Preparativ isolering og rensing av fire forbindelser fra Cistanches Deserticola YC Ma ved høyhastighets motstrømskromatografi

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Abstrakt:

Etter et komponentanrikningstrinn på en silikagelkolonne, firefenyletanoidglykosiderble vellykket isolert fraCistanches deserticolaog renset ved preparativ høyhastighets motstrømskromatografi (HSCCC) med et tofaset løsningsmiddelsystem bestående av etylacetat-n-butanol-etanol-vann (40:6:6:50, v/v /v/v). Totalt 30,9 mg acteosid, 13,0 mg isoacteosid, 12,5 mg syringalid A 3'- -L-rhamnopyranosid og 7,2 mg 2'-acetylacteosid med en renhet på høyere enn 95 prosent, bestemt ved HPLC-ELSD, oppnådd i ett-trinns separasjon fra 297 mg avCistanche deserticola ekstrakt, henholdsvis. Strukturene deres ble identifisert ved HR-MS, 1H-NMR og 13C-NMR.

Nøkkelord: høyhastighets motstrømskromatografi;Cistanches deserticola YC Ma;fenyletanoidglykosider; akteosid; isoakteosid; syringalid A 3'- -L-rhamnopyranosid; 2'-acetylakteosid.

Introduksjon

Cistanches deserticolaYC Ma, en art avCistanchersom tilhører Orobanchacea-familien, er en velkjent tradisjonell kinesisk medisin for behandling av nyresvikt, kvinnelig infertilitet, sykelig leukoré, nevrapraxi og senil forstoppelse [1]. Det er en parasittisk plante som er vidt utbredt i nordvest i Kina. Så langt har flere forbindelser, inkludert fenyletanoidglykosider (PhGs), iridoider og lignaner blitt isolert fra denne arten [2]. Noen av PhG-ene har blitt rapportert å ha antioksidative, leverbeskyttende og nevrobeskyttende aktiviteter [3–6]. Imidlertid er isolerings- og renseprosedyren for PhG-er vanskelig og tidkrevende. Dessuten bruker de klassiske flerkromatografiske metodene ikke bare et stort antall organiske løsningsmidler, men gir også en lavere prøvegjenvinning. Høyhastighets motstrømskromatografi (HSCCC), en støttefri væske-væske partisjonskromatografisk teknikk, tilbyr utmerket prøvegjenvinning sammenlignet med noen konvensjonelle metoder og har blitt mye brukt for separasjon og rensing av ulike naturprodukter [7–9] . Selv om flere PhG er blitt renset fraCistancherslekt og andre av HSCCC [10–14], har ingen artikler rapportert rensing av akteosid, isoakteosid, syringalid A 3'- -L-rhamnopyranosid og 2'-acetylakteosid i ett bifasisk system.

I denne artikkelen rapporterer vi en enkel metode for separasjon og rensing av fire PhG fra C. deserticola. Til slutt ble 30,9 mg akteosid, 13,0 mg isoakteosid, 12,5 mg syringalid A 3'- -L-rhamnopyranosid og 7,2 mg 2'-acetylakteosid oppnådd i ett trinn separasjon fra 297 mg fraksjon med renheter på henholdsvis 99 prosent, 95 prosent, 99 prosent og 98 prosent. Strukturene deres ble karakterisert basert på 1H- og 13C-NMR-spektraldata og HR-MS-spektra. Strukturene til de fire doktorgradsstudentene identifisert i denne undersøkelsen er vist i figur 1.

Resultater og diskusjon

HPLC-analyse av råekstraktet

Den anrikede fraksjonen av n-butanekstrakt fra C. deserticola ble analysert ved HPLC-UV. Kolonnen som ble brukt var en Accurasil C18 (250 mm × 4,6 mm, id 5 μm) (Thermo-Fisher Scientific Instruments, city, state abbrev, USA), den mobile fasen var metanol-vann (30:70, v/v). Strømningshastigheten var 1 ml/min. Detektorbølgelengden ble satt til 254 nm. HPLC-kromatogrammet er vist i figur 2. Topper 1 til 4 tilsvarer akteosid (1), isoakteosid (2), syringalid A 3'- -L-rhamnopyranosid (3) og 2'-acetylakteosid (4), hhv.

