Løselig perleekstrakt gir effektiv hudoppklaring ved å motvirke endotelin

Ta kontakt med:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Jing Wang MD1|Zhixiong Chen MSc2|Yaojia Lu BSc2|Lihua Zhang BSc3|Jiahuan Mo BSc2|Fumin Cao BSc2|Min Xie BSc3|Xinzhong Shen BSc3|Anquan Yang BSc3

Abstrakt

Bakgrunn:Forekomsten av hudpigmenteringsforstyrrelser har vært økende globalt. Dette krever sikrere og mer effektive produkter som fjerner fregner og lyser huden. I denne studien antok vi detLøselig perleekstrakt(SPE) kan ha endotelin-antagoniserende forbindelser med god hudblekingeffekter.

Mål: (a) Å bestemme effekten og mekanismene tilSPEpå ET-1-behandlede B16 melanomceller. (b) Å utforske de cytotoksiske effektene av SPE på B16 melanomceller.

Metoder:CCK-8-analyse ble utført for å bestemme hvordan SPE og ET-1 påvirker proliferasjonshastigheten til B16-melanomceller, NaOH-lyseanalysen ble utført for å kvantifisere innholdet av melanin mens tyrosinaseaktiviteten ble bestemt ved DOPA-oksidasjon test. mRNA- og proteinekspresjonsnivåene til TYR og TRP-1 ble bestemt ved henholdsvis qRT-PCR-analyse og Western blot-analyse.

Resultater:Det fant viSPEved 0.1 og 1 ug/mL konsentrasjoner har ingen effekt på spredningen av cellene og 10 nmol/L ET-1 fremmet proliferasjon av B16 melanomceller. Spesielt viste B16 melanomceller behandlet med 10 nmol/L ET-1 signifikant høyere melaninsyntese, tyrosinaseaktivitet, TYR og TRP-1 mRNA-ekspresjonsnivåer sammenlignet med ubehandlede celler. Merk at effekten av 10 nmol/L ET-1-behandling ble opphevet med SPE på en doseavhengig måte.

Konklusjoner:SPE hemmer endotelin, og gjør derved trygt og effektivt lysere huden ved å motvirke endotelin. Dessuten er SPE trygt og effektivt.

SØKEORD:B16 melanomceller, endotelin-1, løselig perleekstrakt,bleking

Cistanche herbaer en hudblekende ingrediens.

1|INTRODUKSJON

De siste årene, nyere og effektiv hudblekingkosmetikk til utvortes bruk er kommet på markedet. Dette tilskrives økonomisk utvikling og endrede livsstilsbehov på tvers av mennesker i alle generasjoner. Huden som brukes for øyeblikketblekingmidler inkluderer hydrokinon, kojinsyre, fosfolipase D1, placenta og vitamin A. Hudpigmenteringsforstyrrelser er hovedsakelig assosiert med produksjonen av melanin. Det syntetiseres gjennom en prosess initiert av omdannelsen av tyrosin til dopa katalysert av tyrosinase. Dopa initierer en serie komplekse biokjemiske reaksjoner som fører til syntese av melanin. Blekingsmekanismen til dihydro asparges ic acid, 1 hydrokinon og kojinsyre involverer hemming av tyrosinaseaktivitet, som er det hastighetsbegrensende enzymet i melaninsyntesen.2 Når du gjør det, reduserer disse midlene produksjonen av melanin, noe som resulterer i bleking av huden. 3 Derimot virker fosfolipase D1, placenta og retinsyre ved å redusere mengden syntese av tyrosinase.4Selv om disse midlene oppnår en viss grad av bleking av huden, er blekingsmekanismene deres ikke klare. Dessuten er de giftige og tar lengre tid å forårsake bleking av huden.

