Askorbinsyre regulerer immunitet, antioksidasjon og apoptose i Abalone Haliotis Discus Hannai Ino del 2

3.5. Uttrykk av immunrelaterte gener og proteiner i abalone fordøyelseskjertel og gjelle

Glykosid av cistanche kan også øke aktiviteten til SOD i hjerte- og levervev, og redusere innholdet av lipofuscin og MDA i hvert vev betydelig, effektivt rense ulike reaktive oksygenradikaler (OH-, H₂O₂, etc.) og beskytte mot DNA-skader forårsaket av OH-radikaler. Cistanche-fenyletanoidglykosider har en sterk renseevne for frie radikaler, en høyere reduserende evne enn vitamin C, forbedrer aktiviteten til SOD i sædsuspensjon, reduserer innholdet av MDA og har en viss beskyttende effekt på sædmembranfunksjonen. Cistanche-polysakkarider kan øke aktiviteten til SOD og GSH-Px i erytrocytter og lungevev hos eksperimentelt senescent mus forårsaket av D-galaktose, samt redusere innholdet av MDA og kollagen i lunge og plasma, og øke innholdet av elastin, har en god rensende effekt på DPPH, forlenger hypoksitiden hos eldre mus, forbedrer aktiviteten til SOD i serum og forsinker den fysiologiske degenerasjonen av lunge hos eksperimentelt eldre mus. Med cellulær morfologisk degenerasjon har eksperimenter vist at Cistanche har den gode antioksidantevnen og har potensial til å være et medikament for å forebygge og behandle aldringssykdommer. Samtidig har echinacoside i Cistanche en betydelig evne til å rense DPPH-frie radikaler og har evnen til å rense reaktive oksygenarter og forhindre frie radikal-indusert kollagen-nedbrytning, og har også en god reparasjonseffekt på anionskader av tymin frie radikaler.

Klikk på Cistanche Reddit for anti-aldring

【For mer informasjon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

mRNA-nivåene til de pivotale genene i den toll-lignende reseptoren (TLR) signalveien i fordøyelseskjertelen til abalone er vist i tabell 6 og 7. Ekspresjonsnivåene av tlr2 og tlr4 i fordøyelseskjertelen ble signifikant redusert (p < { {5}}.05) og hadde sine laveste nivåer på AA1000 og AA500{{43 }} grupper, henholdsvis (tabell 6). mRNA-nivået til-a ble signifikant oppregulert (p < 0.05), og-b ble ikke påvirket av graderte nivåer av diett-AA (p > 0.05 ). Ekspresjonene av myd88, trip-relatert adaptermolekyl (trikk), interleukin 1-reseptorassosiert kinase 4 (irak4) og tumornekrosefaktor-reseptorassosiert faktor 6 (traf6) ble signifikant redusert etter dietttilskudd av AA (p < 0,05). Traf4 ble ikke påvirket av nivået av AA-tilskudd (p > 0,05). mRNA-nivåene av iκb kinase (ikk ) og nf-κb inhibitor (iκb ) i fordøyelseskjertelen til abalone ble ikke påvirket av diett AA (p > 0,05) (tabell 7). Imidlertid ble uttrykket av p38 mitogenaktivert proteinkinase (p38-merke) og søppel signifikant nedregulert med økende diett-AA (p < 0,05). Kosttilskudd AA kunne signifikant redusere ekspresjonsnivåene av nf-κb, aktivatorprotein 1 (ap-1) og tumornekrosefaktor (tnf- ) (p < 0,05), og interleukin 16 (il 16) nivået var ikke underlagt diett-AA (p > 0,05). Proteinuttrykk av MyD88, JNK, moden IL-1 og nukleær NF-kB p65 er vist i figur 2. Proteinnivåene til MyD88, moden IL-1 og nukleær NF-kB p65 i fordøyelsessystemet kjertel av abalone ble signifikant nedregulert av diett AA (p < 0,05). I motsetning til dette ble proteinnivået til JNK ikke påvirket av AA (p > 0,05).