Valg av tofaset løsemiddelsystem

Vellykket separasjon med HSCCC avhenger i stor grad av valget av et passende tofaset løsningsmiddelsystem, det tofasede løsningsmiddelsystemet ble valgt i henhold til fordelingskoeffisientverdiene (K) for hver målkomponent og et optimalt område for K bør være fra {{ 2}}.5 til 2.

I forsøket er K-verdiene for målkomponenter i flere tofasede løsningsmiddelsystemer vist i tabell 1 (selv om resultatene var litt høyere for topp 4, viste seg å være akseptable). Blant dem ga etylacetat-n-butanol-etanol-vann (40:6:6:50, v/v/v/v) passende fordelingskoeffisienter for målforbindelsene. Etter hvert ble løsningsmiddelsystemet bestående av etylacetat-n-butanol-etanol-vann (40:6:6:50, v/v/v/v) brukt til å isolere og rense fire forbindelser av C. deserticola, som vist i Figur 3. Som vist i figur 2 avslørte HPLC-analysen av hver HSCCC-fraksjon at fire rene PhG-er (acteosid, 99 prosent; isoacteosid, 95 prosent; syringalid A 3′- -L-rhamnopyranosid 99 prosent og 2′- acetylakteosid 98 prosent) kunne oppnås fra råfraksjonen.

Eksperimentell

Apparater

HSCCC-utstyret som ble brukt i denne studien var et TBE-300B høyhastighets motstrømskromatografisystem (Shanghai Tauto Biotech Co., Shanghai, Kina) med tre forberedende flerlags spoleseparasjonskolonner koblet i serie (diameter på røret)=2,6 mm, totalt volum=300 mL) og en 20 mL prøveløkke. Omdreiningsradius eller avstanden mellom holderaksen og sentralensentrifugens akse (sentrifugens akse (R) var 5 cm, og verdien varierte fra 0.5 ved den interne terminalen til 0.8 ved den eksterne terminalen (= r/R, der r er avstanden fra spolen til holderakselen). Et HX 105 sirkulasjonsredskap med konstant temperatur (Beijing Changliu Lab Instrument Company, Beijing, Kina) ble brukt til å kontrollere temperaturen i eksperimentet. HSCCC-systemet var utstyrt med en modell TBP-5002 konstantstrømspumpe med middels trykk, en modell TBP-2000 UV-detektor som opererer ved 254 nm, og en modell V4.0 arbeidsstasjon (Jinda Biochemistry Instrument Company, Shanghai, Kina).

Høyytelses væskekromatografi (HPLC) utstyret som ble brukt var et Agilent 1200 system som består av en G1312A binær pumpe, en G1329A autosampler, en G1314A variabel bølgelengde detektor (VWD), et G1316A termostatert kolonnerom, en G1379 og en G1379 degasser. arbeidsstasjon. En Alltech 3300 ELSD ble brukt for påvisning av renhetene. Agilent 6520 Q-TOF og Bruker AVANCE III 500-NMR-spektrometre ble brukt til strukturell identifikasjon av forbindelser. 1H- og 13C-NMR-spektra (ved henholdsvis 500 og 125 MHz) ble målt ved romtemperatur (22 grader /295,1 K).

Reagenser og materialer

Etylacetat, n-butanol og etanol var analytiske kvaliteter og metanol var HPLC-kvalitet. Alle løsningsmidlene ble kjøpt fra Tianjin Concord Technology Company (Tianjin, Kina). Milli-Q vann (18,2 MΩ) (Millipore, Bedford, MA, USA) ble brukt til alle løsninger og fortynninger. Jordstengelen til C. deserticola ble samlet inn fra Indre Mongolia-provinsen, Folkerepublikken Kina, i juni 2009. Planten ble identifisert av Prof. Lijuan Zhang, og en kupongprøve (nr. 20091001) ble deponert i vårt laboratorium.

