Velge og karakterisere tyrosinasehemmere fra Atractylodis Macrocephalae Rhizoma basert på spektrum-aktivitetsforhold og molekylær docking

Copyright © 2021 Yong-Qin Liu et al. 2is er en åpen artikkel distribuert under Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i et hvilket som helst medium, forutsatt at originalverket er korrekt sitert.

Cistanchehar som funksjon å fremme kollagenproduksjonen, som kan øke elastisiteten og glansen i huden og bidra til å reparere skadede hudceller.CistancheFenyletanol Glykosider har en betydelig nedregulerende effekt på tyrosinaseaktivitet, og effekten på tyrosinase er vist å være konkurransedyktig og reversibel hemming, noe som kan gi et vitenskapelig grunnlag for å utvikle og utnytte blekeingrediensene i Cistanche. Derfor har cistanche en nøkkelrolle i hudbleking. Det kanhemme melaninproduksjonenfor å redusere misfarging og matthet; og fremme kollagenproduksjonen for å forbedre hudens elastisitet og glød. På grunn av den utbredte anerkjennelsen av disse effektene av cistanche, har mange hudblekingsprodukter begynt å tilføre urteingredienser som Cistanche for å møte forbrukernes etterspørsel, og dermed øke den kommersielle verdien av Cistanche ibleking av hudenProdukter. Oppsummert, rollen til cistanche i hudbleking er avgjørende. Dens antioksidanteffekt og kollagenproduserende effekt kan redusere misfarging og matthet,forbedre hudens elastisitet og glans, og dermed oppnå en blekende effekt. Den brede anvendelsen av Cistanche i hudblekingsprodukter viser også at dens rolle i kommersiell verdi ikke kan undervurderes.

Klikk på Organic Cistanche for Whitening

Be om mer: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Atractylodis macrocephalus Rhizoma (AMR) er en kjent klassisk kinesisk tradisjonell medisin (CTM), som har blitt brukt som tonic for mange sykdommer i tusenvis av år. I det gamle Kina ble det brukt som tilleggsmat for skjønnheten i palasset. I foreløpige studier ble funksjonen av blekende hud og den betydelige hemmende effekten på tyrosinase (TYR) som er det reaktive enzymet i sammensetningen av melanin av AMR oppdaget, og relevant forskning ble sjelden rapportert. I denne studien ble høyytelses væskekromatografi (HPLC) sammen med partiell minste kvadraters regresjonsanalyse (PLS) brukt for å kartlegge sammenhengen mellom de kjemiske komponentene og den hemmende aktiviteten til 11 partier AMR på TYR-aktivitet. Resultatene av PLS viste at de kromatografiske toppene 11 (atractylenolide III) og 15 kan være viktige effektive ingredienser for inhibering av TYR-aktivitet som fastslått ved spektrum-aktivitetsforhold. Videre ble den TYR-hemmende aktiviteten til atractylenolide III validert ved in vitro-test av -arbutin tjent som et positivt kontrollmedikament.Deresultater fra in vitro-testen og den molekylære dokkingen viste at atractylenolide III har høy TYR-hemmende aktivitet og kan knyttes til restene i TYR-katalytisk lomme.DeDerfor er bioassay, molekylær docking og spektrum-aktivitetsforhold hensiktsmessig for å koble kvaliteten på prøver med farmasøytisk-relaterte aktive ingredienser. Og studiene våre ville legge et teoretisk grunnlag for å bruke vannekstraktene av AMR i blekekosmetikk.

1. Introduksjon

Tyrosinase (TYR), også nominert som polyfenoloksidase, er et polyfunksjonelt glykosylert kobberholdig enzym som finnes i organismen til dyr, planter og mikroorganismer bredt [1–3]. I nærvær av molekylært oksygen blir tyrosin først katalysert av TYR for å oksidere til dopa, og deretter oksideres videre til dopakinon, som isomerisert for å danne dopa-pigment. Dopa-pigment dannet til slutt melanin med deltagelse av CO2 og TRP-2, som forårsaker ulike hudsykdommer som hyperpigmentering, melasma, fregner og aldersflekker [4, 5]. TYR spiller en viktig rolle fordi det er det kritiske enzymet og restriksjonsenzymet i løpet av melaninsammensetningen [6–8]. Pigmentflekker og melanom økte markant ved å øke TYR-aktivitet og mengde [9]. I dag har TYR-hemmere fått bred oppmerksomhet på grunn av deres latente bruk som hypopigmenterte midler [10].

