens nyre-EPO-mRNA-mengden ble degradert og graden var større enn serum-EPO-nivået. Nyren er den primære kilden til EPO-syntese hos voksne og ERSD-pasienter.nyrerbeholder fortsatt evnen til å produsere erytropoietin (Bernhardt et al., 2010). For å korrigere endogene serum-EPO-nivåer og tilpasse seg nyreanemi, ble nyre-EPO-produksjonen aktivert, selv omnyreskaderedusert EPO mRNA-ekspresjon (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). Etter JP-behandling ble serum-EPO-nivået økt, samt nyre-EPO-mRNA og proteinnivåer ble begge oppgradert. I vår forrige studie kunne JP stimulere HRE-transkripsjonsaktiviteten og forbedret EPO-genet (Chen et al., 2014). Derfor spekulerte vi i at JP kunne gjenopprette CKD-rotteserum-EPO-nivå til regulert nyreanemi, som kan være bidratt av stimulert nyre-EPO-genuttrykk på mRNA-nivå.

I cortex ble HIF-1 hovedsakelig funnet i tubulær, og HIF-2 i nyreinterstitium. Fordi EPO hovedsakelig produseres av fibroblaster der HIF-2 er samlokalisert, støtter dette at HIF-2 kan være ansvarlig for å regulere EPO-produksjonen (Maxwell, 2003). I vår studie fant vi at HIF-1 og HIF-2 kunne aktiveres av CKD, og ​​JP-behandling kunne stimulere HIF-1- og HIF-2-aktiviteten sammenlignet med CKD-rotter . Det var bevist at HIF-2 har en viktig rolle i reguleringen av EPO-produksjon (Kapitsinou et al., 2010), mens HIF-1-oppregulering kan spille en nyrebeskyttende effekt i nyrene (Jiang et al. al., 2020), som indirekte forbedrer EPO-produksjonen. Nyre-EPO-produksjonen ble først regulert på mRNA-nivå, under anemi eller hypoksi kunne EPO mRNA-ekspresjon økes ved HIF-proteinstimulering. Tidligere har farmakologisk forskning vist at jujube stimulerte EPO-ekspresjonen via regulering av HIF-proteinnivået i den cellulære modellen (Chen et al., 2014, Lam et al., 2016). Derfor konkluderte vi med at JP kan oppregulere EPO mRNA-ekspresjonen via HIF-protein for å oppnå formålet med å lindre nyreanemi.

Videre, basert på nåværende resultater, spekulerer vi i at reduksjon i SCFA kan ha avgjørende roller i HIF-mediert EPO-uttrykk, noe som bidrar til CKD-anemi. I motsetning til dette har det blitt illustrert at det økte eddiksyrenivået var gunstig for HIF-2-acetylering og CREB-bindende protein-HIF 2-kompleksgenerering, og induserte EPO-ekspresjon ytterligere (Xu et al., 2014). Propionsyre-dempet mitokondriell forstyrrelse, hippocampus apoptose og nevrologiske mangler via HIF-1/ERK-vei (Cheng et al., 2019). I tillegg ble smørsyre funnet å stabilisere HIF-1, aktive HIF-målgener på tykktarmsceller og dempe den inflammatoriske responsen i tykktarmen (Kelly et al., 2015). I vår studie fant vi at nivåene av eddiksyre, propansyre og smørsyre ble betydelig redusert ledsaget av HIF-protein unormalt uttrykk CKD-rotter, noe som indikerte at stabiliteten til HIF- kan være relatert til SCFA-reduksjon, og SCFA-er kan ha effekten av å stabilisere HIF for å regulere EPO-uttrykket.

5. Konklusjoner

Som konklusjon beviste vi at JP forbedret CKD og dens tilhørende anemi, hvis mekanisme var involvert i reguleringen av SCFA-frigjøring og EPO-produksjon. Og JP kan være den bioaktive ingrediensen i jujube for behandling av anemi. Disse funnene kan gi bevis for videre utvikling av JP som kosttilskudd for behandling av CKD-assosiert anemi.

Etisk utsagn

Alle dyreforsøk i vår forskning ble utført med protokoller godkjent av den etiske komiteen ved Guangzhou University of Chinese Medicine og i samsvar med National Institutes of Health Guideline for pleie og bruk av laboratoriedyr (NIH-publikasjoner nr. 80-23, revidert 1996). Det er ingen brudd på retningslinjene ovenfor i vår forskning.

Anerkjennelser

Dette arbeidet er støttet av Natural Science Foundation i Guangdong-provinsen (2018A030313305), Natural Science Foundation of China (81804052, 81973577, og 82004248), Shenzhen Science and Technology Plan Project (JSGG2019112910221663016 Z60662816 Z606630160221663016022166301) 20201320).

