Nye glykosider fra Cistanche Salsa

Ta kontakt med:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Li Lei^a, Yong Jiang^aet al

Seks nyeglykosider, salsasidene A – F (1–6, hhv.), ble isolert fra stilkene tilCistanche salsa, sammen med syv kjente glykosidforbindelser. Deres strukturer ble belyst ved hjelp av esterhydrolyse og kjemisk derivatisering, dyptgående NMR-spektroskopiske og massespektrometriske analyser, og ved sammenligning med litteraturdata for relaterte forbindelser. Den nyeglykosiderer basert på bD-glukose (Glc) og aL-rhamnose (Rha), som bærer acetyl (Ac), benzyl (Bn), fenetyl, kumaroyl (Cou) og caffeoyl (Caf) substituenter.

Cistanche salsa har mange effekter

Introduksjon

– Cistanche salsa(CA MEY.) G. BECK, en av artene til HerbaCistanche, er en kort parasittisk Orobanchaceae-plante hjemmehørende i Nordvest-Kina. Som et viktig styrkende middel i tradisjonell kinesisk medisin (TCM), har stilkene til Herba Cistanche lenge vært brukt av kinesere og japanere mot nyresvikt, kvinnelig infertilitet, sykelig leukoré, neurasteni og senil forstoppelse på grunn av treghet i tykktarmen, etc. [1 ]. Akkurat som i andre Cistanche-anlegg, fenetylbasertglykosiderer de viktigste aktive bestanddelene i C. salsa. Disse forbindelsene ble rapportert å ha nevrobeskyttende aktivitet mot 1-metyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridin (MPTP)-indusert dopaminerg toksisitet i C57-mus [{{ 8}}]. Det er bare noen få fytokjemiske studier angående C. salsa, de første går tilbake til ca. 20 år [5-8]. I 1995, Moriya et al. [9] [10] rapporterte at plantematerialet avCistanche salsahadde blitt identifisert feilaktig da han undersøkte kildene til HerbaCistanchefra et japansk medisinsk marked [9] [10]. Derfor er det nødvendig å undersøke de kjemiske komponentene i C. salsa på nytt.

I det nåværende arbeidet medCistanche salsa, rapporterer vi isolasjon og strukturbelysning av seks nyeglykosider, salsa-sidene AF (1-6), med forskjellige substituenter, inkludert acetyl (Ac), benzyl (Bn), caffeoyl (Caf) og coumaroyl (Cou)-rester. Også isolert fra det samme ekstraktet var følgende syv kjenteglykosider:tubulosid B [11], acteosid [6], isoacteosid [11], 2'-acetylacteosid [7], echinacosid [6], cistanosid C [7] og cistanosid D [7].

Resultater og diskusjon

– Forbindelse 1 ble isolert som et amorft pulver, og dens molekylformel ble utledet som C28H34O13 av HR-ESI-MS (m/z 596.2348)([M pluss NH4] pluss; beregnet 596,2343). 1H-NMR-dataene til 1 (tabell 1) viste karakteristiske signaler for en (E)-konfigurert caffeoyl (Caf)-gruppe, med ABX-type aromatiske signaler ved d(H) 7.07 (br. s), 6,76 (br. d, J=8.5 Hz), og 7.03 (d, J=8,5 Hz), to olefiniske H-atomer ved d (H) 7,51 (d, J=16.0) og 6,34 (d, J=16,0 Hz), og en Bn-del med fem aromatiske resonanser og to ikke-ekvivalente H-atomer ved d(H) 4,59, 4,77 (2d, J=12},0 Hz hver), noe som antydet at 1 var en Bn-substituert forbindelse [12].

Total syrehydrolyse av 1 ga rhamnose (Rha) og glukose (Glc). NMR-dataene til 1 var lik de for tubulosid B [11], bortsett fra at signalene til en 3,4-dihydroksyfenyletanolenhet ble erstattet med signalene til en Bn-gruppe. I HMBC-spekteret av 1, korrelasjoner mellom de to ikke-ekvivalente H-atomene ved d(H) 4,59, 4,77 (a-CH2 av aglykon) og d(C) 101,7 (C(1') av Glc), av begge d(H) ) 4,40 (br. d, J=11,5 Hz, 1 H av CH2(6')) og 4,23 (m, 1 H av CH2(6')) med d(C) 166,6 (C( a') av ester), og av d(H) 5,04 (br. s, HC(1'')) og d(C) 80,8 (C(3')) etablerte koblingene mellom aglykonet, esteren og sukkeret deler.