Det er derfor viktig å finne tryggere og mer effektiv hudblekingagenter. Forskning på hudbleking har betalt en høy premie til interaksjonen mellom cytokiner og melanocytter som en vei for å utvikle effektive hudblekingsmidler. Keratinocytter skiller ut cytokiner som endotelin (ET) når de utsettes for ultrafiolett stråling. Disse cytokinene påvirker migrasjonen av melanocytter, dendritisk utvikling og melaninproduksjon.5 Som sådan vil antagonisering av virkningsstedene til disse cytokinene føre til hvitere hud.6 Shi et al (2011) rapporterte at resveratrol, en ny endotelinantagonist, bleker huden. hud gjennom en mekanisme som involverer hemming av tyrosinaseaktivitet i B16-melanocytter.7 Yang et al (2000) fant at resveratrol retter seg mot melanocyttmembranen. Dette innebærer at den bare passerer gjennom melanocyttmembranen og melanosommembranen for å nå steder der den hemmer melaninproduksjonen.8 Tyrosinase er lokalisert i melanosomet, og derfor må dets hemmere krysse fire lag (stratum corneum, den dype epidermis, melanocyttmembranen og melanosommembranen) for å blokkere effekten.9 Resveratrol overgår bare to lag (stratum corneum og den dype epidermis) for å hemme tyrosinaseaktiviteten.10 Dette forkorter blekingsperioden.

Harley (1993) fant at perler i skotsk ferskvann, australsk og srilankisk sjøvann var laget av lignende kjemisk sammensetning, det vil si kalsiumkarbonat, 91,72 prosent, organisk materiale, 5,94 prosent, vann, 2,23 prosent, og andre stoffer, {{ 7}}.11 prosent .11 Andre steder fant Zhang et al (2018) at perleekstrakter gir betydelige antioksidanteffekter in vitro.12,13 Yang et al (2016) fant at perleekstrakter kan hemme tyrosinaseaktivitet i B16F10-celler og dermed redusere produksjon av melanin.14 Dette indikerte at perleekstrakt kan ha hudblekingeffekter, men den involverte mekanismen er ikke studert. Her postulerte vi detSPEantagoniserer endotelin og endrer syntesen av melanin og tyrosinaseaktiviteten til B16 melanomcellene. Resultatene våre viser at løselige perleekstrakter motvirker endotelin og forårsaker bleking av huden.

2|MATERIALER OG METODER

2.1|Forberedelse og sammensetningsanalyse av løselig perleekstrakt (SPE)

Perlepulver ble oppløst i melkesyre, og pH i blandingen ble justert til 7.0 med PBS. Enzymatisk hydrolyse ble initiert med tilsetning av protease, og ekstraktet ble filtrert med 10 μm kvalitativt filterpapir. Supernatanten ble oppnådd og lyofilisert for å fremstille løselig perleekstrakt.

2.2|Analyse av sammensetningen av det lyofiliserte pulveret

Kort fortalt, fuktighetsinnholdet iSPEble målt med atmosfærisk tørkemetode. En spesifikk mengde prøve ble oppvarmet i en tørkeovn ved 95-105 grader i 3 timer og veid. Prøvene ble gjentatte ganger tørket for å oppnå en konstant vekt. Fuktighetsinnholdet ble bestemt som forskjellen i masse før og etter oppvarming. Prøven ble brent, noe som resulterte i dannelsen av et uorganisk stoff kalt aske. Brennveiemetoden ble brukt for å måle kvaliteten på asken, der kvalitetsforskjellen før og etter brenning ble vurdert som askeinnhold. Kjeldahl-metoden ble brukt for å bestemme proteininnholdet i SPE. Peptidinnhold ble estimert som beskrevet tidligere.15 Innholdet av polysakkarider ble bestemt ved bruk av antranon-svovelsyremetoden.

cistancheekstrakt

2.3|Cellekultur

Murine B16 melanomceller (vennligst levert av Stem Cell Bank, Chinese Academy of Sciences) ble dyrket i Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM) som inneholdt 10 prosent føtalt bovint serum og 1 prosent penicillin/streptomycin i en inkubator (BB150 Thermo) Fisher Scientific) satt til 37 grader og 5 prosent CO2. Etter 3 dagers dyrking var cellene i en nesten smeltet tilstand og stort sett spredt over hele skålen. Cellene ble vasket med fosfatbuffer saltvann (PBS) og passert ved fordøyelse med 0,25 prosent trypsin. Cellene ble talt ved å bruke en celletelleplate og cellesuspensjoner fremstilt i passende konsentrasjoner. Cellesuspensjoner ble dyrket i en celleinkubator for påfølgende eksperimenter