mRNA-nivåene av tlr2, tlr4 og the-b i gjellen til abalone var ikke signifikant forskjellige (p > 0.05), og tar-a-nivået ble signifikant redusert etter graderte nivåer av diett-AA (p < 0.05) (tabell 8). Videre ble ekspresjonsnivåene av myd88, irak4 og traf6 i gjellen til abalone signifikant nedregulert med det økende nivået av diett-AA (p < 0.{{20}}5). I stedet ble det ikke observert noen signifikante forskjeller i uttrykkene for trikk og traf4 (p > {{30}}.05). Kostholds-AA nedregulerte signifikant mRNA-nivået til ikk (p < 0,05), og uttrykkene for iκb, p38 mark og junk i gjellen ble ikke påvirket av AA (p > 0,05) (tabell 9). En enveis ANOVA avslørte at ekspresjonsnivåene av nf-κb, ap-1 og tnf- ble signifikant redusert av diett-AA (p < 0,05), og ingen signifikant forskjell i il 16-nivåer ble observert (p > 0,05). Proteinnivåene til MyD88 og nukleær NF-κB p65 ble signifikant nedregulert av graderte nivåer av diett-AA (p < 0,05) (Figur 3). Proteinuttrykkene til JNK og moden IL-1 i gjellen til abalone ble imidlertid ikke påvirket av diett-AA (p > 0,05).

Uttrykk for -defensin, myteskaping 6 og arginase-I i fordøyelseskjertelen og gjellen til abalone er gitt i tabell 10. Nivåene av -defensin og arginase-I i fordøyelseskjertelen ble betydelig økt etter diett-AA (p < 0.05), mens uttrykket for myteskaping 6 ikke ble påvirket av diett-AA (p > 0,05). Derimot var mRNA-nivåene av -defensin og arginase-I i gjellen ikke signifikant forskjellige, og uttrykket for myteskaping 6 ble signifikant oppregulert av diett-AA (p < 0,05).

3.6. Uttrykk av immunrelaterte gener i fordøyelseskjertelen som respons på Vibrio Parahaemolyticus

Ekspresjonsnivåene til flere kritiske gener i TLR-signalveien, som inneholder tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 og tnf- i fordøyelseskjertelen til abalone etter V. parahaemolyticus-infeksjon er presentert i figur 4 mRNA-uttrykkene til tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 og tnf- ble signifikant oppregulert etter administrering av V. parahaemolyticus (p < 0.05). Foldeendringen av tlr4 var høyest i AA0-gruppen (10.24-fold) 24 timer etter infeksjon, og deretter falt det høyeste nivået til 3.{{ 20}}fold inn AA5000-gruppen etter 6 timer. mRNA-nivået til myd88 ble signifikant oppregulert etter 12–72 timer i AA0-gruppen (6.86- ganger) og ved 6–12 timer i AA5000-gruppen (3.88- ganger) etter V. parahaemolyticus infeksjon. Ekspresjonen av trikk i fordøyelseskjertelen til abalone etter V. parahaemolyticus-infeksjon ble signifikant økt fra 12 timer til 72 timer i AA0-gruppen og fra 12 timer til 24 timer i AA5000-gruppen. Foldeendringen av nf-κb nådde sitt høyeste nivå etter 48 timer i AA0-gruppen (10.55-fold), etterfulgt av en nedgang i det høyeste nivået ved 12 timer i AA5000-gruppen (3.{{48 }}Fold endring). Ekspresjonsnivået til ap-1 ble signifikant oppregulert fra 6 timer til 72 timer i AA0- og AA50-gruppen før det kom seg tilbake til normalt nivå 72 timer etter kontinuerlig AA-tilskudd. Foldeendringen av TNF- nådde sitt høydepunkt 24 timer etter V parahaemolyticus-infeksjon i AA0-, AA50-, AA100-, AA200- og AA500-gruppene, og hadde sitt høyeste nivå etter 12 timer i AA1000- og AA5000-gruppene.

