Mekanistisk innsikt i diosmin-indusert nevrobeskyttelse og hukommelsesforbedring i intracerebroventrikulær-kinolinsyre-rottemodell: gjenopplivning av mitokondrielle funksjoner og antioksidanter del 2

2.8. Novel Object Recognition Task (NORT).

Standard protokoll ble fulgt som gitt av Kumar og Bansal [23]. NORT er en ulønnsom og ikke-fiendtlig eksteroseptiv arketype som brukes for å vurdere den fungerende typen erindringsminne utnyttet gjennom den impulsive sonderingen til gnagere. .e undersøkelsen utføres i et tak-åpen kryssfiner kubisk kar (80 cm × 42 cm × 62 cm), plassert i et stille område, opplyst av en 60W LED for å administrere konsistent lysstyrke i fartøyet.

Gnagere er en type små pattedyr som lever på jorden. De lever ofte i gressletter, skogområder og andre steder. De lever et mildt liv og er korte og søte. Sammenlignet med andre organismer har gnagere en sterk fordel i hukommelsen, og mange studier har vist at gnageres hukommelse er langt utenfor vår fantasi.

Hjernen til gnagere er veldig fleksible, spesielt når de håndterer oppgaver knyttet til lagring av informasjon. Mange eksperimenter har vist at gnageres hukommelse til og med kan overgå hukommelsen til andre store pattedyr. I eksperimentet ga noen forskere gnagere som mus og hamstere med mange forskjellige steder, gjenstander, hendelser og annen informasjon, og observerte deretter reaksjonene deres og behandlingen av denne informasjonen. Det ble funnet at disse gnagerne presterte veldig bra i hukommelsen, og kunne til og med huske mange forskjellige opplysninger og scener, enda bedre enn de fleste mennesker.

Så hvorfor er gnagere bedre på hukommelsen enn andre dyr? Dette er uatskillelig fra levemiljøet til gnagere. Disse små dyrene lever ofte i farlige omgivelser, så de må lære å tilpasse seg raskt og overleve. For å opprettholde deres overlevelse og reproduksjon, må gnagere forstå endringer i det omkringliggende miljøet og informasjon som for eksempel aktivitetsbanene til andre dyr og planter. Dette krever at de har gode observasjons- og hukommelsesevner slik at de bedre kan tilpasse seg bomiljøet.

I tillegg kan gnageres livsstil og atferdsvaner også bidra til å forbedre hukommelsen deres. Noen studier har vist at gnagere liker å samle og lagre gjenstander, noe som kan fremme deres hukommelse og romlige oppfatning. I tillegg liker gnagere også å utføre noen rutinemessige aktiviteter, som å bevege seg langs en bestemt rute og utføre samme type oppgaver. Denne rutinemessige oppførselen kan også hjelpe dem med å styrke hukommelsen og vanedannende evner.

I den biologiske verden har gnagere et unikt minne, og de har sterke observasjons-, hukommelses- og tilpasningsevner. For oss kan minnet om gnagere samsvare med våre lærings- og hukommelsesevner. Vi kan lære av gnagere at så lenge vi er forsiktige, fortsetter å lære og samler oss i våre studier og liv, kan vi også ha de samme utmerkede hukommelses- og vanedannelsesevnene som gnagere. Dette viser at vi må forbedre hukommelsen vår, og Cistanche kan forbedre hukommelsen betydelig, fordi Cistanche også kan regulere balansen mellom nevrotransmittere, som å øke nivåene av acetylkolin og vekstfaktorer, som er svært viktige for hukommelse og læring. I tillegg kan Cistanche deserticola forbedre blodstrømmen og fremme oksygentilførsel, noe som kan sikre at hjernen får tilstrekkelig næring og energi, og dermed forbedre hjernens vitalitet og utholdenhet.