Cistanche salsa

På grunnlag av ovennevnte spektroskopiske bevis, i kombinasjon med 2D-NMR-data, ble strukturen til 1 belyst som benzyl 6-O-[(E)-3-(3,4-dihydroksy fenyl)-prop-2-enoyl]-3-OaL-rhamnopyranosyl-bD-glucopyranoside1), og kalt salsaside A.

Forbindelse 2 ble isolert som et amorft pulver, og dens molekylformel ble bestemt som C28H34O13 ved HR-ESI-MS (m/z 596.2345 ([M pluss NH4] pluss )). Den eneste forskjellen mellom 1 og 2 var at Caf-delen ble festet i 4'-posisjon i 2 i stedet for i 6'-posisjon. Dette var tydelig i HMBC-spekteret til 2, der signalet ved d(H) 4,96 (t, J=9.0 Hz, HC(4')) var korrelert med d(C) 167,3 ( C=O av Caf), og ytterligere bekreftet ved sammenligning med NMR-dataene for 2'-acetylakteosid [4]. Således ble forbindelse 2 identifisert som benzyl 4-O-[(E)-3-(3,4-dihydroksyfenyl)prop-2-enoyl]-3-Oa-Lrhamnopyranosyl -bD-glukopyranosid, og kalt salsaside B.

Salsaside C(3) ble isolert som et amorft pulver, og dets molekylformel ble belyst som C28H34O12 av HR-ESI-MS (m/z 561.1958 ([MH]; beregnet.561.1972)). NMR-dataene til 3 var lik de til 2, bortsett fra at signalene til Caf-gruppen ble erstattet med signalene til en (E/Z)-kumaroyl-(Cou)-del (se tabell 1). Tilstedeværelsen av en (E/Z)-blandingen som indikert ved delte (2,38: 1) NMR-resonanser så vel som ved toppdobling i HPLC-kromatogrammet, et fenomen rapportert tidligere i noe fenetylglykosider[13] [14]. I HMBC-spekteret av 3, korrelasjoner mellom de to ikke-ekvivalente aglykon a-CH2-resonansene ved d(H)4,62, 4,87 (2d, J{{10}},5 Hz hver) og d(C) 103,2 ( C(1')), mellom d(H) 4,75/4,71 (t, J=7,5 Hz, HC(4')) og d(C) 168,3/166,0 (C=0 av Cou), og mellom d(H) 5,02 (br. s, HC(1'')) og d(C) 80,8 (C(3')) etablerte koblingene mellom aglykonet, esteren og sukkerdelene . Således ble strukturen til forbindelse 3 belyst som benzyl 4-O-[(E/Z)-3-(4-hydroksyfenyl)prop-2-enoyl]-3- OaL-rhamnopyranosyl-b-Dglucopyranoside, og kalt salsaside C.

Salsaside D (4) ble oppnådd som et amorft pulver, og dets molekylformel ble bestemt som C31H38O15 ved HR-ESI-MS (m/z 668.2563 ([M pluss NH4] pluss; beregnet 668.2554). 1H-NMR-spekteret av 4 (tabell 2) viste signaler som er karakteristiske for en (E)-Caf-gruppe og for en (4-hydroksyfenyl)etoksygruppe [d(H) 2,65 (m, 2 H), 3,55 (m, 1 H), 3,9 0 (m, 1 H), 6,64 (d, J=8.0 Hz, 2 H), 6,97 (d, J=8.{{58} } Hz, 2 H)] Total syrehydrolyse av 4 ga Rha og Glc. Fragmentionetoppen observert i det negative FAB-massespekteret ved m/z 43, og NMR-signalene ved d(H) 1,95 (s, 3 H) ), og ved d(C) 169,3 og 20,7, indikerte tilstedeværelsen av en Ac gruppe. 15]. I HMBC-spekteret av 4 var signalet ved d(H) 4,68 (t, J=9,0 Hz, HC(2')) korrelert med d(C) 169,3 (C{{62} }O av Ac), som indikerte at Ac-delen var koblet til C(2) av Glc. Dermed ble strukturen e av forbindelse 4 ble belyst som 2-(4-hydroksyfenyl)etyl 2-O-acetyl-4-O-[(E)-3-(3,{{ 73}}dihydroksyfenyl)prop-2-enoyl]-3-Oa-rhamnopyranosyl-bD-glukopyranosid, og kalt salsaside D.