2.4|Påvisning av celleproliferasjon etter behandling med SPE og ET-1 ved CCK-8-analyse

Celler i den logaritmiske vekstfasen ble dyrket i {{0}}brønnplater i en konsentrasjon på 1 × 104 celler/ml i en inkubator satt til 37 grader og 5 prosent CO2 i 24 timer . Ulike konsentrasjoner av SPE ({{10}}, 0,01, 0,1, 1 og 10 ug/ml) ble deretter tilsatt til brønnene og fikk stå i 24 timer. 10 prosent av Cell Counting Kit-8 (CCK-8) reagens (Jian Cheng Bioengineering Co.) ble tilsatt hver brønn for å måle spredningshastigheten til celler. Absorbansen til hver brønn ble avlest ved en bølgelengde på 490 nm ved bruk av en mikroplateleser. Hver gruppe ble testet som tre replikater. Effekten av ET-1 (0,1, 1, 10 og 100 nmol) på celleproliferasjon ble vurdert etter samme protokoll. Cellene ble deretter delt inn i tre grupper: kontrollgruppen (ingen behandling ble gitt), ET-1-gruppen (cellene ble behandlet med 10 nmol ET-1 i 24 timer), ogSPEgruppe (cellene ble behandlet med 1 0 nmol ET-1 i 24 timer og deretter behandlet med 0,1, 1 ug/ml SPE i 24 timer).

cistanche tubulosaer en tyrosinasehemmer

2,5|Tyrosinase aktivitetstest

10 μL med celler (forskjellsbehandlet) ble sådd inn i hver brønn i en 96-brønnplate med en celletetthet på (5-10) × 104 celler/mL, og 100 μL av vekstmediet ble tilsatt til hver brønn. Cellene ble deretter forkultivert i en inkubator satt til 37 grader og 5 prosent CO2 i 24 timer. Platene ble sentrifugert ved 2000 rotasjoner per minutt i 2 minutter, og supernatanten ble kastet. Cellene ble vasket tre ganger med PBS etterpå, og 50 μL 1 prosent Triton X-100-løsning (Jian Cheng Bioengineering Co.) ble tilsatt til hver brønn. Cellene ble umiddelbart lagret ved -80 grader i 30 minutter og deretter tint ved romtemperatur for å oppnå fullstendig brudd på cellene. Cellene ble deretter forvarmet ved 37 grader i 5 minutter, og 10 μL av 1 prosent L -DOPA-løsning ble tilsatt. Cellene fikk stå ved 37 grader i 2 timer, og absorbansen til platen ble målt ved en bølgelengde på 490 nm ved bruk av en mikroplateleser.

2.6|Test av melanininnhold

Celler ble dyrket i {{0}}brønnsplater med en tetthet på (5-10) ×104 per brønn. Hver brønn inneholdt 2 ml vekstmedium. Cellene ble inkubert i 24 timer i en inkubator satt til 37 grader og 5 prosent CO2. Supernatanten ble kastet, og melanocytter ble behandlet med 0,25 prosent trypsin i 3 minutter. 2 ml 10 prosent FBS-holdig DMEM-medium ble deretter tilsatt for å stoppe reaksjonen. Melanocytter ble samlet i et 15 ml sentrifugerør, sentrifugert ved 1000 rotasjoner per minutt i 5 minutter, og supernatanten kastet. Melanocytter ble vasket med PBS og satt i rør som inneholdt 500 μL etanol/eterløsning blandet i forholdet 1:1 og blandet godt ved risting. Blandingen fikk stå ved romtemperatur i 30 minutter og deretter sentrifugert ved 3000 rotasjoner per minutt i 5 minutter. Supernatanten ble kastet, og 300 μL 1N NaOH (inneholdende 10 prosent DMSO) ble tilsatt til cellene. Denne blandingen fikk reagere i et vannbad innstilt på 80 grader i 40 minutter for å fullstendig oppløse melaninet. 200 μL av det oppløste melaninet ble deretter overført til en 96-brønnplate, og absorbansen ble målt ved en bølgelengde på 405 nm ved hjelp av en mikroplateleser.