Atractylodis macrocephalus rhizoma (AMR), det tørre rhizomet til Atractylodes macrocephalaKoidz., er en av de kinesiske urtemedisinene samlet i Chinese Pharmacopoeia [11–15]. I det gamle Kina ble AMR valgt for å danne den berømte klassiske formelen for bleking kalt "Seven-White Ointment" og brukt som supplerende mat for skjønnhet i palasset [16]. Det ble rapportert at AMR hovedsakelig inneholdt sesquiterpenoider og triterpenoider (inkludert atractylenolideI, atractylenolide II og atractylenolide III), polyacetylener, kumariner og fenylpropanoider, flavonoider og flflavonoidglykosider, polysakkarider, benzoquinosteroider, [1] konstituenter, [1] andre konstituenter, [1]. Imidlertid ble dens effekter på blekende hud og aktive ingredienser sjelden rapportert.Destudie av spektrum-aktivitet-forholdet ble brukt for å utforske deres relevans.

Forskningen på forholdet mellom spektrum og aktivitet kan ikke bare omgå mangelen på segregering mellom kjemiske ingredienser og farmakodynamikk, men også assosiere fingeravtrykk med farmakodynamikk i tilstrekkelig grad ved hjelp av den matematiske modellen [19, 20].ThSpektrum-aktivitetsforholdet utforsker relevansen mellom fingeravtrykk og farmakodynamikk for å tilby en troverdig metode for å klargjøre den materielle basen til kinesisk urtemedisin [21].Defingeravtrykk ble etablert ved HPLC, UPLC, GC, GC MS og LC-MS vanligvis [19, 22–24]. "Farmakodynamikk"-data innhentes vanligvis av modellene [25].Demetoder for databehandling, inkluderer hovedsakelig hovedkomponentanalyse (PCA), partiell minste kvadraters (PLS) regresjonsanalyse, ortogonal partiell minste kvadraters-diskriminerende analyse (OPLS-DA), kanonisk korrelasjonsanalyse (CCA) og grå relasjonsanalyse (GRA) vanligvis [26–29].

For å klargjøre komponentene i AMR som bidrar til hemmingsaktiviteten til TYR [30, 31], ble fingeravtrykkene til 11 batcher av AMR etablert ved HPLC; farmakodynamikken til TYR-hemmingsaktiviteten in vitro ble evaluert ved den biokjemiske enzymatiske metoden. 2e effektive forbindelser ble valgt av spektrum-aktivitetsrelasjonsmodellen som ble etablert ved å korrelere fingeravtrykkstopper med farmakodynamiske data. Videre vil aktive stoffer bli validert ved in vitro-tester og molekylære docking-eksperimenter. 2is studie kan legge et teoretisk grunnlag for å bruke AMR som behandlingsmedisin for pigmenterte hudsykdommer og utvikle den som blekekosmetikk som supplement.

2. Materialer og metoder

2.1. Kjemikalier og materialer.Metanol (Større enn eller lik 99,5 prosent) ble kjøpt fra Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. (Shanghai, Kina). Fosforsyre (større enn eller lik 99 prosent) ble kjøpt fra Chengdu Jinshan Chemical Reagent Co., Ltd. (Chengdu, Kina). Acetonitril ble kjøpt fra Tiandi Reagent Co., Ltd. (USA). Atractylodes III (Større enn eller lik 98 prosent), fosfatbuffer, tyrosinase og L-tyrosin ble kjøpt fra Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. (Beijing, Kina). -Arbutin (større enn eller lik 99,7 prosent) ble kjøpt fra China Academy of food and drug identification. Tyrosinase og L-tyrosin ble oppløst i fosfatbuffer (pH 6,8) før bruk. Atractyloser III og -arbutin ble oppløst i 50 prosent metanol (v/v).Derent vann ble kjøpt fra Hangzhou Wahaha Baili Food Co., Ltd., (Hangzhou, Kina). Comix C18 kolonne (250 × 4,6 mm, 5 μm) ble kjøpt fra Guangzhou Philemon Scientific Instrument Co., Ltd. (Guangzhou, Kina).