Klikk på Kjenn minneforbedring

Sylinder (hvit), pyramide (rød) og kube (svart)-formede (12 cm høye) tregjenstander (i identiske trillinger) var solide og med nok vekt til å gjøre dem immobile av gnagere. NORT ble utført på den 16. dagen i 3 stadier (S): akklimatisering (S1), ervervelse (S2) og ny objektgjenkjenningsundersøkelse (retensjon) stadium (S3). Under S1, tre påfølgende dager før forsøkene ble utstedt for å oppdage den ledige gulvbunnen av fartøyet (5 minutter) av rottene. Etter fullføringen av S1 ble det enkelte dyret vant til ethvert sett med faste elementer i læringsstadiet (S2).

Tvillinglignende ting ble plassert i 2 vilkårlig valgte motstridende vinkler på fartøyet (9 cm til 11 cm mellomrom fra sidevollene). Hver for seg ble en gnager plassert i midten av karet vendt mot de to solide gjenstandene og fikk lov til å oppdage de to lignende gjenstandene i 5 minutter. Føring av snuten nær gjenstanden på mindre enn eller lik 2–3 cm avstand eller fysisk kontakt med gjenstanden med snuten var ment som etterforskningsopptreden.

Etter S2 ble gnageren plassert i et hjemmebur med en intertrial recess (ITR) på 60 minutter.

Enhver enkelt solid gjenstand som ble tilbudt i S2 ble byttet ut med en annen solid gjenstand, og gnagerne ble presentert igjen for tvillinggjenstandene, dvs. en kopi av den kjente gjenstanden og den forskjellige gjenstanden. Hele sammenslåingene og posisjonene til gjenstandene ble forskjøvet til redusere sannsynlige fordommer forårsaket av en forkjærlighet for visse innstillinger eller gjenstander. .e kar og faste gjenstander ble omhyggelig tørket (etylalkohol 15 % og tørr klut) etter hver undersøkelse for å dempe de luktende tegnene. .e tidsbruk for å oppdage hvert element i S2 og S3 ble dokumentert ved hjelp av en stoppeklokke. .e varigheten brukt på å undersøke de to samsvarende elementene i S2 (I1 � Ii1 + Ii2) og varigheten brukt på å undersøke de to forskjellige elementene, dvs. kjente og forskjellige, i S3 (I2 � Ii3 + Ib) ble tatt opp. .e variasjon i varighet brukt på å undersøke det forskjellige elementet og varigheten av å undersøke det kjente elementet (Ib–Ii3 � DI) avslører oppbevaringen av det kollektive minnet.

DI (diskrimineringsindeks)/S3-varighet(er) for å undersøke både det kjente og det nye elementet (endret DI) forbedrer partialitetene ved avvik i den fullstendige undersøkelsen og angir forkjærligheten for forskjellige gjenstander i motsetning til kjente {DI � (Ib–Ii3 )/(Ii3 + Ib)}. Rekollektiv hukommelse ble vurdert ved å kvantifisere ferdighetene til gnagere for å skille ut de kjente/novelittene i S3 og ble oppgitt som DI (endret for den samlede undersøkelsesperioden i S3) [24].

2.9. MorrisWater Maze (MWM). Standardprotokollen ble fulgt, gitt av Kumar og Bansal [25]. MWM bedømmer det romlige minnet ved å svømmeprøver, der gnageren finner en fluktvei til et skjult podium.

En svartfarget sirkulær tank (2 m diameter, 0.6 m høyde) hadde vann (25 ± 1 grad ) fylt til en dybde på 0,3 m. Dette akvatiske reservoaret ble separert med klokken i 4 lignende områder (R1, R2, R3 og R4) ved bruk av to nylonfibre, festet vinkelrett på den øvre omkretsen av tanken.

En dais (10,5 cm × 10,5 cm) ble plassert under vann (1 cm under vann) i reservoarområdet R4. .e punktet av hallen vedvarte intakt gjennom hele oppkjøpsperioden. Hver eneste rotte ble presentert med fire serieanskaffelsesrunder (5 minutter ITR) hver dag. .e gnager ble forsiktig sluppet ut i det akvatiske reservoaret som vendte mot tankveggen, med stedet som varierte med hvert enkelt forsøk fra R1-R4, R2-R1, R3-R2 og R{{ 13}}R3 på henholdsvis dag 1 til 4, og det var tillatt 120 sekunder å oppdage undervannspodiet. .e gnagere fortsatte å hvile på podiet i 20 sekunder.