2.7|Kvantitativ sanntids PCR (qRT-PCR) analyse

Totalt RNA ble ekstrahert fra celler i de tre gruppene (Control, ET-1 ogSPEgrupper) ved bruk av RNAiso Plus-settet (TaKaRa Bio) og revers-transkribert til cDNA ved bruk av PrimeScript™ RT-reagenssettet (TaKaRa Bio). qRT-PCR-analysen ble utført for å påvise ekspresjonen av -aktin i hver prøve. Dette ble gjort ved å bruke SYBR grønt fargestoff. Primersekvensene16 som ble brukt (TaKaRa Bio) er vist i tabell 1. PCR-betingelsene var en initial denatureringstemperatur satt til 95 grader i 30 sekunder, 40 sykluser med denaturering, annealingstemperatur satt til 95 grader i 5 sekunder og 60 grader i 34 sekunder sekunder, henholdsvis. Dette ble utført i et StepOne plus sanntids PCR-system (Applied Biosystems). qRT-PCR-resultatene ble analysert og uttrykt som relativ mRNA-ekspresjon basert på CT-verdier (terskelsyklus) som senere ble konvertert til fold-endringer.

2.8|Western blot-analyse

Totale proteiner ble ekstrahert fra cellene ved å bruke Radio-Immunoprecipitation Assay (RIPA) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.). Konsentrasjonen av proteinekstraktene ble bestemt med Bicinchoninic Acid Assay Kit (BCA) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.). Proteinene ble deretter separert ved hjelp av natriumdodecylsulfat polyakrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE), og de resulterende båndene ble elektroforetisk overført til en polyvinylidenfluorid (PVDF)-membran. Membranen ble deretter blokkert med 5 prosent skummetmelkpulver og inkubert med antistoffer mot TYR, TRP-1 og -aktin (Santa Cruz Biotechnology) ved 4 grader i 24 timer. Deretter ble membranen inkubert med det sekundære antistoffet (Goat Anti-Mouse IgG Abmart) i 1 time ved romtemperatur. Proteinbåndene ble detektert ved bruk av forbedret kjemiluminescens (ECL) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.). Strip-skanningsanalysen ble utført ved bruk av et Image J-analysesystem. -Actin ble brukt som intern referanse i analysen av proteinekspresjon. Prøver ble kjørt som uavhengige replikater gjentatt tre ganger for hver gruppe.

2.9|Statistisk analyse

Statistiske analyser ble utført ved å bruke GraphPad prism8 programvare. Gruppeforskjeller ble sammenlignet ved bruk av enveis variansanalyse (ANOVA), og resultatene presenteres som gjennomsnitt ± SD P<.05 was="" considered="" statistically="">

cistanche til salgs: cistanche er et blekingsserum

3|RESULTATER

3.1|Sammensetningsanalyse av SPE

Kjemisk karakterisering viste detSPEinneholdt et fuktighetsinnhold på 6.03 ± 0,16 prosent, askeinnhold på 1,55 ± {{10}},11 prosent, peptidinnhold på 7,52 ± {{16 }}.03 prosent , proteininnhold på 54,12 ± 0,18 prosent og polysakkaridinnhold på 0,09 ± 0,005 prosent. Disse resultatene indikerer at proteiner var de mest tallrike i det organiske materialet i SPE.