2.2. Plantematerialer.De11 partier med AMR-medisinprøver ble samlet og er vist i tabell 1.Deprøvene ovenfor ble autentisert av professor Ronggui Qin (School of Pharmacy, Guizhou Medical University).

2.3. Utdrag.Urtebiter av hver prøve (ca. 10 g) ble veid nøyaktig og deretter plassert i en rundbunnet kolbe, tilsatt vann og refluks for å ekstrahere. Produktene ble tørket under redusert trykk for å oppnå vannekstraktet av AMR. 2en ble vannekstraktene av AMR (ca. 30,00 mg) veid nøyaktig og oppløst med 50 prosent metanol (v/v).

2.4. HPLC-analyse.Comix C18 revers-fase kromatografikolonne (250 × 4,6 mm, 5 μm).Demobil fase 0.1 prosent fosfor var en blanding av surt vann (A)-acetonitril (B); elueringssystemet er designet og er oppført i tabell 2.Defølgende hastighet ble fastsatt til 0,6 mL/min. 2e kolonnetemperatur var 30 grader.DeUA-bølgelengden var 210 nm.Deinjeksjonsvolumet var 30 μL.

Deteksjonsmetoden ble verifisert ved en presisjonstest, repeterbarhetstest og stabilitetstest.

2.5. Kjemometrisk analyse.I denne studien ble den vanlige toppinformasjonen for fingeravtrykk fra 11 partier AMR importert til programvare SIMCA14.1 for HCA, PCA og OPLS-DA.

2.6. TYR-hemmingstest in vitro. Deekstrakter av AMR ble løst opp med fosfat (pH 6,8) buffer, lagret ved 4 grader og deretter brukt for analysen av enzymet.

I denne studien ble L-tyrosin brukt som et substrat for å bestemme inhiberingen av TYR-aktivitet.Dereaksjonsløsninger ble fremstilt i henhold til tabell 3, og inhiberingshastigheten til AMR på TYR-aktivitet ble bestemt. Først ble reaksjonsløsningene satt i et 37 graders vannbad i 10 min. For det andre ble TYR-løsningen tilsatt til T2- og T4-reaksjonsløsninger umiddelbart. For det tredje reagerte reaksjonsløsningene ved 37 grader vannbad konstant temperatur i 10 minutter etter å ha blitt blandet fullstendig. Til slutt ble reaksjonsløsningene av absorbansverdiene umiddelbart målt ved 475 nm. Inhiberingsratene (prosent) ble oppnådd fra ligningen: inhiberingshastigheten (prosent) =[(AT2− AT1) − (AT4 − AT3)]/(AT2− AT1) × 100 prosent.

2.7. Spektrum-aktivitet relasjonsanalyse. Deprogramvare "Chinese traditional medicine chromatography fingerprint similarity evaluation system 2012 A Edition" ble brukt til å justere retensjonstidene for hver topp, og topparealet (PA) ble behandlet ved utjevning.Den, de kvantitative dataene ble innhentet.DePLS regresjonsligning ble satt opp med programvaren SIMCA14.1; topparealet ble tatt som den uavhengige variabelen (X), og TYR-hemmingshastigheten ble satt som den avhengige variabelen (Y).

2.8. Hemmende effekt av Atractylodes III på TYR og molekylær dokking.For å vitne om den hemmende effekten av Atractylenolide III på TYR, ble in vitro enzymatiske aktivitetstester utført av -arbutin som fungerte som et positivt kontrollmedikament.

AutoDock4.2-programmet ble brukt i dokkingsimuleringer. Krystallstrukturen til Agaricus bisporus (PDB ID: 2Y9X) ble tatt som 3D-strukturen til TYR [32]. Vi utførte simuleringer av dokkingen av TYR til Atractylodes III. Med det formål å dokke med AutoDock Vina, ble rutenettstørrelsen designet til (x, y, z) =(16, 12, 14), og rutenettsenteret ble designet til (x, y, z) { {10}} (−10,348, −28,279, −45,925). I hver simuleringsprosedyre opererer fremdriften med standardparametere fra AutoGrid og AutoDock. Lamarckian genetisk algoritme (LGA) ble tatt i bruk for å fastslå de mest passende ligandbindingsorienteringene.

