Monoterpenbestanddeler fra Cistanche Tubulosa—kjemiske strukturer av kankanosidene A—E og Kankanol—

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Haihui XIE, Toshio MORIKAWA, Hisashi MATSUDA, Seikou NAKAMURA, Osamu MURAOKA og Masayuki YOSHIKAWA

Abstrakt

Fire nye iridoidglykosider, kankanosiden A (1), B (2), C (3) og D (4), en klorert iridoid, kankanol (5), og et asyklisk monoterpenglykosid, kankanosid E (6), ble isolert fra metanolekstrakt av tørkede stilker av Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) sammen med 16 kjente forbindelser. Strukturene til disse nye forbindelsene (1–6) ble bestemt basert på kjemiske og fysisk-kjemiske bevis.

Stikkord:Cistanche tubulosa; kankanosid; kankanol; iridoid; monoterpen; Orobanchaceae

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)er en flerårig parasittisk plante som vokser på røttene til Salvadora- eller Calotropis-arter, og distribueres i Nord-Afrika, Arabia og asiatiske land.1) Stilkene til denne planten (Kanka-nikujuyou på japansk) har blitt brukt tradisjonelt for behandling av impotens, sterilitet , lumbago og kroppssvakhet.2) Tidligere ble flere iridoider, monoterpenoider, fenyletanoider og lignaner isolert fra kinesisk og pakistansk C. tubulosa. 1,3–7) I løpet av våre seriestudier av bioaktive bestanddeler fra kinesiske naturmedisiner,8–18) fire nye iridoidglykosider, kankanosider A (1), B (2), C (3) og D (4) ), en klorert iridoid, kankanol (5), og et asyklisk monoterpenglykosid, kankanosid E (6), ble isolert fra metanolekstraktet av denne urtemedisinen sammen med 16 kjente forbindelser inkludert 12 monoterpener (7–18). Denne artikkelen tar for seg isolering og strukturbelysning av nye monoterpenbestanddeler (1–6).

Cistanche tubulosa

Metanolekstraktet fra tørkede stilker avCistanche tubulosa(26,8 prosent fra denne urtemedisinen) ble utsatt for normalfase- og reversfase silikagelkolonnekromatografi og gjentatt HPLC for å gi kankanosider A (1, 0.0{{10 }}54 prosent ), B(2, 0.030 prosent ), C (3, 0.00 27 prosent ), og D (4, {{40}}.0015 prosent ), kankanol (5, 0.0{ {66}}34 prosent ), og kankanosid E (6, 0.027 prosent ) sammen med mussaenosidinsyre19) (7, 0.020 prosent ) , geniposidinsyre19) (8, 0,030 prosent ), 8-epilogansyre7) (9, 0,033 prosent ), gluroside19) (10, 0,14 prosent ), antirrhide20) (11, 0,0079 prosent ), ajugol19) (12, 0,11, 0,11, 0,14 prosent). prosent ), bartsioside19) (13, 0,21 prosent ), 6-deoksykatalpol19) (14, 0,11 prosent ), argyol21) (15, 0,0030 prosent ), cistanin22,23) (16, 0,0040 prosent ), 2) (taklorin) 17, 0,0035 prosent ), (2E,6Z)-8-bD-glukopyranosyloksy-2,6-dimetyl-2,6-oktadiensyre24) (18, 0,0028 prosent ), D mannitol25) (4,19 s ercent ), uridin25) (0,0069 prosent ), (3R)-3-hydroksy-2- pyrrolidinon26,27) (0,0020 prosent) og (3R)-3-hydroksy-1-metyl{ {97}}pyrrolidinon27) (0,0059 prosent).