Innhold avCistanche salsa

Forbindelse 5 ble isolert som et amorft pulver, og dens molekylformel ble bestemt som C32H40016 ved HR-ESI-MS (m/z 679.2228 ([MH]; beregnet 679.2238). 1H- og 13C- NMR-data for 5 (tabell 2) var svært like de for 4, bortsett fra signalene til fenetyldelen. I 1H-NMR-spekteret på 5 var det et AMX-system [d(H) 6,63 (d, J{ {22}}.0 Hz, 1 H), 6,69 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 6,77 (br. s, 1 H)] og en MeO-signal ved d(H) 3,85 (s, 3 H). I HMBC-spekteret var MeO-signalet korrelert med d(C) 148,7 (C(3)), som igjen korrelerte med d(H) 6,69 ( d, J=8.0 Hz, HC(5)) og 6.77 (br. s, HC(2)). Derfor var MeO-substituenten ved C(3) av fenetyldelen, som bekreftet ved sammenligning med litteraturdata [7]. Derfor ble strukturen til forbindelse 5 belyst som 2-(4-hydroksy-3-metoksyfenyl)etyl2-O-acetyl-4- O-[(E)-3-(3,4-dihydroksyfenyl)prop-2-enoyl]-3-OaL-rhamnopyranosyl-bD-glukopyranosid, og kalt salsaside E.

Forbindelse 6 ble isolert som et amorft pulver, og dens molekylformel ble bestemt som C31H38O15 ved HR-ESI-MS (m/z 668.2543 ([M pluss NH4] pluss; beregnet 668.2554)). 1H-NMR-spekteret på 6 viste signaler karakteristiske for en (E)-Cou-gruppe [d(H)6,35 og 7,46 (2d, J{{20}}.0 Hz hver, 1 H hver), 6,69 (d, J=7,5 Hz, 2 H), 7,45 (d, J{{30}},5 Hz, 2 H)], av en (3,4-dihydroksyfenyl) etoksydel [d(H) 6,31 (br. d, J=8.0 Hz, 1 H), 6.46 (br. s, 1 H), 6.49 (br. d, J=8. 0 Hz, 1 H), 2,49 (m,CH2), 3,41 og 3,72 (2m, 1H hver)], og av to anomere resonanser [d(H) 4,45 (d, J=8,5 Hz, HC (1')), 4,55 (be.s, HC(1''))]. Som i 4 og 5, var det også en AcO-gruppe tilstede i 6 [d(H) 1,88 (s, 3 H); d(C) 169,2, 20,6], som var ved C(2') av Glc-delen, bestemt ved HMBC-eksperimenter. I HMBC-spekteret ble det observert korrelasjoner mellom signalene til CH2(6') og d(C) 166,6 (C=O av Cou), mellom d(H) 3,41, 3,72 (2m, a-CH2 av aglykon) ), og d(C) 99,5 (C(1')), og mellom d(H) 4,55 (br. s, HC(1'')) og d(C) 68,8 (C(3')), fra som alle koblinger ble etablert. Således ble strukturen til forbindelse 6 avgjort som 2-(3,4-dihydroksyfenyl)etyl 2-O-acetyl-6-O-[(E){{105} }(4-hydroksyfenyl)prop-2-enoyl]-3-OaL-rhamnopyranosyl-bD-glukopyranosid, og kalt salsaside F.

I forbindelsene 1–6 ble konfigurasjonen ved det anomere sentrum av Glc-resten utledet til å være b fra J-verdier på 7,5 – 8,5 Hz. Når det gjelder Rha-restene, ble den anomere konfigurasjonen utledet ved sammenligning av de relevante 13C-NMR-dataene med de gitt i litteraturen [6]. De absolutte konfigurasjonene av sukkerene, DGlc og L-Rha, ble bestemt ved GC-analyse av chirale derivater (se eksperimentdel) sammenlignet med standard monosakkarider [16].

Denne studien ble økonomisk støttet av National Natural Science Funds of China (nr. 30070887). Vi takker Dr. Haiming Shi for hjelp under forberedelse av manuskript.