Klargjøring av råprøve

Pulveriserte lufttørkede kjøttfulle stilker av C. deserticola (1 kg) ble refluksert to ganger med vandig etanol (8 L, 60 prosent v/v) i 2 timer hver gang. Ekstraktet ble inndampet under redusert trykk og ved en temperatur på 60 grader inntil total fordampning av etanolen. Resten ble suspendert i vann og ekstrahert suksessivt tre ganger med kloroform, etylacetat og n-butanol, hvilket ga 5,16 g n-butansyreekstrakt etter inndamping til tørrhet under redusert trykk. N-butanekstraktet ble deretter separert på en silikagelkolonne (200–300 mesh) ved bruk av progressiv gradienteluering (CHCl3–MeOH, 10:1→1:1) for å gi åtte fraksjoner. Fraksjon 6 (297 mg) ble brukt for ytterligere HSCCC-isolering og separasjon.

Valg av tofaseløsningsmiddelsystemer

To-fase løsningsmiddelsystemene ble valgt i henhold til fordelingskoeffisienten (K) til målkomponentene i fraksjonen av C. deserticola. K-verdiene ble bestemt ved LC-analyse som følger: Egnet mengde råekstraktpulver (fraksjon 6) ble oppløst i den nedre fasen av løsningsmiddelsystemet og analysert ved HPLC. Områdene til toppene ble registrert som A1. Deretter ble et likt volum av den øvre fasen tilsatt til løsningen og blandet grundig for å oppnå fordelingslikevekt. Den nedre fasen ble deretter analysert ved HPLC igjen. De sistnevnte toppområdene ble registrert som A2. K-verdiene ble beregnet etter følgende ligning: K=(A1 − A2)/A2 [15,16].

Klargjøring av to-fase-løsningsmiddelsystem og prøveløsning

I denne studien ble det tofasede løsningsmiddelsystemet sammensatt av etylacetat-n-butanol-etanol-vann (40:6:6:50, v/v/v/v) brukt for HSCCC-separasjon. Hvert løsningsmiddel ble tilsatt til en skilletrakt og ekvilibrert grundig ved romtemperatur. Den øvre fasen og den nedre fasen ble separert og avgasset ved sonikering i 30 minutter kort før bruk. Prøveløsningen ble fremstilt ved å oppløse 297 mg av fraksjon 6 i 15 ml av den nedre fasen av etylacetat-n-butanol-etanol-vann (40:6:6:50, v/v/v/v).

HSCCC-separasjonsprosedyre

HSCCC ble utført som følger. Den flerlags kveilte kolonnen ble først fylt med den øvre organiske stasjonære fasen. Den nedre vandige mobile fasen ble deretter pumpet inn i hodeenden av kolonnen med en strømningshastighet på 1,5 ml/min, og samtidig ble HSCCC-apparatet kjørt med en omdreiningshastighet på 900 rpm. Etter at hydrodynamisk likevekt var etablert, som indikert av en klar mobil fase som eluerte ved haleutløpet (omtrent to timer senere), ble en 15 ml prøveløsning inneholdende 297 mg av råekstraktet (fraksjon 6) injisert gjennom injeksjonsventilen. Avløpet fra kolonnen ble kontinuerlig overvåket under 254 nm. Fire toppfraksjoner ble samlet i henhold til kromatogrammet og deretter inndampet under redusert trykk. Temperaturen på apparatet ble satt til 25 grader.

HPLC-analyse og identifisering av HSCCC-toppfraksjoner

Toppfraksjonene fra HSCCC ble analysert ved HPLC-ELSD. Kolonnen som ble brukt var en Accurasil C18 (250 mm × 4,6 mm, id 5 μm), den mobile fasen var metanol-vann (30:70, v/v). Strømningshastigheten var 1 ml/min. ELSD ble operert under følgende forhold: Temperatur 45 grader, gass 1,6 l/min. Strukturell identifikasjon av de fire HSCCC-toppfraksjonene ble utført ved HR-ESI-MS, 1H og 13C-NMR-spektroskopi.