3. Resultater og diskusjon

3.1. Metodikkvalidering.Presisjon, repeterbarhet og stabilitet ble validert for analysemetoden. I presisjonstesting oversteg ikke presisjonen av relative retensjonstider (RRT) og relative toppområder (RPA) {{0}}.02 prosent og 4 prosent i RSD, henholdsvis; likheten var 1. Repeterbarheten til RRT-er og RPA-er var mindre enn 0.11 prosent og 4 prosent i RSD, og ​​likheten var større enn eller lik 0.998. Stabiliteten ble estimert ved å teste én prøveløsning bevart ved laboratoriemiljøtemperatur etter 0, 6, 8, 12 og 18 timer. RSD-ene for RRT-er og RPA-er for de vanlige toppene var henholdsvis mindre enn 0,1 prosent og 4 prosent; likheten var mer enn 0,999.DeDisse resultatene antydet at AMR-eksperimentsystemet for fingeravtrykksanalyse er stødig og pålitelig.

3.2. HPLC-fingeravtrykketablering og likhetsanalyse.Fingeravtrykket til Atractylodes III-referansesubstanser er vist i figur 1(a). AMR-prøven viste gunstig segregering blant toppene (figur 1(b)). Under perfekte forhold ble HPLC-fingeravtrykkene til de 11 forskjellige partiene av AMR-prøver generert (Figur 1(c)), og likhetene ble beregnet. Resultatene av likheter er vist i tabell 4, som viste at alle likhetsverdiene til de 11 prøvene var større enn 0.8, noe som indikerer at alle prøvene var like i kjemiske sammensetninger. Seksten vanlige topper ble observert ved å sammenligne deres retensjonstid for UV-spekteret. Topp 11 ble identifisert som Atractylodes III av referansestoffer. RSD-ene for PA-er av 16 vanlige topper var mellom 1,18 prosent og 58,68 prosent (tabell 5). Disse resultatene indikerte at innholdet av de kjemiske stoffene i AMR fra ulike produksjonsområder var forskjellig.

3.3. Kjemometrisk analyse

3.3.1. HCA. HCA ble brukt for å identifisere AMR fra forskjellige produksjonsområder basert på forskjellige klynger og likheten til fingeravtrykk. Det vanlige topparealet i 11 partier av AMR ble brukt som en indikator, og klyngeanalysen ble utført av programvaren SIMCA14.1. Resultatene er vist i figur 2. Prøvene av 11 partier AMR ble delt inn i 3 kategorier når klasseavstandene varierte mellom 20 og 30, hvorav S4, S8, S9, S1 og S3 ble gruppert i kategoriene I og S7 var gruppert i kategori II, mens S2, S5, S10, S6 og S11 ble gruppert i kategori III.

3.3.2. PCA. I denne studien ble PCA for 11 batcher av AMR beregnet; i 16 hovedkomponenter var det kumulative bidraget av variansen til de fem første hovedkomponentene 91,3 prosent .Depoengmatrise for de to første komponentene vil bli brukt til analyse ettersom den kumulative variansen oversteg 65,9 prosent.DeI mangel av informasjon, konstruer derfor et todimensjonalt plan av hovedkomponenten at abscissen var en hovedkomponent og ordinaten var en annen hovedkomponent. Deretter ble de 11 prøvene projisert på 2D-planet slik at deres naturlige samling ble observert (Figur 3(a)). Det ble lagt til grunn at S4, S8, S9, S1 og S3 hadde åpenbare klassifiseringer, S7 kunne deles inn i en type, og S2, S5, S10, S6 og S11 kunne deles inn i en annen type.DeResultatet av PCA var i samsvar med HCA-resultatet.