Referanser

Al-Harbi, NO, Nadeem, A., Ahmad, SF, Alotaibi, MR, AlAsmari, AF, Alanazi, WA, … Ibrahim, KE (2018). Kortkjedet fettsyre, acetat lindrer sepsis-indusert akuttnyreskadeved inhibering av NADPH-oksidasesignalering i T-celler. International Immunopharmacology, 58, 24–31.
Babitt, JL og Lin, HY (2012). Mekanismer for anemi ved CKD. Journal of the American Society of Nephrology, 23(10), 1631–1634.
Bernhardt, WM, Wiesener, MS, Scigalla, P., Chou, J., Schmieder, RE, Günzler, V., …Eckardt, KU (2010). Hemming av prolylhydroksylaser øker erytropoietinproduksjonen ved ESRD. Journal of the American Society of Nephrology, 21(12),
2151–2156.
Boets, E., Deroover, L., Houben, E., Vermeulen, K., Gomand, SV, Delcour, JA, … Verbeke, K. (2015). Kvantifisering av in vivo colon kortkjedet fettsyreproduksjon fra inulin. Næringsstoffer, 7(11), 8916–8929.

Cai, Y., Liu, W., Lin, Y., Zhang, S., Zou, B., Xiao, D., … Xie, Z. (2019). Sammensatte polysakkarider lindre eksperimentell kolitt ved å modulere sammensetning og funksjon av tarmmikrobiota. Journal of Gastroenterology and Hepatology, 34(9),1554–1562.

Chen, G. og Zhang, Q. (2020). Samtidig kvantifisering av frie fettsyrer og acylkarnitiner i plasmaprøver ved bruk av dansylhydrazinmerking og væskekromatografi – trippel kvadrupol massespektrometri. Analytisk og bioanalytiskChemistry, 412(12), 2841–2849.

Chen, J., Lam, CT, Kong, AY, Zhang, WL, Zhan, JY, Bi, CW, … Tsim, KW (2014). Ekstraktet av Ziziphus jujuba-frukt (jujube) induserer ekspresjon av erytropoietin via hypoksi-induserbar faktor -1 i dyrkede Hep3B-celler. PlantaMedica, 80(17), 1622–1627.

Chen, J., Wang, F., Huang, S., Liu, X., Li, Z., Qi, A., … Li, S. (2019). Jian-Pi-Yi-Shen avkok lindrer nyreanemi hos 5/6 nefrektomiserte rotter: Produksjon av erytropoietin via hypoksi-induserbar faktorsignalering. Evidensbasert komplementær og alternativ medisin, 2019, 1–8.
Cheng, Y., Mai, Q., Zeng, X., Wang, H., Xiao, Y., Tang, L., … Ding, H. (2019). Propionat lindrer pentylenetetrazol-induserte anfall, påfølgende mitokondriell forstyrrelse, nevronnekrose og nevrologiske mangler hos mus. Biokjemisk farmakologi, 169, artikkel 113607.
Feng, YL, Cao, G., Chen, DQ, Vaziri, ND, Chen, L., Zhang, J., … Zhao, YY (2019). Mikrobiom-metabolomikk avslører tarmmikrobiota assosiert med glycinkonjugerte metabolitter og polyaminmetabolisme ved kronisk nyresykdom. Cellular and Molecular Life Sciences, 76(24), 4961–4978.
Garrido, P., Ribeiro, S., Fernandes, J., Vala, H., Bronze-da-Rocha, E., Rocha-Pereira, P., … Reis, F. (2015). Jern-Hepcidin dysmetabolisme, anemi og nyrehypoksi, betennelse og fibrose i restnyre-rottemodellen. PLoS ONE, 10(4), artikkel e124048.
Higashi, T., & Ogawa, S. (2016). Isotopkodede ESI-forbedrende derivatiseringsreagenser for differensialanalyse, kvantifisering og profilering av metabolitter i biologiske prøver ved LC/MS: En gjennomgang. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 130, 181–193.
Ji, X., Hou, C., Gao, Y., Xue, Y., Yan, Y., & Guo, X. (2020). Metagenomisk analyse av tarmmikrobiotamodulerende effekter av jujube (Ziziphus jujuba Mill.) polysakkarider i en musemodell for kolorektal kreft. Food & Function, 11(1), 163–173.
Ji, X., Hou, C., Yan, Y., Shi, M., & Liu, Y. (2020). Sammenligning av strukturell karakterisering og antioksidantaktivitet til polysakkarider fra jujube (Ziziphus jujuba Mill.) frukt. International Journal of Biological Macromolecules, 149, 1008–1018.

Ji, X., Hou, C., Zhang, X., Han, L., Yin, S., Peng, Q., … Wang, M. (2019). Mikrobiommetabolomisk analyse av virkningen av Zizyphus jujuba cv. Muzao polysakkarider forbruk på kolorektal kreft mus fekal mikrobiota og metabolitter.International Journal of Biological Macromolecules, 131, 1067–1076.