3.2|Effekt av SPE på spredning av B16 melanomceller

Etter at B16-melanomcellene ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner (0, 0.01, 0.1, 1 og 10 ug/mL) av SPE i 24 timer, ble celleproliferasjonen evaluert ved CCK-8-analysen (figur 1A). Vi fant at spredningen av B16 melanomceller behandlet med 0,01 ug/mL SPE var høyere enn for den blanke gruppen (P<.01). 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" spe="" had="" no="" effect="" on="" the="" proliferation="" of="" the="" cells.="" however,="" 10="" μg/ml="" of="" spe="" significantly="" inhibited="" the="" proliferation="" of="" b16="" melanoma="" cells="" (p=""><.01). thus,="" 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" of="">SPEble brukt i påfølgende eksperimenter. På bakgrunn av sikkerhetshensyn, som en naturlig del avblekingkosmetikk, SPE er ikke giftig for celler ved disse to konsentrasjonene; dermed er det trygt til en viss grad.

3.3|Effekt av ET-1 på B16 melanomcelleproliferasjon

B16-melanomcellene ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner av ET-1 i 24 timer, og spredningen av cellene ble evaluert med en CCK-8-analyse. Spesielt fremmet behandling av B16 melanomceller med 0.1, 1 og 10 nmol/L ET-1 spredning på en konsentrasjonsavhengig måte, med 10 nmol/L ET{{12} } produserer den høyeste spredningsraten (P<.001). by="" contrast,="" 100="" nmol/l="" of="" et-1="" decreased="" the="" proliferation="" of="" cells="" (figure="" 1b).="" therefore,="" 10="" nmol/l="" was="" used="" in="" subsequent="">

3.4|SPE hemmer Tyrosinase-aktivitet i B16 melanomceller

For ytterligere å utforske den hemmende mekanismen tilSPEpå syntesen av melanin, analyserte vi effekten på det hastighetsbegrensende enzymet (tyrosinase) i prosessen med melaninsyntese. Aktiviteten til tyrosinase i celler ble påvist ved L-dopa-oksidasjonsmetoden. B16 melanomceller behandlet med 10 nmol/L ET-1 viste signifikant høyere intracellulær tyrosinaseaktivitet sammenlignet med ubehandlede celler (P <.01). imidlertid="" var="" tyrosinaseaktiviteten="" i="" celler="" behandlet="" med="" 0,1="" ug/ml="" og="" 1="" ug/ml="" spe-behandling="" lavere="" enn="" i="" ubehandlede="" celler="" (p="">< 0,05,="" p="">< 0,01).="" disse="" resultatene="" viser="" at="" spe="" hemmet="" tyrosinaseaktivitet="" på="" en="" konsentrasjonsavhengig="" måte="" (figur="">

3,5|SPE hemmer melaninsyntese i B16 melanomceller

Vi testet videre om effekten av SPE på melaninproduksjon i B16 melanomceller ble mediert av ET-1 ved bruk av NaOH-lysemetoden. Resultatene viste at melanininnholdet i B16 melanomcellene var signifikant økt etter behandling med 10 nmol/L ET-1 sammenlignet med kontrollgruppen (P<.01). however,="" the="" melanin="" content="" in="" cells="" treated="" with="" the="" 0.1="" μg/ml="" and="" 1="" μg/ml="" of="" spe="" was="" significantly="" lower="" than="" in="" cells="" of="" the="" control="" group.="" moreover,="" the="" inhibitory="" effects="" of="">SPEpå melaninproduksjonen var doseavhengige. Effektene av SPE på melanininnhold og tyrosinaseaktivitet var like (figur 2B). Gitt at 0.1 ug/mL og 1 ug/mL SPE ikke endret proliferasjonen av B16-melanomceller, kan reduksjonen i melanininnholdet ved disse to konsentrasjonene skje gjennom ukjente mekanismer.