Struktur av kankanosid A (1) Kankanosid A (1) ble oppnådd som et amorft pulver og viste en negativ optisk rotasjon ([a]D 25 107,4 grader i MeOH). IR-spekteret på 1 viste et absorpsjonsbånd ved 1647 cm 1 som kan tilordnes olefinfunksjon i tillegg til sterke absorpsjonsbånd ved 341 0 og 1076 cm 1 som tyder på en glykosiddel. I positiv- og negativ-ion fast atom bombardement (FAB)-MS på 1, ble kvasimomolekylære iontopper observert ved m/z 369 (M Na) og 345 (MH), og høyoppløselig FAB-MS-analyse avslørte molekylet formel 1 er C16H26O8. Syrehydrolyse av 1 med 1,0 M saltsyre (HCl) frigjorde D-glukose, som ble identifisert ved HPLC-analyse ved bruk av en optisk rotasjonsdetektor.8,10—12,15—18) 1 H- (CD3OD, Tabell 1) og 13C-NMR (tabell 2) spektra av 1, som ble tildelt ved forskjellige NMR-eksperimenter,28) viste signaler som kunne tilordnes to metyler [d 1,31 (s, 10-H3), 1,51 (br s, {{47} }H3)], to metylener [d 1,49, 2,02 (både m, 6a- og 6b-H), 1,64, 1,67 (både m, 7b- og 7a-H)], to metiner [d 2,21 (dd, J 2,7) , 9,5 Hz, 9-H), 2,71 (m, 5-H)], og en a,b-umettet acetalgruppe [d 5,33 (d, J 2,7 Hz, 1-H ), 5,95 (br s, 3-H)] sammen med en b-glukopyranosyldel [d 4,62 (d, J 7,9 Hz, 1-H)]. Som vist i fig. 1, indikerte 1 H–1H korrelasjonsspektroskopi (1 H–1 H COSY) eksperimentet på 1 tilstedeværelsen av delstrukturer skrevet med fete linjer. I eksperimentet med heteronukleære multippelbindingskorrelasjoner (HMBC) på 1, ble langdistansekorrelasjoner observert mellom følgende protoner og karboner (3-H, 1 -H og 1-C; 11- H3 og 3-C; 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 og 4- C ; 11-H3 og 5-C; 10-H3 og 7-C; 1-H, 7-H2, 9-H, 10-H3 og 8-C; 10-H3 og 9-C; 7-H2 og 10-C) som vist i fig. 1. Enzymatisk hydrolyse av 1 med b-glukosidase ga et aglykon, kankagenin a (1a) som vist i fig. 3. Sammenligning av 13C NMR-spekteret for 1 med de for 1a avslørte glykosyleringsskiftet rundt 1-posisjonen i 1 [1: dC 94,1 (1-C), 134,6 (3-C), 53,3 (9-C); 1a: dC 92,9 (1-C), 135,3 (3-C), 54,7 (9-C)]. Dermed ble koblingen til bD-glukopyranosyl-delen i 1 også avklart til å være i 1-posisjonen 1a. Deretter ble den relative stereostrukturen til 1 karakterisert av kjernefysisk Overhauser enhancement spectroscopy (NOESY) eksperiment, som viste NOE-korrelasjoner mellom følgende protonpar (1-H og 10-H3; 3-H og 11-H3; 5-H og 6b-H, 9-H; 6b-H og 7b-H; 7a-H og 10-H3; 7b-H og {{ 190}}H) som vist i fig. 2. Til slutt ble den absolutte konfigurasjonen av 1-posisjonen i 1 bestemt ved bruk av 13C NMR glykosyleringsskiftregelen for 1,1-disakkarid,29) som ble funnet. å gjelde for hemiacetalforbindelsene.30,31) Stereostrukturen til 1-posisjonen i 1 ble bekreftet å opprettholdes i 1a ved sammenligning av 1H-NMR-analysen inkludert NOESY-eksperimentet. Glykosyleringsforskyvningsverdiene [Dd 1,2 ppm (1 -C) og 0,9 ppm (1- C), i pyridin-d5] ble funnet å være karakteristiske for R, Rhemiacetal-kombinasjonen, som tilsvarte den absolutte stereostrukturen på 1 som vist i fig. 3. Følgelig ble den absolutte konfigurasjonen ved 1-posisjonen til 1 bestemt til å være S-konfigurasjon, og den absolutte stereostrukturen til 1 ble belyst som vist.

Strukturer av Kankanoside B (2) og C (3) Kankanoside B (2) ble også isolert som et amorft pulver med negativ optisk rotasjon ([a]D 26 118,7 grader i MeOH). IR-spekteret på 2 viste absorpsjonsbånd ved 3410, 1647 og 1{{5{{80}}}}85 cm 1 som kan tilskrives hydroksyl-, olefin- og eterfunksjoner. Molekylformelen C15H24O10 av 2 ble bestemt av de kvasimomolekylære ionetoppene i positiv-ion FAB-MS og ved høyoppløselig FAB-MS. Syrehydrolyse av 2 med 1,0 M HCl frigjort D-glukose, som ble identifisert ved HPLC-analyse ved bruk av en optisk rotasjonsdetektor.8,10—12,15—18) 1 H- (CD3OD, Tabell 1) og 13C-NMR ( Tabell 2) spektra28) av 2 viste signaler som kan tilordnes to metylener [d 1,40 (DDD, J 5,2, 7,3, 13,5 Hz, 6a-H), 2,52 (DDD, J 7,0, 9,2, 13,5 Hz, 6b-5), 3,8 , 3,99 (begge d, J 11,9 Hz, 10-H2)], fire metiner [d 2,21 (dd, J 6,4, 8,6 Hz, 9-H), 2,83 (m, 5- H), 4,02 (dd, J 5,2, 7,0 Hz, 7-H), 5,49 (d, J 6,4 Hz, 1-H)], og et cisolefifinpar [d 4,95 (dd, J 4,0 , 6,1 Hz, 4-H), 6,22 (dd, J 1,8, 6,1 Hz, 3-H)], sammen med en b-glukopyranosyldel [d 4,72 (d, J 7,9 Hz, 1 - H)]. Proton- og karbonsignalene i 1H- og 13C-NMR-dataene til 2 var lik de til 6-deoksykatalpol (14), bortsett fra signalene som skyldes 7- og 8- stillinger. Som vist i fig. 1, indikerte 1 H–1 H COSY-eksperimentet på 2 tilstedeværelsen av delstrukturer skrevet med fete linjer, og i HMBC-eksperimentet ble langdistansekorrelasjoner observert mellom følgende proton- og karbonpar ({{ 122}}H, 1 -H og 1-C; 1-H og 3-C; 10-H2 og 7- C; 1-H , 7-H, 9-H, 10-H2 og 8-C; 7-H, 10-H2 og 9-C ; 7-H og 10-C). Den relative stereostrukturen til 2 ble karakterisert av NOESY-eksperimentet, som viste NOE-korrelasjoner mellom følgende protonpar (1-H og 10-H2; 3- H og 4-H; 5-H og 6b-H, 9-H; 6b-H og 7-H; 7-H og 9-H) som vist i fig. 2. Til slutt ga alkalisk behandling av 14 med 5 prosent vandig kaliumhydroksid (KOH) 2 og 19, 32) slik at stereostrukturen til 2 ble klargjort.