Ji, X., Peng, Q., Yuan, Y., Shen, J., Xie, X., & Wang, M. (2017). Isolering, strukturer og bioaktiviteter av polysakkaridene fra jujubefrukt (Ziziphus jujuba Mill.): En gjennomgang. Food Chemistry, 227, 349–357.
Jiang, N., Zhao, H., Han, Y., Li, L., Xiong, S., Zeng, L., … Sun, L. (2020). HIF-1 forbedrer tubulær skade ved diabetisk nefropati via HO-1-mediert kontroll av mitokondriell dynamikk. Cell Proliferation, 53(11), artikkel e12909.
Kapitsinou, PP, Liu, Q., Unger, TL, Rha, J., Davidoff, O., Keith, B., … Haase, VH (2010). Hepatisk HIF-2 regulerer erytropoietiske responser på hypoksi ved nyreanemi. Blood, 116(16), 3039–3048.
Kelly, CJ, Zheng, L., Campbell, EL, Saeedi, B., Scholz, CC, Bayless, AJ, … Colgan, SP (2015). Krysstale mellom mikrobiota-avledede kortkjedede fettsyrer og intestinal epitelial HIF forsterker vevsbarrierefunksjonen. Cell Host & Microbe, 17 (5), 662–671.
Koh, A., De Vadder, F., Kovatcheva-Datchary, P., & B¨ ackhed, F. (2016). Fra kostfiber til vertsfysiologi: Kortkjedede fettsyrer som sentrale bakterielle metabolitter. Cell, 165(6), 1332–1345.
Lakshmanan, AP, Al, ZM, Ali, BH, & Terranegra, A. (2021). Påvirkningen av den prebiotiske akasiegummien på tarmmikrobiomets sammensetning hos rotter med eksperimentell kronisk nyresykdom. Biomedisin og farmakoterapi, 133, artikkel
110992.
Lam, C., Chan, PH, Lee, P., Lau, KM, Kong, A., Gong, A., … Tsim, K. (2016). Kjemisk og biologisk vurdering av Jujube (Ziziphus jujuba)-holdige urteavkok: Induksjon av erytropoietin-uttrykk i kulturer. Journal of Chromatography BAnalytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences, 1026, 254–262.
Lappin, TR og Lee, FS (2019). Oppdatering om mutasjoner i HIF: EPO-vei og deres rolle i erytrocytose. Blood Reviews, 37, artikkel 100590.
LeBlanc, JG, Chain, F., Martín, R., Bermúdez-Humaran, ´ LG, Courau, S., & Langella, P. (2017). Gunstige effekter på vertens energimetabolisme av kortkjedede fettsyrer og vitaminer produsert av kommensale og probiotiske bakterier. Microbial Cell Factory, 16 (1), 79.
Li, L., Ma, L., & Fu, P. (2017). Tarmmikrobiota-avledede kortkjedede fettsyrer og nyresykdommer. Drug Design Development and Therapy, 11, 3531–3542.
Li, L. og Shi, JY (2013). Analyse av polysakkarid- og lipidkomponenter i kanelbarken ved GC-MS. Zhong Yao Cai, 36(4), 578–580.
Liu, G., Liu, X., Zhang, Y., Zhang, F., Wei, T., Yang, M., … Zhao, Z. (2015). Leverbeskyttende effekter av polysakkarider ekstrahert fra Zizyphus jujube cv. Huanghetanzao. International Journal of Biological Macromolecules, 76, 169–175.

Locatelli, F., Fishbane, S., Block, GA og Macdougall, IC (2017). Målretting av hypoksiInduserbare faktorer for behandling av anemi hos pasienter med kronisk nyresykdom. American Journal of Nephrology, 45(3), 187–199.

Locatelli, F., Hannedouche, T., Fishbane, S., Morgan, Z., Oguey, D., & White, WB (2019). Kardiovaskulær sikkerhet og all-Cause dødelighet av metoksypolyetylen