3.6|Effekt av SPE på TYR- og TRP-1 mRNA-nivåer

Mekanismen som SPE endret effekten av ET-1 på B16-melanomceller ble bestemt ved å måle mRNA-nivåene av TYR og TRP-1 i celler som fikk forskjellige behandlinger. mRNA-nivåene av TYR og TRP-1 i B16 melanomceller var signifikant høyere (P<.01 and="" p=""><.001, respectively)="" after="" treatment="" with="" 10="" nmol/l="" et-1="" compared="" to="" cells="" of="" the="" control="" group.="" interestingly,="" spe="" treatment="" effectively="" inhibited="" the="" expression="" of="" tyr="" and="" trp-1="" mrna="" (p=""><.05, p=""><.05 for="" 0.1="" μg/ml,="" and="" p="" <="" .01,="" p="" <="" .01="" for="" 1="" μg/ml,="" respectively).="" altogether,="" these="" results="" show="" that="" treatment="" with="">SPEhemmet ekspresjonsnivåene til TYR og TRP-1 mRNA på en konsentrasjonsavhengig måte.

3.7|Effekt av SPE på TYR- og TRP-1-proteinnivåer i B16-melanomceller

Proteinekspresjonen av TYR og TRP-1 i B16 melanomceller ble påvist ved Western blot. Vi fant høyere proteinnivåer av TYR og TRP-1 i B16 melanomceller behandlet med 10 nmol ET- 1 sammenlignet med kontrollgruppen (P<.05 and="" p=""><.01, respectively).="" this="" indicated="" that="" 10="" nmol/l="" et-1="" promoted="" the="" synthesis="" of="" melanin="" in="" the="" cells.="" this="" indicates="" that="" et-1="" may="" promote="" the="" synthesis="" of="" melanin="" by="" activating="" tyr="" and="" trp-1="" signaling="" pathways.="" in="" contrast,="" cells="" (treated="" with="" 10="" nmol="" et-1="" for="" 24="" hours="" and="" then="" treated="" with="">SPEi 24 timer) hadde signifikant lavere proteinnivåer av TYR og TRP-1 (P<.001 and="" p=""><.001, respectively)="" than="" cells="" treated="" with="" 10="" nmol/l="" et-1.="" this="" indicated="" that="" spe="" antagonized="" the="" effect="" of="" et-1="" thereby="" inhibiting="" melanin="" synthesis="" (figure="">

4|DISKUSJON

Endotelin (ET) er et naturlig bioaktivt peptid syntetisert av endotelceller i menneskekroppen. Den består av tre isomerer: ET{{0}}, ET-2 og ET-3 som signaliserer gjennom tre ET-reseptorer: ETA, ETB og ETC.17 ETA og ETB er hovedreseptorer uttrykt i det menneskelige ET-systemet.18 ET frigjøres fra keratinocytter når de utsettes for ultrafiolett stråling B (UVB)-bestråling. Når ET binder seg til melanocyttreseptorer, stimulerer det DNA-syntese og øker tyrosinaseaktiviteten. Dette fremmer rask spredning av melanocytter og melaninsyntese.19 ET-l fremmer melanocyttproliferasjon, dendrittisk dannelse, adhesjon og migrasjon.20 Her fant vi at 0,1, 1, 10 og 100 nmol/L ET-1 betydelig fremmet celleproliferasjon. Spredningen var høyest ved 10 nmol/L ET-1 som er i samsvar med resultater rapportert av Geng et al (2011), som fant at ET-1 økte spredningen og melaninsyntesen av dyrkede alpakkahudmelanocytter. 21 TYR- og TRP-1-gener spiller en rolle i melaninproduksjonen. Faktisk fant en tidligere studie at effekter av endotelin-1 på tyrosinaseaktivitet medieres av ETA-reseptorer.22 10 nmol/L ET-1-behandling i B16-melanomceller økt tyrosinaseaktivitet og melanininnhold . qRT-PCR-resultater viste at mRNA-nivåene av TYR og TRP-1 i cellene behandlet med 10 nmol/L ET-1 var høyere enn i kontrollgruppen. Dette bekreftet at ET-1 fremmet melaninproduksjonen.