Resultatene av nivåene av -defensin og mythmaking 6 i fordøyelseskjertelen etter V. parahaemolyticus-infeksjon er vist i figur 5. Ekspresjonsnivåene av -defensin og mythmaking 6 i fordøyelseskjertelen til abalone ble betydelig økt etter V. parahaemolyticus-infeksjon ( p < 0.05). mRNA-nivået av -defensin ble betydelig økt i AA0-, AA50-, AA100- og AA200-gruppene etter 12 timer og 24 timer, og nådde toppen etter 12 timer i AA200-, AA500-, AA1000- og AA5000-grupper med 4 .51-fold, henholdsvis 4.74-fold, 5.20-fold og 5.47-fold. Foldeendringen av myteskaping 6 i fordøyelseskjertelen til abalone ble betydelig oppregulert fra 12 timer til 24 timer i AA0-, AA50-, AA100-, AA200- og AA500-gruppene, og fra 6 timer til 72 timer i AA1000- og AA5000-gruppene. Det høyeste uttrykksnivået for myteskaping 6 ble observert etter 12 timer i AA5000-gruppen med 5.82- ganger.

3.7. Uttrykk av antioksidasjonsrelaterte og apoptoserelaterte gener og proteiner i fordøyelseskjertel og gjelle

mRNA-nivåene av nf-e2-relatert faktor-2 (nrf2), gpx, cat og cuznsod i fordøyelseskjertelen til abalone var signifikant forhøyet med graderte nivåer av diett-AA (p < {{4 }}.05) (Tabell 11). Derimot ble mRNA- og proteinnivåene til Keap1 betydelig redusert etter diett-AA (p < 0.05), og glutation-s-transferase (GST) ble ikke påvirket av AA (figur 6, Tabell 11) (p > 0.05). I gjellen ble mRNA-nivåene av nrf2 og gpx signifikant økt av diett-AA (p < 0,05) (tabell 11). Imidlertid var uttrykkene keap1, katt, GST og cuznsod i gjellen ikke underlagt graderte nivåer av diett-AA (p > 0,05). Ingen signifikant effekt av diett-AA på proteinekspresjonen av Keap1 i gjellen til abalone ble observert (p > 0,05) (Figur 6).

Det som skiller seg ut i tabell 12 er at ekspresjonsnivåene av Bax og caspase3 i fordøyelseskjertelen til abalone ble signifikant redusert etter graderte nivåer av diett-AA (p < 0.05). I mellomtiden ble mRNA-nivået til bcl-2 betydelig oppregulert (p < 0.05). Uttrykket av caspase7 ble imidlertid ikke påvirket av diett-AA (p > 0.{{20}}5). Det spaltede caspase3-proteinet i fordøyelseskjertelen ble betydelig redusert etter tilskudd av AA (p < 0,05) (Figur 6). I gjellen ble mRNA-nivåene av caspase7 og bcl-2 henholdsvis signifikant redusert og økt etter diett-AA (p < 0,05) (tabell 12). Likevel var ikke uttrykkene til Bax og caspase3 signifikant forskjellige blant alle behandlingene (p > 0,05). I tillegg ble ikke proteinekspresjonen av spaltet-caspase3 i gjellen til abalone påvirket av graderte nivåer av diett-AA (p > 0,05) (Figur 6).

4. Diskusjon

4.1. Askorbinsyreinnhold i forskjellige vev

I denne studien økte AA-innholdet i muskel, gjelle og fordøyelseskjertel med økende AA-nivåer i kosten. Et lignende resultat ble også funnet i Vundu (Heterobranchus loggfiler), japansk ål og Chus croaker (Nibea-farge) [27,56,57]. AA-innholdet var høyest i gjellen, etterfulgt av fordøyelseskjertelen til abalonen. Imidlertid nådde ikke AA-innholdet i gjellen, fordøyelseskjertelen og muskelen til abalone sin metning etter 4821,17 mg/kg av diett-AA. Hos den kinesiske sugeren (Myxocyprinus asiaticus) ble AA-innholdet i leveren betydelig økt av diett-AA [58]. Det økte AA-innholdet i leveren til den kinesiske sugeren etter diett-AA var korrelert med leverhelsen. Hos gresskarpe var AA-innholdet i hodenyre, milt og hud signifikant forhøyet med økende AA-tilskudd [35]. Hodet nyre, milt og hud er de viktige immunorganene hos vannlevende dyr [59–61]. Disse resultatene viser at det økte AA-innholdet i fordøyelseskjertelen og gjellen til abalone var nært relatert til helsen til abalone etter diett-AA, og at AA-akkumulering gjenspeiler nivåene av diett-AA-eksponering.