Kankanoside C (3) ble isolert som et amorft pulver med negativ optisk rotasjon ([a]D 26 34.0 grad i MeOH). I negativ-ion FAB-MS på 3 ble et par av isotop kvasimolekylære ionetopper observert ved m/z 399 og 401 (MH) . Molekylformelen til 3 ble bestemt til å være C15H25ClO10 ved høyoppløselig FAB-MS-måling. Syrehydrolyse av 3 med 1,0 M HCl frigjort D-glukose, som ble identifisert ved HPLC-analyse ved bruk av en optisk rotasjonsdetektor.8,10—12,15—18) 1 H- (CD3OD, Tabell 1) og 13C-NMR ( Tabell 2) spektra28) av 3 viste signaler som kan tilordnes tre metylener [d 1,70 (br dd, J ca. 3, 13 Hz, 4a-H), 2,70 (br dd, J ca. 6, 13 Hz, 4b-H) , 1,68 (br d, J ca. 13 Hz, 6a H), 2,44 (m, 6b-H), 4,01, 4,04 (begge d, J 11,3 Hz, 10-H2)], fem metiner [d 2,47 (dd, J 2,5, 7,9 Hz, 9-H), 2,61 (m, 5- H), 3,94 (br s, 7-H), 5,10 (br d, J ca. 3 Hz, 3-H), 5,48 (d, J 2,5 Hz, 1-H)], og en b-glukopyranosyldel [d 4,60 (d, J 8,0 Hz, 1-H)]. Proton- og karbonsignalene i 1H- og 13C-NMR-spektrene på 3 kunne legges over signalene til 2, bortsett fra signalene på grunn av 3-- og 4--posisjonene. Posisjonene til bD-glukopyranosyl og klorfunksjon i 3 ble belyst fra H–H COSY- og HMBC-eksperimentene som vist i fig. 1. Følgelig ble den plane strukturen til 3 konstruert til å være som vist. Den relative stereostrukturen til 3 ble bestemt ved et NOESY-eksperiment, der NOE-korrelasjoner ble observert mellom følgende protonpar (1-H og 3-H, 10-H2; 3- H og 4a-H; 4b-H og 5- H; 5-H og 6b-H, 9-H; 6b-H og 7-H; {{121} }H og 9-H) som vist i fig. 2.

Strukturer av Kankanoside D (4) og Kankanol (5) Kankanoside D (4) ble isolert som et amorft pulver med negativ optisk rotasjon ([a]D 25 30.6 grader i MeOH). IR-spekteret på 4 viste et absorpsjonsbånd ved 1655 cm 1 som kan tilskrives olefinfunksjon og sterke absorpsjonsbånd ved 341 0 og 1078 cm 1 som tyder på dets glykosidstruktur. I positiv-ion FAB-MS på 4 ble en kvasimomolekylær ionetopp observert ved m/z 341 (M Na). Molekylformelen C15H26O7 av 4 ble bestemt ved høyoppløselig FAB-MS-måling. Syrehydrolyse av 4 med 1,0 M HCl frigjorde D-glukose,8,10—12,15—18), mens (R)-rotunditet (4a) 33,34) ble oppnådd ved enzymatisk hydrolyse av 4 med b-glukosidase. 1H-NMR (tabell 3, CD3OD) og 13C-NMR (tabell 4) spektra28) av 4 viste signaler som kan tilordnes en metyl [d 1,69 (s, 10-H3)], tre metylener [d 1,41, 2,06 (begge m, 4-H2), 1,51, 2,01 (både m, 6a- og 6b-H), 2,23 (br dd, J ca. 8, 15 Hz, 7a-H), 2,37 (br dd , J ca. 8, 15 Hz, 7b-H)], et metin [d 2,90 (m, 5- H)], og to metylener som bærer en oksygenfunksjon {d [3,56 (DDD, J 2,8, 7,4) , 13,2 Hz), 3,97 (DDD, J 4,9, 8,0, 13,2 Hz), 3-H2], 4,04, 4,18 (begge d, J 12,2 Hz, 1-H2)} sammen med en b- glukopyranosyldel [d 4,25 (d, J 7,7 Hz, 1-H)]. Posisjonen til bD-glukopyranosyldelen i 4 ble avklart av HMBC-eksperimentet til å være 3-posisjon (fig. 1). Basert på dette beviset ble den absolutte stereostrukturen til 4 bestemt til å være som vist.