En feil med å oppdage plattformen innen 120 sekunder indikerte manuell plassering av rotte på plattformen, og deretter fikk de 20 sekunder på plattformen. Escape latency time (ELT) er varigheten(e) for å oppdage den skjulte daisen i det akvatiske reservoaret. Romlig læring ble preget av dag én vs. dag fire ELT.

I sondeforsøket (5. dag) undersøkte gnagerne reservoaret i 120 sekunder, men ble fratatt pallen. .e gjennomsnittlig varighet brukt i hele reservoaret (4 regioner) ble registrert. .e gjennomsnittlig varighet brukt i R4 (TSTQ:tid brukt i målkvadrant) sondering for det skjulte podiet ble ansett som en indeks for referanseminne. .komparativ innstilling av tanken i forhold til gjenstandene i laboratoriet som fungerer som visuelle tegn og etterforskerens posisjon forble uforstyrret [26].

2.10. Estimering av biokjemiske parametere. Etter å ha fullført atferdsundersøkelsene, ble hele hjernen til teratene samlet og plassert på pulveriserte isbiter, etterfulgt av bading med frysende sterilisert saltvann (isotonisk 308 mOsmol/l NaCl) for å fjerne restene og blodet.

Homogenisering av hele hjernen ble umiddelbart utført i en fryseseparasjonsbuffer (pH 7,4) med sammensetningen 215 mM D-mannitol, 20 mM 2-[4-(2-hydroksyetyl )piperazin-1-yl]etansulfonsyre, 1 mM 1,2-bis[2-[bis(karboksymetyl)amino]etoksy]etan, 75 mM sakkarose og 0,1 % BSA. Homogenatet ble sentrifugert ved 4 grader ved bruk av 13000 x g kraft i 5 minutter. .e pellet ble avvist, og supernatanten ble separert i to porsjoner og ble sentrifugert på nytt (4 grader) ved 13000 x g kraft i 5 minutter. Den rå mitokondriepellet ble separert og sentrifugert igjen i en separasjonsbuffer med 1,2-bis[2-[bis(karboksymetyl)amino]etoksy]etan ved 12 500 × g i 11 minutter (4 grader). .e halvfaste avsetningen som ble oppnådd på denne måten omfattende ukontaminerte mitokondrier ble resuspendert i en separasjonsbuffer (pH 7,4) inneholdende 75 mM sakkarose, 20 mM 2-[4-(2-hydroksyetyl)piperazin-1- yl]etansulfonsyre og 215 mM D-mannitol [27].

Senere ble mitokondriefraksjonen av helhjernehomogenatet brukt til å bestemme de biokjemiske markørene ved bruk av standardmetoder.

2.11. Estimering av mitokondrielt kompleks

2.11.1. NADH: Ubiquinone Oxidoreductase Activity.

Erate av kompleks I (NADH dehydrogenase) aktivitet ble kvantifisert (nmol NADH oksidert/minutt/mg protein) ved å følge teknikken til King og Howard [28]. .eoksidativ generering av NAD+ fra NADH er ledsaget av cytokrom c-reduksjon. .e analyseblanding besto av cytokrom c (10,5 mM), 6 mM -nikotinamidadeninedinukleotid (DPNH) oppløst ved bruk av 2 mM diglysinbuffer og diglysinbuffer (0,2 M, pH 8,5).

En oppløselig mitokondriell fraksjon ble inkorporert i analysesammensetningen for å utløse reaksjonen. .e variasjon i optisk tetthet (OD) ved λmax � 550 nm ble fulgt i 120 sekunder.2.11.2. Succinat: Ubiquinone Oxidoreductase Activity..e hastigheten av succinat dehydrogenase (kompleks II) aktivitet ble kvantifisert (nmol succinat oksidert/minutt/mg protein) ved å følge teknikken til King [29].