4.2. Rollen til askorbinsyre i reguleringen av immuniteten til abalone

Hemocytter, som allsidige cellulære komponenter av hemolymfe i bløtdyr, er ansvarlige for mange aspekter av bløtdyrlivet, som immunrespons, biomineralisering, celle-cellekommunikasjon og regenerering [62,63]. Derfor kan THC, RB og PA av hemolymfe direkte reflektere immuniteten til organismen. AA var nært assosiert med THC, RB og PA av hemocytter, noe som resulterte i aktivering av det adaptive immunsystemet [64,65].

I denne studien ble THC, RB og PA i hemolymfen til abalone betydelig økt av diett-AA. Det er indikert at graderte nivåer av diett-AA lyktes med å styrke immunfunksjonen hos abalone. Lignende resultater ble observert i Nilen tilapia og gressreker (Penaeus monodon) [64,66]. RB i serumet til rød sumpkreps (Procambarus clarkii) og PA i serumet til hybrid sorubim steinbit (Pseudoplatystoma reticulatum × P. corpuscles) ble signifikant redusert etter et høyt nivå av kosttilskudd av AA (321,38 mg/kg og 850 mg/ kg, henholdsvis) [67,68]. Imidlertid ble det ikke observert noen signifikant nedgang i THC, RB og PA i hemolymfen til abalone i behandlingen med høye nivåer av kosttilskudd av AA (4821,17 mg/kg).

Lysozym, C3 og C4 spiller sentrale roller i medfødt immunitet og beskytter dyr mot patologisk infeksjon [69–71]. I denne studien ble LZM i CFH av abalone betydelig økt etter graderte nivåer av diett-AA. Dette var lik resultatene fra tidligere studier i cobia (Rachycentron canadum), koreansk steinbit (Sebastes schlegelii) og havabbor (Epinephelus malabaricus) [29,72,73]. AA-mangel reduserte innholdet av C3 og C4 i gresskarpe, og diett-AA kunne betydelig forbedre immunparametre som C3 og C4 i largemouth bass [35,74]. I denne studien ble C4-innholdet i CFH av abalone imidlertid ikke påvirket av diett-AA-nivåer. Det var en økende trend med C3-innhold i CFH av abalone, selv om C3-innholdet ikke ble signifikant forbedret av diett-AA. Disse resultatene viste at kosttilskudd av AA kunne forbedre evnen til å eliminere infeksjon av patogener med LZM og C3, ikke C4, for å forbedre immunbarrierene til abalone.

Medfødt immunitet er avgjørende for abalone på grunn av fraværet av adaptiv immunitet hos virvelløse dyr [43,49]. TLR-er spiller viktige roller i det medfødte immunsystemet mot ulike mikrober [75]. PAMP-aktiverte TLR-er rekrutterer spesifikke adaptermolekyler for å aktivere transkripsjonsfaktorer, slik som NF-KB og AP-1, som bestemmer utfallet av den medfødte immunresponsen [76]. TLR-signalering er klassifisert i to distinkte veier: MyD88--avhengig og MyD88-uavhengig, som induserer ulike cytokiner som TNF- og IL-1 hos pattedyr og andre vannlevende dyr [77,78 ]. I den MyD88-avhengige banen samhandler MyD88 med IRAK4 og samhandler deretter med TRAF6 [79]. TRAF6 kan aktivere TGF- -aktivert kinase 1 (TAK1) og TAK1-bindende proteiner (TABs) [80]. TAK1 aktiverer IKK-komplekset, som kan fosforylere IκB som binder seg til NF-κB-underenheter (bestående av p50 og p65) og fosforylerer MAPKs og JNK, som fremmer translokasjonen av AP-1 inn i kjernen [81]. Ødeleggelsen av IκB letter nukleær translokasjon av NF-κB [82]. De nukleære NF-KB og AP-1 retter seg mot transkripsjonen av cytokiner, slik som TNF- og IL-1, som er godt anerkjent som pro-inflammatoriske mediatorer som fremmet betennelse [76,77,83] . I den MyD88-uavhengige banen er TRAM påkrevd og har en sentral rolle i denne banen [84]. De intracellulære komponentene nedstrøms for TLR-signalveien er ofte og svært konserverte mellom virveldyr og virvelløse dyr [60,85]. Det intrahepatiske uttrykket av TLR4 ble nedregulert i AA-administrerte mus (Mus musculus) [86]. AA utøvde gunstig hepatobeskyttelse mot concanavalin A-indusert immunologisk leverskade hos mus ved hemming av NF-KB-signalveien [87,88]. Dermed kan det utledes fra disse resultatene at AA kan påvirke TLR-signalveien. Imidlertid er det fortsatt ukjent hvordan AA regulerer TLR-signalveien hos vannlevende dyr, spesielt i bløtdyr.