Kankanol (5) ble oppnådd som et amorft pulver med positiv optisk rotasjon ([a]D25 11,1 grader). Den kjemiske ionisering (CI)-MS på 5 viste et par isotop-iontopper ved m/z 221 og 223 på grunn av et kvasimomolekylært ion (MH). Den høyoppløselige CI-MS-målingen på 5 viste at molekylformelen var C9H13ClO4. 1H-NMR (tabell 1, CD3OD) og 13C-NMR (tabell 2) spektra28) av 5 viste tilstedeværelsen av følgende funksjoner: tre metylener [d 1,60 (DDD, J 2,5, 5,5, 13,1 Hz, 4a-H), 1,80 (br dd, J ca. 3, 13 Hz, 4b H), 1,83 (br d, J ca. 12 Hz, 6a-H), 2,57 (m, 6b-H), 3,75 , 3,88 (begge d, J 9,2 Hz, 10-H2)], fem metiner [d 2,76 (dd, J 4,3, 8,0 Hz, 9-H), 2,50 (m, 5- H), 3,80 (br s, 7-H), 5,17 (br d, J ca. 3 Hz, 3-H), 5,26 (d, J 4,3 Hz, 1-H) ]. Den plane strukturen til 5 ble bekreftet av 1 H–1 H COSY- og HMBC-eksperimenter. Det vil si at 1 H–1 H COSY-eksperimentet på 5 indikerte tilstedeværelsen av delstrukturene skrevet med fete linjer, og i HMBC-eksperimentet ble langdistansekorrelasjoner observert som vist i fig. 1. Den relative stereostrukturen til 5 var bestemt av NOESY-eksperimentet, der NOE-korrelasjoner ble observert mellom de følgende protonparene (1-H og 9-H; 3-H og 4a-H; 4b-H og {{ 93}} H; 5-H og 6b-H, 9-H; 6b-H og 7-H; 7-H og 9-H) som vist i fig. 2. Ved sammenligning av 1H- og 13C-NMR-dataene for 5 med de for 14a, som ble oppnådd ved behandling av 14 med 5 prosent vandig HCl som vist i skjema 1,35) posisjonen til klor. gruppe i 5 ble støttet for å være 3-posisjonen. Videre ga acetylering av 5 med eddiksyreanhydrid (Ac2O) og pyridin 3,7-oksidet (5a), mens 14a ga diacetatet (14b) under samme acetyleringsbetingelse. Dette beviset førte også til at vi bekreftet at klorfunksjonen var 3b-posisjonen (diagram 3). Følgelig ble stereostrukturen til 5 bestemt til å være som vist.

Struktur av kankanosid E (6) Kankanosid E (6) ble isolert som et amorft pulver med negativ optisk rotasjon ([a]D 25 20.0 grad i MeOH). IR-spekteret på 6 viste absorpsjonsbånd ved 3410, 1647, 1085 cm 1 som kan tilskrives glykosid- og karbonylfunksjoner, mens UV-spekteret viste absorpsjonsmaksimum ved 211 nm (log e 4,63), noe som indikerer tilstedeværelsen av en b-umettet karboksylsyre. Molekylformelen C16H28O8 av 6 ble karakterisert ved positiv- og negativ-ion FAB-MS og ved høyoppløselig MS-måling. Syrehydrolyse av 6 frigjorte D-glukose,8,10—12,15—18), mens (2E,6R)-8-hydroksy-2,6-dimetyl- 2-oktansyre (6a) 36) ble oppnådd ved enzymatisk hydrolyse av 6 med b-glukosidase. 1H-NMR (tabell 3, CD3OD) og 13C-NMR (tabell 4) spektra28) på 6 indikerte tilstedeværelsen av en (2E,6R)-8-hydroksy-2,6- dimetyl-2-oktansyredel [d 0,95 (d, J 6,4 Hz, 10-H3), 1,30, 1,48 (begge m, 5-H2), 1,45, 1,70 (begge m, { {70}}H2), 1,65 (m, 6-H), 1,81 (s, 9-H3), 2,22 (2H, m, 4-H2), 3,61, 3,94 (begge m, 8-H2), 6,78 (dd, J 1,2, 7,3 Hz, 3-H)] sammen med en bD-glukopyranosyldel [d 4,26 (d, J 7,6 Hz, 1-H)] . Ved sammenligning av karbonsignalene i 13C-NMR-spekteret på 6 med de til 6a, ble glykosyleringsskiftet observert rundt 8-posisjonen til 6. Posisjonen til glukosidbindingen ble også bekreftet av HMBC-eksperimenter som vist i Fig. 1. Følgelig ble den absolutte stereostrukturen til 6 avklart til å være (2E,6R)-8-b-D-glukopyranosyloksy-2,6-dimetyl-2-oktansyre.

cistanche ekstrakt fordel

Eksperimentell

Følgende instrumenter ble brukt for å innhente fysiske data: spesifikke rotasjoner, Horiba SEPA-300 digital polarimeter (l 5 cm); UV-spektre, Shimadzu UV-1600-spektrometer; IR-spektre, Shimadzu FTIR-8100-spektrometer; EI-MS, CI-MS og høyoppløselig CI-MS, JEOL JMS-GCMATE massespektrometer; FAB-MS og høyoppløselig MS, JEOL JMS-SX 102A massespektrometer; 1H-NMR-spektrum, JEOL EX-270 (270 MHz) og JNM-LA500 (500 MHz) spektrometre; 13C-NMR-spektre, JEOL EX-270 (68 MHz) og JNM-LA500 (125 MHz) spektrometre med tetrametylsilan som intern standard; og HPLC-detektor, Shimadzu RID-6En brytningsindeks og SPD- 10Avp UV-VIS-detektorer. HPLC-kolonne, YMC-Pack ODS-A (250 4,6 mm id) og (250 20 mm id) kolonner ble brukt til henholdsvis analytiske og preparative formål.