Glykol-Epoetin beta og andre erytropoese-stimulerende midler ved anemi av CKD: En randomisert noninferiority-studie. Klinisk tidsskrift for American Society of Nephrology: CJASN, 14(12), 1701–1710.
Maxwell, P. (2003). HIF-1: Et oksygenresponssystem med spesiell relevans for nyrene. Journal of the American Society of Nephrology, 14(11), 2712–2722.
Meijers, BK, & Evenepoel, P. (2011). Tarm-nyre-aksen: Indoksylsulfat, p-kresylsulfat og CKD-progresjon. Nephrology Dialysis Transplantation, 26(3), 759–761.
Mikami, D., Kobayashi, M., Uwada, J., Yazawa, T., Kamiyama, K., Nishimori, K., … Iwano, M. (2020). Kortkjedede fettsyrer reduserer adenin-indusert kronisk nyresykdom via FFA2- og FFA3-veier. Biochimica Biophysica Acta-Molecular and Cell Biology Lipids, 1865(6), artikkel 158666.
Morton, DB, & Griffiths, PH (1985). Retningslinjer om anerkjennelse av smerte, plager og ubehag hos forsøksdyr og en hypotese for vurdering. Veterinærjournal, 116(16), 431–436.
Panjeta, M., Tahirovi´c, I., Sofi´c, E., Cori´´c, J., & Derviˇsevi´c, A. (2017). Tolkning av erytropoietin- og hemoglobinnivåer hos pasienter med ulike stadier av kronisk nyresykdom. Journal of Medical Biochemistry, 36(2), 145–152.
Pappa, M., Dounousi, E., Duni, A., & Katopodis, K. (2015). Mindre kjente patofysiologiske mekanismer for anemi hos pasienter med diabetisk nefropati. International Urology and Nephrology, 47(8), 1365–1372.
Sakashita, M., Tanaka, T., & Nangaku, M. (2019). Hypoksi-induserbar faktor-prolyl hydroksylase-domene-hemmere for å behandle anemi ved kronisk nyresykdom. Bidrag til nefrologi, 198, 112–123. https://doi.org/10.1159/000496531.
Schodel, ¨ J., & Ratcliffe, PJ (2019). Mekanismer for hypoksi-signalering: Nye implikasjoner for nefrologi. Nature Reviews Nephrology, 15(10), 641–659.
Tako, E., Glahn, RP, Knez, M., & Stangoulis, JC (2014). Effekten av hveteprebiotika på tarmbakteriepopulasjonen og jernstatus hos jernmangelkyllinger. Nutrition Journal, 13, 58.
Tang, WH, Wang, Z., Kennedy, DJ, Wu, Y., Buffa, JA, Agatisa-Boyle, B., … Hazen, SL (2015). Tarmmikrobiotaavhengig trimetylamin-N-oksid (TMAO)-vei bidrar til både utvikling av nyresvikt og dødelighetsrisiko ved kronisk nyresykdom. Sirkulasjonsforskning, 116(3), 448–455.
Thavarajah, S., & Choi, MJ (2019). Bruk av erytropoiesestimulerende midler hos pasienter med CKD og kreft: En klinisk tilnærming. American Journal of Kidney Diseases, 74(5), 667–674.
Wang, F., Yu, H., Huang, S., Zheng, L., Zheng, P., Zhang, S., … Chen, J. (2020). Jian-PiYi-Shen regulerer EPO- og jernresirkuleringsproteinuttrykk hos anemiske rotter med kronisk nyresykdom: Akkumulering av hypoksi-induserbar faktor-2 via ERK-signalering. Evidensbasert komplementær og alternativ medisin, 2020, 8894257.
Wang, S., Lv, D., Jiang, S., Jiang, J., Liang, M., Hou, F., … Chen, Y. (2019). Kvantitativ reduksjon i kortkjedede fettsyrer, spesielt butyrat, bidrar til utviklingen av kronisk nyresykdom. Clinical Science, 133(17), 1857–1870.
Webster, AC, Nagler, EV, Morton, RL, & Masson, P. (2017). Kronisk nyre sykdom. Lancet (London, England), 389(10075), 1238–1252.
Xie, X., Yang, X., Wu, J., Ma, J., Wei, W., Fei, X., … Wang, M. (2020). Trib1 bidrar til utvinning fra iskemi/reperfusjon-indusert akutt nyreskade ved å regulere polariseringen av nyremakrofager. Frontiers in Immunology, 11, 473.
Xu, M., Nagati, JS, Xie, J., Li, J., Walters, H., Moon, YA, … Garcia, JA (2014). En acetatbryter regulerer stress erytropoese. Naturmedisin, 20(9), 1018–1026.
Yue, Y., Wu, S., Li, Z., Li, J., Li, X., Xiang, J., … Ding, H. (2015). Ville jujube-polysakkarider beskytter mot eksperimentell inflammatorisk tarmsykdom ved å muliggjøre forbedret tarmbarrierefunksjon. Food & Function, 6(8), 2568–2577.

Zhao, S. og Li, L. (2018). Dansylhydrazine isotopmerking LC-MS for omfattende karboksylsyresubmetabolomprofilering. Analytical Chemistry, 90(22), 13514–13522.

Zheng, L., Chen, S., Wang, F., Huang, S., Liu, X., Yang, X., … Chen, J. (2020). Distinkte responser fra tarmmikrobiota på Jian-Pi-Yi-Shen-avkok er assosiert med forbedrede kliniske resultater hos 5/6 nefrektomiserte rotter. Frontiers in Pharmacology, 11, 604.