Hver prikk i belastningsdiagrammet representerte en kromatografisk topp, som representerer bidraget til hver kromatografisk topp til den omfattende effekten avhovedkomponenter.Devektverdi av variablene kanreflekterer sammenhengen mellom den kjemiske sammensetningenog utvalget i størst grad.Delenger unnaopprinnelsen til lastdiagrammet, jo større er variabelenvekt.Deresultatet er vist i figur 3(b), som foresloat de kromatografiske toppene 9, 11 (atractylenolide III),og 12 hadde større innvirkning på den første hovedkomponenten. Imidlertid er de kromatografiske toppene 4, 5, 6, 15 og 16hadde større innvirkning på den andre hovedkomponenten. Denviste at de ovennevnte kromatografiske toppene kan ha enstørre innvirkning på klassifiseringen.

3.3.3. OPLS-DA.De11 prøver ble delt inn i to grupper som S1, S3, S4, S8 og S9 var den første gruppen og S2, S5, S6, S7, S10 og S11 var den andre gruppen.Defelles toppinformasjon for alle prøvene ble importert til SIMCA14.1-programvaren for OPLS-DA. R2 X og R2 Y karakteriserer forklaringsraten til modellen til x- og y-matriser, individuelt, og Q2 karakteriserer modellens prediksjonsevne.Deresultatene viste at verdiene til R2 X, R2 Y og Q2 var henholdsvis 0.939, 0.992 og 0.583, som alle var større enn {{ 9}}.5, noe som indikerer at modellen kunne skille de to gruppene av utvalg og hadde en bedre tilpasning og prediksjonsevne i databehandlingen. Den kan brukes til å skille AMR fra ulike produksjonsområder (Figur 4(a)).

Deprofil av variabler som er viktige for projeksjonen (VIP) i OPLS-DA-modellen kan reflektere bidraget fra hver kromatografisk topp til prøven.DeVIP-verdier av de 16 kromatografiske toppene reflekterte påvirkningskraften på hver AMR-prøve. Basert på utvalgsprinsippet om at VIP-verdien var mer enn 1.0 og feillinjen var mindre enn opprinnelsen (Figur 4(b)), ble de 4 viktige kromatografiske toppene valgt, som ble arrangert i rekkefølge: topp 1 > topp 6 > topp 16 > topp 5.

Deanalyseresultater av lastdiagrammet er vist i figur 4(c), som viste at posisjonene til de ovennevnte 4 viktige kromatografiske toppene var langt unna origo. Det ble antydet at de 4 kromatografiske toppene påvirket klassifiseringen av AMR betydelig, og disse komponentene representert av 4 kromatografiske topper kan være hovedmarkørkomponentene i hver prøve.

3.4. Vurdering av hemmende aktivitet av AMR på TYR in vitro.Dehemmende effekter av AMR fra forskjellige produserende områder på TYR-aktivitet ble bestemt ved den biokjemiske enzymmetoden.Deeffekter av prøver på TYR-aktivitet er oppført i tabell 6. Hver prøve med 10 mg/ml konsentrasjon kunne hemme TYR-aktivitet og farmakologisk aktivitet var bemerkelsesverdig forskjellig, blant hvilke inhiberingshastigheten til S5 var den høyeste, mens S6 var den laveste.

3.5. Spektrum-effekt relasjonsanalyse. I denne artikkelen ble PLS brukt for å analysere forholdet mellom spektrum og aktivitet.Departiell regresjonskoeffisient og VIP-verdi er vist i figur 5(a) og 5(b), som viste at kromatografiske topper 1, 2, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 15 og 16 var positivt korrelert med hemming av TYR-aktivitet, men de kromatografiske toppene 3, 4, 8, 12, 13 og 14 var negativt korrelert med dem. Blant de kromatografiske toppene som var positivt korrelert med hemming av TYR-aktivitet, var VIP-verdiene til kromatografiske topper 11 (Atractylodes III) og 15 større enn 1, noe som indikerte at disse to komponentene påvirker hemmingen av TYR-aktivitet betydelig.

3.6. Hemmende effekt av Atractylodes III på TYR og molekylær dokking.Deinhiberende effekt av Atractylodes III på TYR-aktivitet ble bestemt ved den biokjemiske enzymmetoden in vitro med -arbutin som en positiv kontroll.Deresultatene viste at inhiberingsratene av Atractylodes III og -arbutin på TYR-aktivitet var henholdsvis 63,68 ± 2,36 prosent og 94,85 ± 0,35 prosent, når prøvenes konsentrasjon var 1 mg/ml.