Følgende eksperimentelle forhold ble brukt for kromatografi: ordinær fase silikagelkolonnekromatografi, silikagel BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japan, 15{{10}}—35 0 mesh); omvendt fase silikagel-kolonnekromatografi, Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japan, 100–200 mesh); TLC, forhåndsbelagte TLC-plater med silikagel 60F254 (Merck, 0,25 mm) (ordinær fase) og silikagel RP- 18 F254S (Merck, 0,25 mm) (omvendt fase); omvendt-fase HPTLC, forhåndsbelagte TLC-plater med silikagel RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm); og deteksjon ble oppnådd ved å sprøyte med 1 prosent Ce(SO4)2–10 prosent vandig H2SO4 etterfulgt av oppvarming.

Plantemateriale

Tørkede stilker av Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT ble kjøpt i Urumqi, Xinjiang-provinsen, Kina i januar 2005 via Eishin Trading Co., Ltd. Osaka, Japan, og botanisk identifikasjon ble utført av professor Jia Xiaoguang ved Xinjiang Institute of Traditional Chinese og etnologiske medisiner. En kupongprøve (2005.01. Xinjiang-01) av denne planten er lagret i laboratoriet vårt.

Ekstraksjon og isolasjon

Tørkede stilker av C. tubulosa (5,0 kg) ble pulverisert og ekstrahert tre ganger med metanol under tilbakeløp i 3 timer. Fordampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga metanolekstraktet (134 0 g, 26,8 prosent fra denne urtemedisinen). Metanolekstraktet (160 g) ble underkastet normalfase silikagelkolonnekromatografi [3,2 kg, CHCl3–MeOH–H2O (10: 3 : 1→7 : 3 : 1, lavere lag→6 : 4 : 1)MeOH] for å gi seks fraksjoner [Fr. 1 (5.04 g), Fr. 2 (9,84 g), Fr. 3 (7,80 g), Fr. 4 (13,28 g), Fr. 5 (113,6{{104}} g), og Fr. 6 (7,61 g)]. Fraksjon 1 (5,00 g) ble separert ved reversfase silikagelkolonnekromatografi [150 g, MeOH–H2O (40 6: 60→ 5{{ 162}} : 50→60 : 40, v/v)→MeOH] for å gi fem fraksjoner [Fr. {{50}} (83{{201}} mg), Fr. 1-2 (590 mg), Fr. 1-3 (180 mg), Fr. 1-4 (124 mg), og Fr. 1-5 (3200 mg)]. Fr. {{60}} (830 mg) ble ytterligere separert ved HPLC [MeOH–H2O (10: 90, v/v)] for å gi kankanol (5, 20) mg, 0,0034 prosent), argyol (15, 18 mg, 0,0030 prosent), cistanin (16, 24 mg, 0,0040 prosent), og Fr. 1-1-2 (62 mg), som ble ytterligere separert ved HPLC [MeOH–H2O (2:98, v/v)] for å gi (3R)-3-hydroksy-2-pyrrolidinon (0,0020 prosent) ) og (3R)-3-hydroksy-1-metyl-2-pyrrolidinon (0,0059 prosent). Fr. 1-2 (590 mg) ble renset ved HPLC [MeOH–H2O (35:65, v/v) og CH3CN–H2O (20:80, v/v)] for å gi cistanklorin (17, 21 mg, 0,0035) prosent ). Fraksjon 2 (9,72 g) ble underkastet revers-fase silikagelkolonnekromatografi [290 g, MeOH–H2O (20 : 80 → 30 : 70 → 40 : 60 → 60 : 40, v/v) → MeOH] til af ford syv brøker [Fr. 2-1 (1986 mg), Fr. 2-2 (1563 mg), Fr. 2-3 (3931 mg), Fr. 2-4 (375 mg), Fr. 2-5 (486 mg), Fr. 2-6 (460 mg), og Fr. 2-7 (336 mg)]. Fr. 2-1 (466 mg) ble separert ved HPLC [MeOH–H2O (5:95, v/v)] for å gi uridin (0,0069 prosent). Fr. 2-2 (535 mg) ble separert ved HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] for å gi antirrhide (11, 15 mg, 0,0079 prosent) og 6-deoksykatalpol (14, 214) mg, 0,11 prosent). Fr. 2-3 (535 mg) ble separert ved HPLC [MeOH–H2O (20:80, v/v)] for å gi gluroside (10, 110 mg, 0,14 prosent) og bartsiosid (13, 164 mg, 0,21 prosent) . Fr. 2-4 (375 mg) ble separert ved HPLC [MeOH–H2O (30:70, v/v)] for å gi kankanosidene A (1, 32 mg, 0,0054 prosent) og D (4, 9 mg, 0,0015 prosent) ). Fr. 2-6 (460 mg) ble ytterligere separert ved HPLC [MeOH–H2O (45 : 55, v/v)] for å gi kankanosid E (6, 161 mg, 0,027 prosent) og (2E,6Z){{192 }}bD-glukopyranosyloksy-2,6-dimetyl-2,6-oktadiensyre (18, 17 mg, 0,0028 prosent). Fraksjon 3 (7,60 g) ble utsatt for revers-fase silikagelkolonnekromatografi [230 g, MeOH–H2O (20 : 80 → 40 : 60 → 50 : 50 → 60 : 40, v/v) → MeOH] for å gi fem brøker [Fr. 3-1 (2652 mg), Fr. 3-2 (593 mg), Fr. 3-3 (3610 mg), Fr. 3-4 (190 mg), og Fr. 3-5 (336 mg)]. Fr. 3-1 (480 mg) ble renset ved HPLC [MeOH–H2O (10:90, v/v)] for å gi kankanosid B (2, 19 mg, 0,018 prosent), geniposidinsyre (8, 32 mg, 0,030) prosent ), og ajugol (12, 12 mg, 0,011 prosent). Fraksjon 4 (13,10 g) ble utsatt for revers-fase silikagelkolonnekromatografi [390 g, MeOH–H2O (10 : 90 → 20 : 80 → 30 : 70 → 40 : 60 → 50 : 50, v/v) → MeOH] for å gi syv fraksjoner [Fr. 4-1 (6114 mg), Fr. 4-2 (430 mg), Fr. 4-3 (1058 mg), Fr. 4-4 (170 mg), Fr. 4-5 (2595 mg), Fr. 4-6 (1635 mg), og Fr. 4-7 (1064 mg)]. Fr. 4-2 (430 mg) ble ytterligere separert ved HPLC [MeOH–H2O (5:95, v/v)] for å gi 2 (70 mg, 0,012 prosent) og kankanosid C (3, 16 mg, 0,0027 prosent) . Fr. 4-6 (1058 mg) ble også separert ved HPLC [MeOH–H2O (15 : 85, v/v)] for å gi mussaenosidinsyre (7, 116 mg, 0,020 prosent) og 8-epilogansyre (9, 193 mg, 0,033 prosent). Fraksjon 5 (15,15 g) ble underkastet revers-fase silikagelkolonnekromatografi [455 g, MeOH-H2O (0 : 100 → 10 : 90 → 20 : 80 → 40 : 60 → 50 : 50, v/v) → MeOH ] for å gi syv brøker [Fr. 5-1 (9311 mg), Fr. 5-2 (1114 mg), Fr. 5-3 (306 mg), Fr. 5-4 (347 mg), Fr. 5-5 (1620 mg), Fr. 5-6 (1453 mg), og Fr. 5-7 (1106 mg)]. Fr. 5-1 (9311 mg) ble krystallisert fra MeOH for å gi D-mannitol (3337 mg, 4,19 prosent).