Ravsyreoksidasjon utløses av en falsk elektronmottaker, kaliumcyanoferrat (K3Fe(CN)6). .e analyseblandingen består av ravsyre (0,63 M), 1 % BSA, K3Fe(CN)6 (0.036 M), og Na+-K+ [PO4]2- buffer (0,23 M, pH 7,6). En oppløselig mitokondriell fraksjon ble inkorporert i analysesammensetningen for å utløse reaksjonen. .e variasjon i OD atλmax � 420 nm ble fulgt i 120 sekunder.

2.12. Bestemmelse av biomarkører for oksidativt stress2.12.1. iobarbitursyrereaktive stoffer (TBARS). For å evaluere TBARS (nmol per mg protein) [30], analysekombinasjonen (avsluttende mengde ~4 ml) som omfatter 0.10 ml homogenisert hjerne, 1,51 ml 4,6-dihydroksy-2-merkaptopyrimidin (0,8 %), 200 µl SLS (8,18 %), 1,49 ml iseddiksyre (21 %, pH 3,51) og 0,71 ml avionisert vann ble utsatt for vann-bad oppvarming på 96 grader i 60 minutter.

En 15:1 butylalkohol/azabenzen (5,1 ml) ble supplert i analyseblanding som ble sentrifugert ved 4,000 x gpower (10 minutter), og supernatanten ble isolert. Med et tvillingstråle UV1700 spektrofotometer (Shimadzu, Japan), kromofor malondialdehyd-4,6-dihydroksy-2-merkaptopyrimidin OD ble målt ved en bølgelengde (λmaks � 532 nm) og ε.� 105/M/cm (molar ekstinksjonskoeffisient) ble brukt for å beregne 4,6-dihydroksy-2-merkaptopyrimidinaddukter.

2.12.2. Reduserte nivåer av glutation (Lc-Glutamyl-L-Cysteinyl-glycin). Ellmans [31] prosedyre ble implementert for å vurdere innholdet av L-glutation (GSH). .e testblanding som omfatter homogenat (1,1 ml) og 1 ml 4 % 2-hydroksy-5-sulfobenzosyre (5-SSA) ble sentrifugert (4 grader) i 11 minutter ved 2500 × g effekt .

Senere, 2,8 ml Na+-K+[PO4]2- buffer (51,2 mM, pH 7,77) og {{10}},21 ml 3-karboksy{{13 }}nitrofenyldisulfid (0,12 mM, pH 7,89) ble blandet med den ovenfor separerte supernatanten (0,12 ml). Tripeptid (µmolGSH per mg protein) ble kvantifisert med twin-beam UV1700 spektrofotometer (λmax � 412 nm). påføring � 1,36 × 104/M/cm.

2.12.3. Glutationperoksidaseaktivitet. .e aktiviteten til glutationperoksidase (GPx) (EC 1.11.1.9) ble vurdert ved å implementere teknikken til Mohandas et al. [32]. .analyseblandingen består av 100 µl 10% homogenat, 100 µl natriumazid (1,11 mM), 100 µl EDTA (1,13 mM), 40 µl glutation-disulfidreduktase (GSR, 1 IE/ml) (EC1.8.1.7), 10 ul H2O2 (0,28 mM), 40 ul Lc-glutamyl-L-cysteinyl-glycin (1,2 mM), 100 ul koenzym II redusert tetranatriumsalt (0,22 mM) ), og 0,12 M 1,49 ml Na+-K+ [PO4]2-buffer (pH 7,4) i en hel mengde på 2000 ul. .e tap av koenzym II-redusert tetranatrium ved λmax � 340 nm ble dokumentert ved en temperatur på 25 grader.

GPx-hastigheten ble beregnet som nmol NADPH oksidert/minutt/mg protein ved bruk av ε � på 6,22 × 103/M/cm.