Molekylær dokking ble brukt til å studere bindingsmekanismen til Atractylodes III som interagerte med TYR (figur 6(a)–6(c)).Debindingssetet til sopptyrosinase er sammensatt av et smalt, grunt hulrom med to kobberioner (Cu2 pluss) hver stabilisert av tre histidinrester (f.eks. His 61) ved enzymets aktive senter. I denne studien er Atractylodes III en liten molekylforbindelse lokalisert i det aktive sentrum av enzymet og interagerer med de omkringliggende restene (His 244, Phe 264, Ala 286, His 263, Val 283, His259, His 85, Asn 260). Bemerkelsesverdig nok dannet Atractylodes III en stabil hydrogenbinding til Asn 260 med en bindingslengde på 1,9 ˚ A.

4. Konklusjoner

I denne studien ble det etablert en systematisk metode som kobler HPLC-fingeravtrykkene med kjeometrisk analyse for å skille AMR-prøver fra forskjellige opphav, og blekingseffekten av AMR ble bevist med den biokjemiske enzymmetoden. Spektrum-effekt-forhold indikerte at de kromatografiske toppene 1, 2, 5, 6, 9, 10, 11, 15 og 16 var positivt korrelert med AMR-hemmende effekt på TYR-aktivitet, blant hvilke topper 11 (atractylenolide III) og 15 kan være viktige aktive bestanddeler. I mellomtiden har atractylenolide III høy TYR-hemmende aktivitet in vitro-test, og resultatet av molekylær docking viste at mekanismen kan være relatert til bindingen av aminosyrerester i den katalytiske TYR-kapselen.DeDerfor viste disse resultatene at bioassay, molekylær docking og spektrum-aktivitetsforhold er passende for å koble kvaliteten på prøver med farmasøytisk-relaterte aktive ingredienser.

Datatilgjengelighet

Dataene som brukes for å støtte funnene i denne studien er tilgjengelig fra den tilsvarende forfatteren på forespørsel.

Formidling

Yong-Qin Liu og Chang-Yan Xu blir sett på som co-first forfattere.

Interessekonflikter

Forfatterne erklærer at de ikke har noen interessekonflikter i denne studien.

Forfatteres bidrag

Yong-Qin Liu og Chang-Yan Xu bidro til arbeidet.

Anerkjennelser

Denne studien ble sponset av opplæringsprogrammet for innovasjon og entreprenørskap for studenter i Guizhou-provinsen (nr. 20195200925).

Referanser

[1] Y.-L. Wang, G. Hu, Q. Zhang, et al., "Screening og karakterisering av tyrosinase-hemmere fra Salvia miltiorrhiza og Carthamus tinctorius ved spektrum-effekt forholdsanalyse og molekylær docking," Journal of Analytical Methods in Chemistry, vol. 2018, artikkel-ID 2141389, 10 sider, 2018.

[2] HX Cui, FF Duan, SS Jia, FR Cheng og K. Yuan, "Antioksidant- og tyrosinaseinhibitoriske aktiviteter av frøoljer fra Torreya grandis fort. ex Lindl," BioMed Research International, vol. 2018, artikkel-ID 5314320, 10 sider, 2018.

[3] Y. Tian, ​​Z. Zhang, N. Gao, P. Huang og FY Wu, "En merkefri luminescerende analyse for tyrosinaseaktivitetsovervåking og inhibitorscreening med responsive lantanidkoordinasjonspolymer-nanopartikler," Spectrochimica Acta del A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, vol. 228, 2020.

[4] H. Liu, B. Liu, P. Huang, Y. Wu, FY Wu og L. Ma, "Colorimetrisk bestemmelse av tyrosinase basert på in situ sølvmetallisering katalysert av gullnanopartikler," MikroChim Acta, vol. 187, nr. 10, s. 551, 2020.

[5] DC Franco, GS de Carvalho, PR Rocha, R. da Silva Teixeira, AD da Silva og NR Raposo, "Hemmende effekter av resveratrolanaloger på sopptyrosinaseaktivitet," Molecules (Basel, Sveits), vol. 17, nei. 10, s. 11816–11825, 2012.