De kjente forbindelsene (7—18) ble identifisert ved sammenligning av deres fysiske data ([a]D, IR, 1H-NMR, 13C-NMR, MS) med rapporterte verdier 1,7,19—24,26,27) eller de fra kommersielle prøver.25) Kankanosid A (1): Et amorft pulver, [a]D 25 107,4 grader (c 1,50, MeOH). Høyoppløselig positiv-ion FAB-MS: Beregnet for C16H26O8Na (M Na) 369,1525; Funnet 369,1522. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1076 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD og pyridin-d5) d: gitt i tabell 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD og pyridin-d5) d C: gitt i tabell 2. Positiv-ion FAB-MS: m /z 369 (M Na). Negativ-ion FAB-MS: m/z 345 (MH) .

Kankanosid B (2): Et amorft pulver, [a]D 26 118,7 grader (c 0.10, MeOH). Høyoppløselig positiv-ion FAB-MS: Beregnet for C15H24O10Na (M Na) 387,1267; Funnet 387,1261. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: gitt i tabell 2. Positiv-ion FAB-MS: m/z 387 (M Na). Negativ-ion FAB-MS: m/z 363 (MH) .

Kankanosid C (3): Et amorft pulver, [a]D 26 34.0 grad (c 1.00, MeOH). Høyoppløselig negativ-ion FAB-MS: Beregnet for C15H24ClO10 (MH) 399,1058; Funnet 399,1077. IR (KBr): 3410, 2964, 1159, 1078, 1048, 949 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 1. 13C NMR (125 MHz, CD3OD) dC: gitt i tabell 2. Negativ-ion FAB-MS: m/z 399, 401 (MH).

Kankanosid D (4): Et amorft pulver, [a]D 25 30,6 grader (c 0,50, MeOH). Høyoppløselig positiv-ion FAB-MS: Beregnet for C15H26O7Na (M Na) 341,1204; Funnet 341,1210. IR (KBr): 3410, 2940, 1655, 1078, 1040 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: gitt i tabell 4. Positiv-ion FAB-MS: m/z 341 (M Na). Negativ-ion FAB-MS: m/z 317 (MH) .

Kankanol (5): Et amorft pulver, [a]D 25 11,1 grader (c 1,40, MeOH). Høyoppløselig CI-MS: Beregnet for C9H14ClO4 (MH) 221,0580; Funnet 221,0582. IR (KBr): 3399, 3004, 1165, 1096, 1059, 1048, 955 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: gitt i tabell 2. CI-MS m/z (prosent): 221 (MH) (5) 223 (MH) (2), 185 (88), 167 (100), 149 (71) og 57 (49).

Kankanosid E (6): Et amorft pulver, [a]D 25 20.0 grader (c 2.00, MeOH). Høyoppløselig positiv-ion FAB-MS: Beregnet for C16H28O8Na (M Na) 371,1682; Funnet 371,1690. UV [MeOH, nm (log e)]: 215 (4,16). IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085, 1043 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: gitt i tabell 4. Positiv-ion FAB-MS: m/z 371 (M Na). Negativ-ion FAB-MS: m/z 347 (MH).