2.12.4. Superoksiddismutaseaktivitet. .e hastighet av SOD (EC1.15.1.1) virkning (enheter per mg protein) ble vurdert ved prosedyren til Kakkar et al. [33]. .e reaksjonsblanding involverte 0,3 ml homogenat, 100 µl 5-metylfenaziniummetylsulfat (197 μM) og 1,3 ml natriumdifosfat ved bruk av 200 µl -nikotinamidadenindinukleotid (DPNH)(7)80 μM) stoppet 60 sekunder senere ved å bruke 1 ml glacialCH3COOH i denne blandingen.

Den genererte kromogenmengden ble beregnet ved å notere fargestyrken ved λmax� 56{{10}} nm.2.12.5. Catalase-aktivitet. For å vurdere hastigheten på katalase-virkningen (EC1.11.1.6), OD-avviket (λmax � 240 nm) av den analyserte blandingen (3,0 ml) bestående av 50 µl undersøkende prøve, 1,22 ml H2O2 (0,03 M) i Na+-K+ [PO4]2--buffer (pH7,91, 0,06 M), og 1,63 ml 0,06 M Na+-K+ [PO4]{{33} } buffer (pH 7,1) ble registrert. Katalaseaktivitet (µmol H2O2 svekkes per minutt per mg protein i hjernen) ble beregnet ved å bruke ε � 43,6/M/cm [34].

2.12.6. Nitrittnivå. .e-teknikken til Sastry et al. [35] ble implementert for å evaluere hele hjernenitritt (μmolper mg hjerneprotein). I reagensrør som omfatter 100 µl undersøkende prøve, ble 145 mg amalgam av kobber-kadmium, 500 µl H2CO3-buffer (pH 8,89), 0,44 M 100 µl NaOH og 119,8 mM 400 µl ZnSO4-effekt sentrifugert ved 400 µl ZnSO 4 µl. i 10 minutter, og den overflødige øvre væsken (supernatanten) ble isolert.

Griess kjemikalie (50 µl) var inkludert i 100 µl av s overflødig væske. Etter 60 minutters inkubering ble OD (λmax � 548 nm bølgelengde) notert ved bruk av et tvillingstråle UV1700 spektrofotometer (Shimadzu). En typisk kurve av salpetersyrlig natrium (0,02–0,2 mM) ble designet, og hele nitritt ble utliknet.

2.12.7. Bestemmelse av totalt proteiner. .e totalt proteinnivå (mg/ml homogenat) ble beregnet ved å bruke atypisk kurvaturgraf for bovint serumalbumin med oppløsningsstyrken fra 0,3 til 3,8 mg/ml. .e undersøkelseskombinasjonen ble organisert med 250 µl homogenat, 5,1 ml Lowrys reagens, Na+-K+ [PO4]2- buffer (900 µl) og 1,1 N 500 µl FCR. .e avvik i OD ble observert ved λmax � 650 nm [36].

2.13. Hjerneseksjoner Histopatologi. Ved å bruke et gravitasjonsmatet diffusjonsoppsett ble rotter intrakardialt (via venstre ventrikkel) diffusert med 10 % nøytral bufret formaldehyd (10 % NBF)-løsning og bedøvet akutt. Hippocampus og kortikale sektorer er nedsenket i et fiksativ (10:1 fiksativ: vevproporsjon), nemlig 10 % NBF i en uke (4 grader), ledsaget av 0,04 % natriumazid (pH 7,4).

Etylalkohol (70%) ble brukt som en pakkeløsning for faste vevsdeler holdt ved 4 grader. En mikrotomkutter (rotasjonstype) ble brukt for å erverve tynne porsjoner (8,0 μm), som ble farget med hematoksylin og eosin (H&E). .slides ble gjort permanente ved bruk av DPX-harpiks, som senere ble dekkglasset og inspisert gjennom et optisk mikroskop (kikkert) ved × 40 forstørrelser.

2.14. Statistisk analyse. En dyktig eksperimentator blindet ulike medikamentregimer gitt til dyrekohorter gransket og evaluerte dataene. Outliers var ikke pragmatiske (Grubbs test) i dataene, og Kolmogorov–Smirnov-testen og Levenes test bekreftet henholdsvis normalfordelingen av variabler og varianshomogenitet (HOV p > 0.05, Levenes test).