[6] HH Kim, JK Kim, J. Kim, S.-H. Jung og K. Lee, "Karakterisering av caffeoylquinic syrer fra episoder thunbergianus og deres melanogenese-hemmende aktivitet," ACS Omega, vol. 5, nei. 48, s. 30946–30955, 2020.

[7] F. Pintus, D. Span'o, A. Corona og R. Medda, "Anti tyrosinase activity of Euphorbia characiasextracts," PeerJ, vol. 3, s. e1305, 2015.

[8] M. Shi, Y. Zhang, M. Song, Y. Sun, C. Li og W. Kang, "Screening av markørkomponentene i Psoralea corylifolia L. ved hjelp av spektrum-effektforhold og komponentbank- ut av UPLC-MS(2)," International Journal of Molecular Sciences, vol. 19, nei. 11, 2018.

[9] G.-H. Wang, C.-Y. Chen, T.-H. Tsai et al., "Evaluering av tyrosinaseinhiberende og antioksidantaktiviteter til Angelica dahurica rotekstrakter for fire forskjellige probiotiske bakteriefermenteringer," Journal of Bioscience and Bioengineering, vol. 123, nr. 6, s. 679–684, 2017.

[10] YS Lin, HJ Chen, JP Huang et al., "Kinetics of tyrosinase inhibitory activity using Vitis vinifera leaf extracts," BioMed Research International, vol. 2017, artikkel-ID 5232680, 5 sider, 2017.

[11] S. Yang, J. Zhang, Y. Yan, et al., "Nettverksfarmakologibasert strategi for å undersøke de farmakologiske mekanismene til Atractylodes macrocephala Koidz. for behandling av kronisk gastritt," Frontiers in Pharmacology, vol. 10, s. 1629, 2019.

[12] H.-R. Yang, J. Yuan, L.-H. Liu, W. Zhang, F. Chen og C.-C. Dai, "Endophytic Pseudomonas fluorescerende indusert sesquiterpenoid-akkumulering mediert av gibberellinsyre og jasmonsyre i Atractylodes macrocephala Koidz-planter," Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), vol. 138, nr. 3, s. 445–457, 2019.

[13] L. Hu, X. Chen, J. Yang og L. Guo, "Geografisk autentisering av den tradisjonelle kinesiske medisinen Atractylodes macrocephala Koidz. (Baizhu) ved bruk av stabile isotop- og multielementanalyser," Rapid Communications in Mass Spectrometry, vol. . 33, nei. 22, s. 1703–1710, 2019.

[14] H. Li og G. Yang, "Det komplette kloroplastgenomet til Atractylodes macrocephala Koidz. (Asteraceae)," Mitokondriell DNA del B, vol. 5, nei. 3, s. 2060-2061, 2020.

[15] S. Gu, L. Li, H. Huang, B. Wang og T. Zhang, "Antitumor, antiviral og anti-inflammatorisk effekt av essensielle oljer fra Atractylodes macrocephala Koidz," Produsert med forskjellige prosesseringsmetoder, molekyler , vol. 24, nei. 16, 2019.

[16] J. Wang, L. Peng, M. Shi, C. Li, Y. Zhang og W. Kang, "Spektrumeffektforhold og komponent knock-out i Angelica dahurica radix ved høyytelses væskekromatografi-Q executive hybrid quadrupole-orbitrap massespektrometer," Molecules, vol. 22, nei. 7, 2017.

[17] B. Zhu, Q.-L. Zhang, J.-W. Hua, W.-L. Cheng og L.-P. Qin, "Detradisjonelle bruksområder, fytokjemi og farmakologi av Atractylodes macrocephala Koidz.: a review," Journal of Ethnopharmacology, vol. 226, s. 143–167, 2018.

[18] Y.-Y. Feng, H.-Y. Ji, X.-D. Dong og A.-J. Liu, "Et alkoholløselig polysakkarid fra Atractylodes macrocephala Koidz induserer apoptose av Eca-109-celler," Carbohydrate Polymers, vol. 226, artikkel-ID 115136, 2019.