I tillegg,SPEhemmet effekten av endotelin på B16 melanomceller. Ved en konsentrasjon på 10 ug/ml utøvde det toksiske effekter og hemmet følgelig spredningen av B16 melanomceller. SPE endret imidlertid ikke proliferasjonen av celler ved konsentrasjoner på 0.1 og 1 ug/mL. Ved en konsentrasjon på {{10}}.01 ug/ml fremmet det imidlertid celleproliferasjon betydelig sammenlignet med kontrollgruppen. Disse resultatene antydet at SPE er trygt ved konsentrasjoner under 1 ug/ml. SPE hemmet ET-1-indusert melaninproduksjon ved konsentrasjoner på 0,1 og 1 ug/mL på en doseavhengig måte. Dessuten resulterte behandling med 0,1 og 1 ug/mL SPE i lavere TYR- og TRP-1-mRNA-nivåer sammenlignet med kontrollgruppen. Dessuten var den hemmende effekten av SPE konsentrasjonsavhengig. Western blot-analyse avdekket lignende effekter av SPE ved begge konsentrasjoner (0,1 og 1 ug/ml) på proteinnivåer av TYR og TRP-1.

I melanocytter binder ET-1 seg til endotelinreseptor type B (EDNRB)-reseptoren, noe som fører til aktivering av fosfolipase C (PLC).23 Dette hydrolyserer fosfatidylinositoldifosfat (PIP2) ytterligere og aktiverer proteinkinase C (PKC) og endres dermed. permeabiliteten til ionekanalene.24 Endringen i permeabilitet fører til aktivering av spenningsavhengige Ca2 pluss-kanaler og fosfolipase A (PLA).25 Til slutt aktiverer dette melaninsyntesen.26 Heri mekanismen som SPE antagoniserte ET{{ 8}} for å hemme melaninproduksjonen ble kun studert foreløpig. Som sådan fortjener uttrykk for EDNRB-reseptoren så vel som andre aspekter av melaninsyntese som PKC, PKA og KIT27 ytterligere undersøkelser.

De viktigste kjemiske komponentene i perlepulver er kalsiumkarbonat og proteiner, mens andre som porfyrin og taurin er mindre rikelig.28 Vannekstraktet av perlepulver inneholder hovedsakelig proteiner. Hard keratin er hovedproteinet i vannekstraktet. Vannekstraktet kan imidlertid også inneholde et lite antall sporstoffer.29Moderne farmakologisk forskning tyder på at perle kan fremme stoffskiftet i menneskekroppen, øke levedyktigheten til epidermale celler, forsinke aldring av celler og hemme produksjonen av melanin som samt andre farmakologiske effekter som fregnebleking og avgiftning.30 Kjemisk karakterisering avslørte at proteiner er de mest rike biomolekylene i innholdet av organisk materiale i SPE. Vi antok derfor atSPEville også hablekingeffekter i B16 melanomceller. Resultatene våre bekreftet denne hypotesen.

Disse ercistanchenettbrett forhudbleking. Vennligst klikk på bildet og få detaljene.

5|KONKLUSJON OG UTSIKTER

ET{{0}} fremmer proliferasjon av B16 melanomceller og melaninsyntese ved å aktivere TYR- og TRP-1-signalveiene. SPE ved konsentrasjoner på 0,1 og 1 ug/mL hemmer melaninsyntesen og antagoniserer dermed effekten av ET-1 uten noen cytotoksiske effekter på B16 melanomceller. Som sådan,SPEer en potensiell endotelinantagonist som kan brukes som et trygt og effektivt hudlysende middel.

REFERANSER

1. Venditti A, Mandrone M, Serrilli M, et al. Dihydroasparagusinsyre: antioksidant- og tyrosinaseinhiberende aktiviteter og forbedret syntese. J Agric Food Chem. 2013;61(28):6848-6855.

2. Jean-Paul O. Fotobeskyttende egenskaper av hudmelanin. Brit J Dermatol. 2002;146(61):7-10.

3. Maeda K, Fukuda M. Invitro effektiviteten av flere bleke kosmetiske komponenter i humane melanocytter. J Soc Cosmet Chem. 1991;42(6):361-368.

4. Sato K, Morita M, Ichikawa C, Takahashi H, Toriyama M. Depigmenteringsmekanismer av all-trans retinsyre og retinol på B16 melanomceller. J Biosci Biotech Bioch. 2014;72(10):2589-2597.