Ellers, ved ulik varians (HOV p < {{0}}.05, Levenes test), Welchs ANOVA (p < 0.05, F′-statistikk) og Games–Howell post hoc-tester kan brukes. .e gjennomsnitt av normalfordelte variabler ble gransket og relatert ved enveis eller gjentatte mål for toveis variansanalyse (ANOVA). Når det gjelder ANOVA, er resultatene signifikante (p < 0,05) i F-statistikk, flere sammenligningstester, nemlig Tukeys HSD (ærlig signifikant forskjell) eller Bonferroni, ble brukt. Statistisk signifikans ble ansett til p < 0,05, og resultatene ble angitt som gjennomsnitt-± Standard Error of Mean (SEM).

3. Resultater

3.1. Utfall av DSM på kroppsmasse (g), kosthold og vanninntak av rotter administrert QA-ICV. Kroppsvekter, fôr og vanninntak ble analysert ukentlig, fra dag 1. En signifikant reduksjon (p < 0.001) i kroppsmasse (g), fôr- og vanninntak på dag 7, 14 og 21 var pragmatisk hos rotter som ble utsatt for QA-ICV-injeksjon på dag 1 sammenlignet med tosham-motparter (Figur 2).

DSM (100 mg/kg)-dosering forårsaket en betydelig økning i kroppsvekten (dag 7p < 0.05, dag 14 p < {{14} }.01, dag 21 p < {{20}}.001), fôr (dag 7p < 0,05, dag 14 p < 0,01, dag 21 p < 0,001), og vanninntak (dag 7 p < 0,01, dag 14 p < 0,05) hos rotter mot QA-ICV.

DSM (50 mg/kg) svekket også signifikant QA-ICV-utløst reduksjon i kroppsvekt (dag 21 p < 0.05) og fôrinntak (dag 7 p < 0.{{20}}1) av rotter i forhold til rotter som har bare QA-ICV-injeksjoner. QA-ICV- og DNP-behandlede rotter avslørte en signifikant eskalering i kroppsmasse (g) (dag 7p < 0.05, dag 14 p < 0.001, dag 21 p < 0,001), fôr (dag 7p < 0,001, dag 14 p < 0,01, dag 21 p < 0,001), og vanninntak (dag 7, 14, 21 p < 0,01) i forhold til rotter som forble eksponert for ensom QA-ICV.

3.2. Effekt av DSM på bevegelse, motorisk koordinasjon og rotters gang mot QA-ICV. I denne studien ble ikke bevegelsesaktivitetene til dyr påvirket av QA-ICV eller legemiddelbehandlinger.

QA-gruppen avbildet ingen signifikant endring i temateller per 5 minutter i aktofometerapparatet sammenlignet med sham-gruppen (figur 3(a)). Rotarod og fotavtrykksanalyse ble brukt til å evaluere den sensoriske motoriske ytelsen og gangarten til rotter.

Resultatene viste at QA-ICV signifikant hemmet (p < 0.001) motorisk koordinasjon (Figur 3(b)) og gang (Figur 3(c)) hos rotter, reflektert av redusert latens for å falle fra den roterende akselen og skrittlengden til rotter i fotavtrykksanalyse sammenlignet med tosham-motstykker.

QA + DSM50 og QA + DSM100-gruppen viste en bemerkelsesverdig økning i fallende latens (p < 0.05, p < 0.01) og skrittlengde (p) < 0,05, p < 0,001) i forhold til QA-gruppen.

DNP-behandling svekket QA-ICV betydelig og utløste en reduksjon i latens til å falle (p < 0.001) og skrittlengde (p < 0,001) sammenlignet med rotter som ble gitt QA-ICV alene. Videre viste DSM (100 mg/kg) behandling en signifikant forbedring (p < 0,01) ingenit i forhold til DSM (50 mg/kg) hos rotter utsatt for QA-ICV.

For more information:1950477648nn@gmail.com