Den strukturelle identifikasjon

Fraksjon I: HR-ESI-MS observert ved m/z 623,2001 (M-H)-, beregnet for C29H35O15, 623,1981. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1,09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 av rhamnose), 2,79 (2H, t, J=7,5 Hz, Ar-CH 2-), 4,37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 av glukose), 5,18 (1H, d, J=1 Hz, H{{34} } av rhamnose), 6,27 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 7,59 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar -CH=CH-), 6,5–7,1 (6H, aromatisk H).13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131,5 (C-1), 117,2 (C{{65} }), 146,2 (C-3), 144,7 (C-4), 116,4 (C-5), 121,3 (C-6), 72,4 (C-), 36,6 (C- ), 127,7 (Caf-1), 115,3 (Caf-2), 146,9 (Caf-3), 149,8 (Caf-4), 116,6 (Caf{{ 98}}), 123,2 (Caf-6), 168,3 (Caf- ), 114,8 (Caf- ), 148,1 (Caf- ), 104,3 (G-1), 76,1 (Glc{{116} }), 81,7 (Glc-3), 70,5 (Glc-4), 76,3 (Glc-5), 62,4 (Glc-6), 103,1 (Rha{{131} }), 72,3 (Rha-2), 72,1 (Rha-3), 73,9 (Rha-4), 70,7 (Rha-5), 18,5 (Rha{{146} }). Sammenlignet med dataene gitt i litteraturen [17], tilsvarte fraksjon I akteosid.

Fraksjon II: HR-ESI-MS observert ved m/z 623,1987 (M-H)-, beregnet for C29H35O15, 623,1981. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1,25 (3H, d, J=6,5 Hz, CH3 av rhamnose), 2,78 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,33 (1H, d, J=8 Hz, H-1 av glukose), 5,17 (1H, d, J {{ 33}} Hz, H-1 av rhamnose), 6,28 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 7,56 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 6,5–7,0 (6H, aromatisk H). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131,5 (C-1), 117,2 (C-2), 146,2 (C-3), 144,7 (C-4 ), 116,5 (C-5), 121,3 (C-6), 72,4 (C-), 36,7 (C-), 127,8 (Caf-1), 115,2 (Caf{{89) }}), 146,8 (Caf-3), 149,7 (Caf-4), 116,6 (Caf-5), 123,2 (Caf-6), 169,2 (Caf- ), 115,0 (Caf- ), 147,3 (Caf- ), 104,5 (G-1), 75,5 (Glc-2), 84,2 (Glc-3), 70,1 (Glc-4 ), 75,7 (Glc-5), 64,7 (Glc-6), 102,8 (Rha-1), 72,4 (Rha-2), 72,4 (Rha-3 ), 74,1 (Rha-4), 70,5 (Rha-5), 17,9 (Rha-6). 1H-NMR og 13C-NMR spektraldata var i samsvar med de for isoacteosid som rapportert i litteraturen [18].

Fraksjon III: HR-ESI-MS observert ved m/z 6{{108}}7,2032 (M−H)−, beregnet for C29H35O14, 607,2032. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1,09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 av rhamnose), 2,84 (2H, t, J=7,5 Hz, Ar-CH 2-), 4,37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 av glukose), 5,19 (1H, d, J=1,5 Hz, H{{ 35}} av rhamnose), 6,27 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 7,59 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6,6–7,1 (7H, aromatisk H). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 130,8 (C-1), 116,2 (C-2), 130,9 (C-3), 156,8 (C-4 ), 130,8 (C-5), 116,2 (C-6), 72,4 (C-), 36,4 (C-), 127,8 (Caf-1), 114,8 (Caf{{88) }}), 149,8 (Caf-3), 146,9 (Caf-4), 116,6 (Caf-5), 123,2 (Caf-6), 168,3 (Caf- ), 115,4 (Caf-), 148,0 (Caf-), 104,3 (G-1), 76,3 (Glc-2), 81,7 (Glc-3), 70,4 (Glc-4 ), 76,1 (Glc-5), 62,5 (Glc-6), 103,0 (Rha-1), 72,3 (Rha-2), 72,2 (Rha-3 ), 73,9 (Rha-4), 70,7 (Rha-5), 18,4 (Rha-6). I følge litteraturen [18] tilsvarte fraksjon III syringalid A 3'- -L-rhamnopyranosid.