Cistanche salsaProdukter

Eksperimentell del

Generell. Silikagel (200–300 mesh; Qing Dao Hai Yang Chemical Group, Co.), Sephadex LH-20(Pharmacia), D101-harpiks (Tianjin Chemical, Co.) og ODS (100 – 200 mesh; Fuji Sylisia Chemical, Ltd.) ble brukt til kolonnekromatografi (CC). Prep. HPLC ble utført på et Waters-600-instrument ved bruk av en RP-C18-kolonne (10 M 250 mm id; Alltech) ved en strømningshastighet på 2,5 ml/min (UV-deteksjon ved 330 nm). GC-analyse ble utført på en Agilent-6890N gasskromatograf, ved bruk av en HP-5 kapillærkolonne (28 m M 0,32 mm id), en FID-detektor ved 260 grader og en kolonnetemp. på 180 grader, med en N2-bæregass og strømningshastighet på 40 ml/min. UV-spektra ble registrert på et Shimadzu-spektrometer; λmax (log e) i nm. Optiske rotasjoner ble bestemt på et Perkin-Elmer 243B digitalt polarimeter. IR-spektra ble registrert på et Nicolet Avatar-360 FT-IR-spektrometer; i cm-1. NMR-spektra ble registrert i CD3OD eller (D6)DMSO på et Bruker AM-500-spektrometer; d i ppm rel. til Me4Si, J i Hz. FAB- og HR-ESI massespektre ble registrert på KYKY-ZHP-5 og Bruker APEX massespektrometre, hhv.

Plantemateriale. Stilkene tilCistanche salsable samlet inn fra Yanchi, den autonome regionen Ningxia Hui, Kina, i april. Planten ble identifisert av prof. Peng-Fei Tu, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University. Et kupongprøve ble deponert ved Herbarium ved Peking University Modern Research Centre for Traditional Chinese Medicine.

Ekstraksjon og isolasjon. De tørkede stilkene avCistanche salsa(8,0 kg) ble ekstrahert med 75 prosent aq. EtOH (80l) ved romtemperatur ved perkolering. Løsningsmidlet ble fjernet, resten ble suspendert i H2O (4 l) og ekstrahert med petroleumseter (PE; 12 l), AcOEt (12 l) og BuOH (12 l) for å gi, etter fjerning av løsemiddel, 1{{ 27}}0 g PE-, 99 g AcOEt- og 1{{60}}0 g BuOH-løselig ekstrakt, hhv. En del av det AcOEt-løselige ekstraktet (90 g) ble underkastet CC (Si02; CHCl3/MeOH 0:1→1:2) for å gi 75 fraksjoner (Fr.). Fr. 51 – 53 (6,0 g) ble kombinert (=Fr. A) og omkromatografert (Sephadex LH-20; MeOH/H2O 1:1) for å gi elleve underfraksjoner (Fr. A1 –A11). Fr. A6 og Fr. A7 ble kombinert (2,5 g; Fr. B) og gjenutsatt for CC (ODS; MeOH/H2O 1: 9 – 5: 5) for å gi 35 ytterligere fraksjoner (Fr. B1 – B35). Fr. B16 – B25 ble kombinert (0,5 g; Fr. C) og kromatografert på nytt (Sephadex LH-20; deretter utarbeidet HPLC, MeCN/MeOH/H2O 10 : 18 : 75) for å gi tubulosid B [11] (55 mg ). Fr. B26 – B32 (0,35 g) ble kombinert (0,35 g, Fr. D) og omkromatografert (Sephadex LH-20; 20 prosent vandig MeOH) for å gi syv fraksjoner (Fr. D1 –D7). Fr. Dl (70 mg) ble renset ved prep. HPLC (MeCN/MeOH/H2O 10 : 26 : 72) for å gi 2 (23 mg), 3 (8 mg) og cistanosid C [7] (12 mg). Fr. D3 (45 mg) ble renset ved prep. HPLC (MeCN/MeOH/H2O 10 : 20 : 70) for å gi 6 (22 mg). Fr. D4 (36 mg) ble renset ved prep. HPLC (MeCN/MeOH/H2O 9 : 18 : 73) for å gi 5 (20 mg). Fr.D5 (55 mg) ble renset ved prep. HPLC (MeCN/MeOH/H20 10 : 24 : 66) for å gi 1 (28 mg). Fr. D7 (40 mg) ble renset ved prep. HPLC (MeCN/MeOH/H20 10 : 16 : 74) for å gi 4 (18 mg). Den originale Fr.54 og Fr. 55 ble kombinert og renset ved gjentatt CC (Sephadex LH-20) for å gi akteosid [6] (0,1 g) og 2'-acetylakteosid (8,9 mg) [10]. Fr. 56 – 58 ble kombinert og renset ved gjentatt CC (Sephadex LH-20 og ODS) for å gi isoacteosid (25 mg) [11] og cistanosid D (32 mg) [7]. Fr. 59 – 64 ble kombinert og renset ved gjentatt CC (Sephadex LH-20) og prep. HPLC (MeCN/MeOH/H2O 10 : 15 : 84) for å gi echinakosid (33 mg) [6].