I denne studien ble mRNA-nivåene av tlr2 og tlr4 i fordøyelseskjertelen betydelig nedregulert av graderte nivåer av diett-AA. Det antydes at TLR-signalveien ble utløst av AA i fordøyelseskjertelen til abalone (figur 7). Termene-a og tlr-b hadde bredere mønstergjenkjenningskapasitet og var involvert i den antibakterielle og antivirale immuniteten til abalone [89]; den underliggende mekanismen til-a/b er imidlertid fortsatt ukjent. Nivået av tlr-b ble imidlertid ikke påvirket av diett-AA, og tlr-a ble signifikant oppregulert av AA i denne studien. Ytterligere undersøkelser er nødvendig. Uttrykkene av myd88, irak4 og traf6, og proteinuttrykket av MyD88, i fordøyelseskjertelen til abalone ble nedregulert ved tilskudd av AA, og nivået av traf4 ble ikke påvirket av diett-AA. TRAF4 fungerer som en lyddemper i TLR-mediert signalering ved å undertrykke TRAF6 [90]. Det er indikert at hemmingen av TLR-veien av diett-AA ikke ble mediert gjennom traf4 i fordøyelseskjertelen til abalone. mRNA-nivået av iκb i fordøyelseskjertelen ble ikke påvirket av AA. Imidlertid kan NF-KB overføres til kjernen først etter IκB fosfatnedbrytning [91]. mRNA-uttrykkene av nf-kb og proteinuttrykk av kjernefysisk NF-kB p65 i fordøyelseskjertelen ble betydelig nedregulert av diett-AA. Disse resultatene antydet at AA kan undertrykke fosforyleringen av IκB-protein for å redusere den nukleære NF-KB. IKK kan aktivere NF-KB p65 for å utløse den kanoniske NF-KB-veien, og IKK kan aktivere NF-κB p52 for å utløse den ikke-kanoniske NF-KB-veien [92]. Det er indikert at diett-AA kan aktivere den kanoniske NF-KB-veien i fordøyelseskjertelen til abalone. Videre ble mRNA-uttrykkene til trikken, p38 mark, junk, ap-1 og tnf- og proteinnivået til moden IL-1 signifikant redusert av diett-AA. Disse resultatene tyder på at diett-AA kan hemme TLR-signalveien gjennom den Myd88-avhengige banen via NF-κB, p38 mark/ap-1 og JNK/ap-1 og Myd{{ 43}}uavhengige veier for å lindre betennelse i fordøyelseskjertelen til abalone. I gjellen påvirket AA også TLR-signalveien (Figur 7). Imidlertid var mRNA-nivåene til trikken, p38-merket og søppel- og proteinekspresjonen av modent IL-1 ikke signifikant forskjellige. Disse resultatene indikerte at diett-AA kunne undertrykke TLR-signalveien gjennom den Myd88-avhengige banen, ikke den MyD88-uavhengige. Den hemme TLR-banen lindret betennelse i gjellen til abalone via NF-κB og p38 mark/ap-1-banen, ikke JNK/ap-1-banen. Kosttilskudd AA hadde en sterkere effekt på TLR-banen i fordøyelseskjertelen enn i gjellen til abalone.

【For mer informasjon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】