Fraksjon IV: HR-ESI-MS observert ved m/z 665,21{{20}} (M−H)−, beregnet for C31H37O16, 665,2087. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) 5 ppm: 1,09 (3H, d, J=6,5 Hz, CH3 av rhamnose), 2,00 (3H, s, OAc), 2,72 (2H, t, J { {25}},5 Hz, Ar-CH2-), 4,55 (1H, d, J=8 Hz, H-1 av glukose), 4,90 (1H, d, J { {37}} Hz, H-1 av rhamnose), 6,29 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 7,62 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 6,5–7,0 (6H, aromatisk H). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131,9 (C-1), 117,3 (C-2), 146,1 (C-3), 144,7 (C-4 ), 116,4(C-5), 121,4 (C-6), 72,7 (C-), 36,4 (C-), 127,7 (Caf-1), 115,4 (Caf{{93) }}), 146,9 (Caf-3), 149,9 (Caf-4), 116,6 (Caf-5), 123,2 (Caf-6), 168,1 (Caf- ), 114,7 (Caf-), 148,2 (Caf-), 101,8 (G-1), 75,3 (Glc-2), 80,3 (Glc-3), 70,8 (Glc-4 ), 76,2 (Glc-5), 62,3 (Glc-6), 103,3 (Rha-1), 72,0 (Rha-2), 71,8 (Rha-3 ), 73,7 (Rha-4), 70,8 (Rha-5), 18,5 (Rha-6), 171,5 (C=O), 20,9 (OAC). 1H-NMR- og 13C-NMR-spektraldataene var i samsvar med de for 2'-acetylakteosid [17].

Konklusjoner

En HSCCC-metode for preparativ separasjon og rensing av akteosid, isoakteosid, syringalid A 3'- -L-rhamnopyranosid og 2'-acetylakteosid fraCistanches deserticola YC Mavar etablert. Denne studien indikerer at HSCCC er en veldig kraftig teknikk for preparativ separasjon og rensing av bioaktive komponenter fra plantematerialer. Forbindelsene kan også isoleres i tilstrekkelig stor skala med høy renhet og kan deretter brukes som referansesubstanser for kromatografi eller bioaktivitetsstudier. Metoden er en gjennomførbar, økonomisk og effektiv teknikk for rask preparativ isolering av kompliserte naturprodukter.

Anerkjennelser

Dette arbeidet ble støttet av Program for Changjiang Scholars and Innovative Research Team in University (PCSIRT), Project of International Cooperation Plan fra Ministry of Science and Technology of China (2008DFB30070), og Scientific Program of Left Banner of Alashan ({{2 }}).

Referanser

1. Kinesisk farmakopékommisjon. Farmakopéen til Folkerepublikken Kina; People's Medical Publishing House: Beijing, Kina, 2010; Bind 1, s. 126.

2. Jiang, Y.; Tu, PF Analyse av kjemiske bestanddeler i Cistanche-arter. J. Chromatogr. 2009, 1216, 1970–1979.

3. Morikawa, T.; Pan, Y.; Ninomiya, K.; Imura, K.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M.; Yuan, D.; Muraoka, O. Acylerte fenyletanoide aminoglykosider med hepatobeskyttende aktivitet fra ørkenplanten Cistanche tubulosa. Bioorg. Med. Chem. 2010, 18, 1882–1890.

4. Chen, H.; Jing, FC; Li, CL; Tu, PF; Zhang, QS; Wang, ZH Echinacoside forhindrer de striatale ekstracellulære nivåene av monoaminnevrotransmittere fra å reduseres hos 6-hydroksydopaminlesjonsrotter. J. Ethnopharmacol. 2007, 114, 285–289.