SalsasideA(=Benzyl6-O-[(E)-3-(3,4-dihydroksyfenyl)prop-2-enoyl]-3-OaL-rhamnopyranosylb -D-glukopyranosid; 1). Amorft pulver. UV (MeOH): 328 (3,50). [a]20D=35.6 (c=0.1, MeOH).IR (KBr): 3421, 1690, 1628, 1605, 1520. 1H- og 13C-NMR: se tabell 1. FAB-MS: 577 ([MH]-). HRESI-MS: 596,2348 ([M pluss NH4] pluss, C28H38NO pluss 13; beregnet 596,2343).

SalsasideB(=Benzyl4-O-[(E)-3-(3,4-dihydroksyfenyl)prop-2-enoyl]-3-OaL-rhamnopyranosylb -D-glukopyranosid; 2). Amorft pulver. UV (MeOH): 332 (3,20). [a] 20D=35.6 (c=0.1, MeOH).IR (KBr): 3411, 1692, 1630, 1600, 1514. 1H- og 13C-NMR: se tabell 1. HR-ESI-MS: 596,2345 ([M pluss NH4] pluss, C28H38NO pluss 13; beregnet 596,2343).

SalsasideC(=4-O-[(E/Z)-3-(4-Hydroksyfenyl)prop-2-enoyl]-3-OaL-rhamnopyranosyl-bD-glukopyranosid; 3 ). Amorft pulver. UV (MeOH): 315 (3,23), 225 (1,80). IR (KBr): 3432, 1689, 1628, 1609, 1519. 1H- og 13C-NMR: se tabell 1. HR-ESI-MS: 561,1958 (([MH]-), C28H33O-12; beregnet. 561.1972).

SalsasideD(=2-(4-Hydroksyfenyl)etyl2-O-acetyl-4-O-[(E)-3-(3,4-dihydroksyfenyl) prop-2-enoyl]-3-OaL-rhamnopyranosyl-bD-glukopyranosid;4). Amorft pulver. UV (MeOH): 328 (3,40). [a]20D=58.3 (c=0.1, MeOH). IR (KBr): 3397, 1720, 1692, 1630, 1596, 1512. 1H- og 13C-NMR: se tabell 2. FAB-MS: 649 ([MH]-), 443 ([MH-Ac-Caf] -). HR-ESI-MS: 668,2563 ([M pluss NH4] pluss, C31H42NOþ 15; beregnet 668,2554).

SalsasideE(=2-(4-Hydroksy-3-metoksyfenyl)etyl2-O-acetyl-4-O-[(E)-3-(3,{ {9}}dihydroksyfenyl)-prop-2-enoyl]-3-OaL-rhamnopyranosyl-bD-glukopyranosid;5). Amorft pulver. UV (MeOH): 330 (3,21). [a]20D=33.3 (c=0.1, MeOH). IR (KBr): 3370, 1721, 1690, 1630, 1600, 1514. 1H- og 13CNMR: se tabell 2. FAB-MS: 679 ([MH]-), 533 [MH-Rha]-). HR-ESI-MS: 679,2228 ([MH]-, C32H39O-16; beregnet 679,2238).

SalsasideF(=2-(3,4-dihydroksyfenyl)etyl2-O-acetyl-6-O-[(E)-3-(4-hydroksyfenyl) prop-2-enoyl]-3-OaL-rhamnopyranosyl-bD-glukopyranosid; 6). Amorft pulver. UV (MeOH): 315 (3,28). [a]20D=38.5 (c=0.1, MeOH). IR (KBr): 3416, 1725, 1690, 1630, 1600, 1510. 1H- og 13C-NMR: se tabell 2. FAB-MS: 649 ([MH]-). HR-ESI-MS: 668,2543 ([M pluss NH4] pluss, C31H42NO pluss 15; beregnet 668,2554).