cistanche ekstrakt fordel

Syrehydrolyse av 1—4 og 6 med 1 M HCl

En løsning av 1-4 eller 6 (hver 1,5 mg) i 1 M HCl (0,5 ml) ble oppvarmet under tilbakeløp i 3 timer. Etter avkjøling ble reaksjonsblandingen helt i isvann og nøytralisert med Amberlite IRA-400 (OH-form), og harpiksen ble fjernet ved filtrering. Deretter ble filtratet ekstrahert med EtOAc. Det vandige laget ble utsatt for HPLC-analyse under følgende betingelser: HPLC-kolonne, Ka-sensor LC NH{{10}}, 4,6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Japan); deteksjon, optisk rotasjon [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokyo, Japan)]; mobil fase, CH3CN–H2O (75:25, v/v); stipendhastighet 0,8 ml/min; kolonnetemperatur, romtemperatur. Identifikasjon av D-glukose tilstede i det vandige laget ble utført ved sammenligning av retensjonstid og optisk rotasjon med de for en autentisk prøve: tR 12,3 min (positiv optisk rotasjon)

Enzymatisk hydrolyse av 1, 4 og 6 med b-glukosidase

En løsning av 1 (7,7 mg) i H2O (1,5 ml) ble behandlet med b-glukosidase (5,0 mg, fra mandel, Oriental Yeast Co., Tokyo, Japan) og løsningen ble omrørt ved 37 grader i 3 d. Etter at EtOH ble tilsatt til reaksjonsblandingen, ble løsningsmidlet fjernet under redusert trykk og resten ble renset ved HPLC [MeOH–H2O (55:45, v/v)] for å gi kankagenin a (1a, 2,3 mg, 56 prosent) . Gjennom en lignende prosedyre, (R)-rotundiol33,34) (4a, 1,2 mg, 69 prosent) og (2E,6R)-8-hydroksy-2,6-dimetyl{{30} }oktansyre36) (6a, 6,8 mg, 62 prosent) ble oppnådd fra henholdsvis 4 (3,5 mg) og 6 (20,4 mg).

Kankagenin a (1a): Et hvitt pulver, [a]D 25 18,4 grader (c 0.20, MeOH). Høyoppløselig EI-MS: Beregnet for C10H16O3 (M) 184,1099; Funnet 184,1106. IR (KBr): 3410, 2940, 1684 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: gitt i tabell 2. EI MS: m/z (prosent): 184 (M, 37) 95 (100).

Alkalisk behandling av 14 med 5 prosent vandig KOH

En løsning av 14 (23,0 mg) i 5 prosent vandig KOH (1,0 ml) ble omrørt ved 80 grader i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble nøytralisert med Amberlite HCR-W2 (H-form). Fjerning av løsningsmidlet fra filtratet under redusert trykk ga en rest, som ble renset ved HPLC [MeOH–H2O (5:95, v/v)] for å gi 2 (4,0 mg, 16 prosent) og 1932) (10,5 mg) , 43 prosent).

Syrebehandling av 14 med 5 prosent vandig HCl

En løsning av 14 (25,0 mg) i 5 % vandig HCl (2,0 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble helt over i isvann og hele reaksjonsblandingen ble ekstrahert med EtOAc. EtOAc-ekstraktet ble suksessivt vasket med mettet vandig NaHC03 og saltvann, deretter tørket over vannfritt MgS04-pulver og filtrert. Fjerning av løsningsmidlet fra filtratet under redusert trykk ga en rest, som ble separert ved HPLC [MeOH–H2O (20: 80, v/v)] for å gi 14a (4,0 mg, 25 prosent).

14a

Et hvitt pulver, [a]D 20 21,5 grader (c 0,30, MeOH). Høyoppløselig CI-MS: Beregnet for C9H14ClO4 (MH) 221,0580; Funnet 221,0587. IR (KBr): 3410, 2962, 1365, 1152, 1055, 945 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: gitt i tabell 2. CI-MS: m/z (prosent): 221 (MH) ( 7), 223 (MH) (3), 203 (M H20) (97), 205 (M H20) (33), 185 (7), 167 (12), 159 (32), 121 (27), 110 (48), 95 (64), 85 (100), 67 (56) og 57 (65).

Acetylering av 5 og 14a

En løsning av 5 (2,5 mg) i pyridin (0,5 ml) ble behandlet med eddiksyreanhydrid (Ac2O, 0,4 ml) og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble helt over i isvann og hele reaksjonsblandingen ble ekstrahert med EtOAc. EtOAc-ekstraktet ble suksessivt vasket med 5% vandig HC1, mettet vandig NaHC03 og saltvann og deretter tørket over vannfritt MgS04-pulver og filtrert. Fjerning av løsningsmidlet fra filtratet under redusert trykk ga en rest, som ble renset ved HPLC [MeOH-H2O (35:65, v/v)] for å gi 5a (2,3 mg, 77 prosent). Gjennom en lignende prosedyre ble 14b (2,7 mg, 87 prosent) også fremstilt og renset ved HPLC [MeOH–H2O (55:45, v/v)] fra 14a (2,1 mg).

5a

Et hvitt pulver, [a]D 20 1,8 grader (c 0,18, MeOH). Høyoppløselig CI MS: Beregnet for C11H15O5 (MH) 227,0919; Funnet 227,0925. IR (KBr): 2962, 1734, 1374, 1258, 1237, 1169, 1103, 1053, 947 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: gitt i tabell 2. CI-MS m/z (prosent): 227 (MH) (28) ), 209 (M H20) (4), 184 (3), 166 (45), 149 (22), 138 (38), 122 (44), 94 (31), 85 (100) og 57 (34) ).