[19] W. Li, Y. Zhang, S. Shi, et al., "Spektrum-effekt-forhold mellom antioksidant- og tyrosinaseaktivitet med Malus pumila-tilhengere ved UPLC-MS/MS og komponent knock-out-metode," Food and Chemical Toxicology, vol. 133, artikkel-ID 110754, 2019.

[20] B. Xu, J. Gao, S. Zhao, Y. Li, Y. Du og H. Pan, "DeSpektrum-effekt forhold mellom HPLC-fingeravtrykk og den styrkende blod- og oppløsende staseeffekten til hagtornblader," Chromatographia, vol. 83, nr. 3, s. 409–421, 2020.

[21] Y. Feng, Z. Jing, Y. Li et al., "Screening anafylaktoide komponenter av Shuang Huang Lian injeksjon ved å analysere spektrum-effekt forhold kombinert med UPLC-TOF-MS," Biomedical Chromatography, vol. 33, nei. 2, artikkel-ID e4376, 2019.

[22] X. Jiang, L. Tao, C. Li et al., "Gruppering, spektrum-effektforhold og antioksidantforbindelser av kinesisk propolis fra forskjellige regioner ved bruk av multivariate analyser og off-line anti-DPPH-analyse," Molecules, vol. . 25, nei. 14. 2020.

[23] Y. Zhao, X.-M. Du, H. Jiang, G.-X. Zou, og B. Wang, "Spektrum-effekt forhold mellom høyytelses væskekromatografi fingeravtrykk og anti-inflammatoriske aktiviteter av Leontopodium leontopodioides (Willd.) Beauv," Journal of Chromatography B, vol. 1104, s. 11–17, 2019.

[24] X. Zhou, Y. Li, M. Zhang, et al., "Spektrum-effektforhold mellom UPLC-fingeravtrykk og anti-lungekrefteffekt av Si Jun Zi Tang," Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, vol. 2019, artikkel-ID 7282681, 9 sider, 2019.

[25] X. Sun, Q. Zhao, Y. Si et al., "Bioaktiv strukturell basis for proteoglykaner fra Sarcandra glabra basert på spektrum-effektforhold," Journal of Ethnopharmacology, vol. 259, artikkel-ID 112941, 2020.

[26] S. Gao, H. Chen og X. Zhou, "Studie på spektrum-effekt forholdet til xanthine oxidase inhiberende aktivitet av Ligustrum lucidum," Journal of Separation Science, vol. 42, nei. 21, s. 3281–3292, 2019.

[27] J. Tan, J. Liu, H. Wang, et al., "Identifisering av blodaktiverende komponenter fra Xueshuan Xinmaining tablett basert på spektrum-effektforhold og nettverksfarmakologianalyse," RSC Advances, vol. 10, nei. 16, s. 9587–9600, 2020.

[28] J. Zhang, T. Chen, K. Li et al., "Screening aktive ingredienser av rosmarin basert på spektrum-effekt forhold mellom UPLC fingeravtrykk og vasorelaksant aktivitet ved hjelp av tre chemometrics," Journal of Chromatography B, vol. 1134-1135, artikkel-ID 121854, 2019.

[29] Y. Chen, G. Pan, W. Xu et al., "Spectrum-effect relationship study between HPLC fingerprints and antioxidant activity of Sabia parviflflora," Journal of Chromatography B, vol. 1140, artikkel-ID 121970, 2020.

[30] M. Liao, P. Yan, X. Liu, et al., "Spektrum-effektforhold for antitumoraktiviteten til shikoniner og shikonofuraner i medisinsk Zicao ved UHPLC-MS/MS og kjeometriske tilnærminger," Journal of Chromatography B, vol. 1136, artikkel-ID 121924, 2020.

[31] JH Wu, YT Cao, HY Pan og LH Wang, "Identifisering av antitumorbestanddeler i paddegift ved spektrum-effektforholdsanalyse og undersøkelse av dens farmakologiske mekanisme," Molecules, vol. 25, nei. 18. 2020.

[32] J. Tang, J. Liu og F. Wu, "Molekylære dokkingstudier og biologisk evaluering av 1,3,4-tiadiazolderivater som bærer Schiffff-basegrupper som tyrosinasehemmere," Bioorganic Chemistry, vol. 69, s. 29–36, 2016.