5. Muraoka, O.; Ninomiya, K.; Morikawa, T.; Wakayama, H.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Leverbeskyttende bestanddeler fra stilkene til Cistanche tubulosa. Yakugaku Zasshi 2007, 127, 49–51.

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, OH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro nevrobeskyttende aktiviteter av fenyletanoidglykosider fra Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778–780.

7. Li, M.; Liu, RM; Sun, AL; Wu, SJ; Liu, NN Separasjon og rensing av Rutin og Acaciin fra den kinesiske medisinske urten Herba Cirsii ved kombinasjon av makroporøs adsorpsjonsharpiks og høyhastighets motstrømskromatografi. J. Chromatogr. Sci. 2009, 47, 329–332.

8. Yin, H.; Zhang, S.; Luo, XM; Liu, YH Preparativ isolering og rensing av to benzoxazinoid glukosider fra Acanthus ilicifolius L. ved høyhastighets motstrømskromatografi. J. Chromatogr. 2008, 1205, 177–181.

9. Peng, AH; Li, R.; Hu, J.; Chen, LJ; Zhao, X.; Luo, HD; Ja, HEI; Yuan, Y.; Wei, YQ Strømningshastighetsgradient høyhastighets motstrømskromatografiseparasjon av fem diterpenoider fra Triperygium wilfordii og oppskalering. J. Chromatogr. 2008, 1200, 129–135.

10. Xie, J.; Deng, J.; Tan, F.; Su, J. Separasjon og rensing av echinacoside fra Penstemon barbatus (Can.) Roth ved resirkulering av høyhastighets motstrømskromatografi. J. Chromatogr. B2010, 878, 2665–2668.

11. Li, L.; Tsao, R.; Yang, R.; Liu, C.; Young, JC; Zhu, H. Isolering og rensing av fenyletanoidglykosider fraCistanche deserticolaved høyhastighets motstrømskromatografi. Food Chem. 2008, 108, 702–710.

12. Li, L.; Tsao, R.; Liu, ZQ; Liu, SY; Yang, R.; Young, JC; Zhu, HH; Deng, ZY; Xie, MIN; Fu, ZH Isolering og rensing av akteosid og isoakteosid fra Plantago psyllium L. ved høyhastighets motstrømskromatografi. J. Chromatogr. 2005, 1063, 161–169. Molecules 2012, 17 8284

13. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Ito, Y. Preparativ isolering og rensing av acteosid og 2'-acetylacteosid fra Cistanches salsa (CA Mey.) G. Beck ved høyhastighets motstrømskromatografi. J. Chromatogr. 2001, 912, 181–185.

14. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Chen, FK; Ito, Y. Preparativ isolering og rensing av fenyletanoidglykosider fra ekstraktet av avføring fra beaglehunder ved høyhastighets motstrømskromatografi. J. Liq. Chromatogr. Relat. Teknol. 2001, 24, 2187–2195.

15. Gao, SY; Feng, B.; Zhu, RN; Ma, JK; Wang, W. Preparativ isolering av tre antrakinoner fra Rumex japonicus ved høyhastighets motstrømskromatografi. Molecules 2011, 16, 1201–1210.

16. Han, F.; Bai, YH; Wang, J.; Wei, J.; Yu, CY; Li, S.; Yang, WL; Han, CH Isolering og rensing av Oridonin fra hele planten av Isodon rubescens ved høyhastighets motstrømskromatografi. Molecules 2011, 16, 7949–7957.

17. Kobayashi, H.; Oguchi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Ueno, A.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Nye fenyletanoidglykosider fra cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. f. I. Chem. Pharm. Okse. 1987, 35, 3309–3314.

18. Yoshizawa, F.; Deyama, T.; Takizawa, N.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Bestanddelene av cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. f. II. Isolering og strukturer av et nytt fenyletanoidglykosid og et nytt neolignanglykosid. Chem. Pharm. Okse. 1990, 38, 1927–1930.