14b

Et hvitt pulver, [a]D 20 23,7 grader (c 0,06, MeOH). Høyoppløselig CI-MS: Beregnet for C13H18ClO6 (MH) 305,0792; Funnet 305,0790. IR (KBr): 1744, 1376, 1243, 1231, 1001, 941 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: gitt i tabell 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: gitt i tabell 2. CI-MS: m/z (prosent): 305 (MH) ( 2), 307 (MH) (1), 263 (MH C2H30) (6), 265 (MH C2H30) (3), 245 (30), 203 (8), 185 (100), 167 (7), 149 (33), 121 (26), 95 (15), 85 (37) og 57 (93).

Anerkjennelser

Denne forskningen ble støttet av det 21. COE-programmet, Academic Frontier Project og en Grant-in-Aid for vitenskapelig forskning fra departementet for utdanning, kultur, sport, vitenskap og teknologi i Japan. Forfatterne takker professor Xiaoguang Jia ved Xinjiang Institute of Traditional Chinese and Ethnologic Medicines i Urumqi, Kina, for identifiseringen av plantemateriale.

cistanche fordel

Referanser og notater

1) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 35, 3309-3314 (1987).

2) Xinjiang Science and Technology Press, "Culture Techniques of Xinjiang Staple Medicinal Plants," Xinjiang Institute of Traditional Chinese and Ethnologic Medicines Ed., 2004, s. 84–88.

3) Du N., Zhou P., Wang J., Liu C., Li W., Zhongguo Yaoke Daxue Xue bao, 24, 46—48 (1993).

4) Xue D., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 22, 170—171 (1997).

5) Song Z., Mo S., Chen Y., Tu P., Li W., Zhao Y., Zheng J., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 25, 728—730 (2000).

6) Song Z., Tu P., Zhao Y., Zheng J., Zhongcaoyao, 31, 808—810 (2000).

7) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 38, 1927—1930 (1990).

8) Matsuda H., Morikawa T., Tao J., Ueda K., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 50, 208—215 (2002).

9) Morikawa T., Matsuda H., Toguchida I., Ueda K., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 65, 1468—1474 (2002).

10) Tao J., Morikawa T., Toguchida I., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Bioorg. Med. Chem., 10, 4005-4012 (2002).

11) Morikawa T., Tao J., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 66, 638—645 (2003).

12) Tao J., Morikawa T., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 51, 654—662 (2003).

13) Matsuda H., Morikawa T., Xie H., Yoshikawa M., Planta Med., 70, 847—855 (2004).

14) Sun B., Morikawa T., Matsuda H., Tewtrakul S., Harima S., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 67, 1464—1469 (2004).

15) Morikawa T., Sun B., Matsuda H., Wu LJ, Harima S., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 52, 1194—1199 (2004).

16) Xie H., Wang T., Matsuda H., Morikawa T., Yoshikawa M., Tani T., Chem. Pharm. Bull., 53, 1416—1422 (2005).

17) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 69 (2006) i trykken.

18) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Wang T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 54, 506—513 (2006).

19) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 33, 3645-3650 (1985).

20) Otsuka H., Phytochemistry, 33, 617-622 (1993).

21) Zhao W., Yang G., Xu R., Qin G., Phytochemistry, 41, 1553-1555 (1996).

22) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 32, 1729-1734 (1984).

23) Xu Z., Yang S., Yang J., Lu R., Zhongcaoyao, 30, 244-246 (1999).

24) Wang SJ, Pei YH, Hua HM, Chin. Chem. Lett., 12, 343—344 (2001).

25) Disse kjente forbindelsene ble identifisert ved sammenligning av deres fysiske data med kommersielt innhentede prøver.

26) Pires R., Burger K., Tetrahedron, 53, 9213—9218 (1997).

27) Kamal A., Ramana KV, Ramana AV, Babu AH, Tetrahedron: Asymmetry, 14, 2587—2594 (2003).

28) 1H- og 13C-NMR-spektrene til 1-6 og relaterte forbindelser (19, 1a, 5a, 14a, 14b) ble tildelt ved hjelp av forvrengningsfri forsterkning ved polarisasjonsoverføring (DEPT), dobbel kvantefilterkorrelasjonsspektroskopi ( DQF COSY), heteronukleær multippel kvantekoherens (HMQC) og heteronukleær multippelbindingsforbindelse (HMBC) eksperimenter.

29) Nishizawa M., Kodama S., Yamase Y., Kayano K., Hatakeyama S., Ya mada H., Chem. Pharm. Bull., 42, 982-984 (1994).

30) Yoshikawa M., Ueda T., Matsuda H., Yamahara J., Murakami N., Chem. Pharm. Bull., 42, 1691-1693 (1994).

31) Matsuda H., Shimoda H., Uemura T., Ueda T., Yamahara J., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 47, 1753—1758 (1999).

32) Damtoft S., Jensen SR, Nielsen BJ, Phytochemistry, 24, 2281— 2283 (1985).

33) Watanabe K., Takada Y., Matsuo N., Nishimura H., Biosci. Bioteknologi. Biochem., 59, 1979-1980 (1995).

34) Takikawa H., Yamazaki Y., Mori K., Eur. J. Org. Chem., 229-232 (1998).

35) Kitagawa I., Fukuda Y., Taniyama T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 39, 1171-1176 (1991).

36) Yamaguchi K., Shinohara C., Kojima S., Sodeoka M., Tsuji T., Biosci. Bioteknologi. Biochem., 63, 731-735 (1999).