Syrehydrolyse og bestemmelse av absolutt sukkerkonfigurasjon. Forbindelsen (3 mg) ble plassert i et forseglet rør og hydrolysert med 2N aq. CF3COOH (5 ml) ved oppvarming på vannbad i 3 timer [16]. Etter avkjøling ble blandingen fortynnet med H2O (15 ml) og ekstrahert med CHCl2 (3 M 5 ml). Den aq. sjiktet ble gjentatte ganger inndampet til tørrhet med MeOH inntil nøytralt. Sukkerene ble identifisert ved co-TLC med autentiske prøver, eluert med BuOH/AcOH/H2O 4 : 2: 1, og påvist ved spraying med anisaldehyd/H2SO4, etterfulgt av oppvarming. Rf-verdiene for glukose (Glc) og rhamnose (Rha) var 0.54 og 0.69, hhv.

Magen. sukkerkonfigurasjoner ble bestemt som følger. Til en soln. av sukkerresten i pyridin (60 ml), oppnådd fra hydrolysen, ble tilsatt L-cystein-metylesterhydroklorid og heksametyldisilazan/Me3SiCl 3:1. Blandingen ble omrørt ved 608°C i 30 minutter. Det resulterende bunnfallet ble fjernet ved sentrifugering, og supernatanten ble konsentrert og fordelt mellom heksan og H2O. org. laget ble deretter analysert ved GC. Ved sammenligning med standard monosakkarider ble D-Glc (tR 12,45 min) og L-Rha (5,32 min) identifisert for 1–6.

Cistanche salsaekstrakt

Fra: 'NyGlykosiderfraCistanche salsa' av Li Lei^a, Yong Jiang^aet al ---2007 Verlag Helvetica Chimica Acta AG, ZIrich

--- Helvetica Chimica Acta – Vol. 90 (2007)

REFERANSER

[1] Pharmacopoeia Editing Committee, 'Chinese Pharmacopoeia', Chemical Industry Publisher, Beijing, 2000, Vol. 1, s. 103.

[2] XC. Geng, LW. Sang, XP. Pu, PF. Tu, Biol. Pharm. Okse. 2004, 27, 797.

[3] XP. Pu, ZH. Sang, YY. Li, PF. Tu, HN. Li, Planta Med. 2003, 69, 65.

[4] GQ. Sheng, XP. Pu, L. Lei, PF. Tu, CL. Li, Planta Med. 2002, 68, 966.

[5] H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase, S. Fukushima, Chem. Pharm. Okse. 1984, 32, 1729.

[6] H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase, S. Fukushima, Chem. Pharm. Okse. 1984, 32, 3009.

[7] H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase, S. Fukushima, Chem. Pharm. Okse. 1984, 32, 3880.

[8] H. Karasawa, H. Kobayashi, N. Takizawa, T. Miyase, S. Fukushima, Yakugaku Zasshi 1986, 106, 721.

[9] A. Moriya, PF. Tu, D. Karasawa, H. Arima, T. Deyama, K. Kegasawa, Nat. Med. 1995, 49, 383.

[10] A. Moriya, PF. Tu, D. Karasawa, H. Arima, T. Deyama, K. Hayashi, Nat. Med. 1995, 49, 394.

[11] H. Kobayashi, H. Oguchi, N. Takizawa, T. Miyase, A. Ueno, K. Usmanghani, M. Ahmad, Chem.

Pharm. Okse. 1987, 35, 3309.

[12] N.-D. Tommasi, L. Rastrelli, J. Cumanda, G. Speranza, C. Pizza, Phytochemistry 1996, 42, 163.

[13] T. Miyase, R. Yamamoto, A. Ueno, Phytochemistry 1996, 43, 475.

[14] ZJ. Jia, JJ. Gao, ZM. Liu, Indian J. Chem., Sect. B 1994, 33, 460.

[15] F. Yoshizawa, T. Deyama, N. Takizawa, Chem. Pharm. Okse. 1990, 38, 1927.

[16] M. Haddad, T. Miyamoto, V. Laurens, M.-A. Lacaille-Dubois, J. Nat. Prod. 2003, 66, 372.