5. Ching-Shuang W, Chia-Li Y, Chieh-Shan W, Lan Cheng-Che E, Hsin-Su Y. Smalbåndet ultrafiolett-B stimulerer spredning og migrasjon av dyrkede melanocytter. J Exp Dermatol. 2004;13(12):755-763.

6. von Koschembahr AM, Swope VB, Starner RJ, Abdel-Malek ZA. Endotelin-1 beskytter humane melanocytter mot UV-indusert DNA-skade ved å aktivere JNK- og p38-signalveier. J Exp Dermatol. 2015;24(4):269-274.

7. Shi XM, Yan ZM, Xie JH, Zhou HF, He HX, Duan MX. Foreløpig forskning på blekingseffekten av resveratrol. J Flavor Fragrance Cosmetics. 2011;10(05):37-39.

8. Yang LC, Wang F, Liu M, et al. Anti-endotelin-1-effektene av Cissus assamica. Chinese New Drugs J. 2000;12(07):455-458.

9. Serre C, Busuttil V, Botto JM. Intrinsisk og ytre regulering av menneskelig hudmelanogenese og pigmentering. Int J Cosmet Sci. 2018;40(4):328-347.

10. Cabanes J, Chazarra S, Garcia-Carmona F. Kojic acid, et kosmetisk hudblekingsmiddel, er en saktebindende hemmer av katekolaseaktiviteten til tyrosinase. J Pharm Pharmaco. 1994;46(12):982-985.

11. Kun GF, Stevenson CH. Perlens bok. New York: Dover Publications; 1993:13-125.

12. Zhang LH, Shen YQ, Yang AQ, Mo JH, Chen ZX, Wang J. Studie på in vitro antioksidantaktivitet av frysetørret pulver av perleekstrakt. J Flav Frag Cosm. 2018;13(04):26-29.

13. Yang YL, Chang CH, Huang CC, Liu HW. Anti-inflammasjon og anti-apoptose effekter av perleekstrakt gel på UVB-bestråling HaCaT-celler. J Biomed Mater. 2015;26(Suppl 1): S139-S145.

14. Yang AQ, Wang J, Zhang LH, Mo JH, Chen ZX, Shen YQ. Lyseffekten av perleekstrakt på melanocytter in vitro. J Pharma Biotechnol. 2016;23(2):146-149.

15. Lu W, Ren GP, ​​Song JM. Bestemmelse av innhold av peptidesinproteinhydrolysater. J Food Sci. 2005;12(07):169-171.

16. Chia-Hua L. Ov-16 [4-(3,4-dihydroksybenzoyloksymetyl)fenyl-O- -D-glukopyranosid] hemmer melaninsyntesen ved å regulere uttrykk for melanogenese- regulert gen og protein. J Exp Dermatol. 2011;20(9):743-748.

17. Yanagisawa M, Kurihara H, Kimura S, et al. Et nytt potent vasokonstrikt eller peptid produsert av vaskulære endotelceller. J Natur. 1988;332:411-415.

18. Hou L, Pavan WJ, Shin MK, et al. Celleautonom og celle ikke-autonom signalering gjennom endotelinreseptor B under melanocyttutvikling. J Utvikle. 2004;131(14):3239-3247.

19. Imokawa G, Yada Y, Miyagishi M. Endoteliner utskilt fra humane keratinocytter er iboende mitogener for humane melanocytter. J Biol Chem. 1992;267(34):24675-24680.

20. Tada A, Suzuki I, Im S, et al. Endotelin-1 er en parakrin vekstfaktor som modulerer melanogenese av humane melanocytter og deltar i deres respons på ultrafiolett stråling. J Cellevekst forskjellig. 1998;9(7):575-584.

21. Geng JJ, Zhang J, Mu XL, et al. Effekt av ET-1 på spredning og melaninsyntese av alpakkahudmelanocytter in vitro. Kinesisk J Animal Veter Sci. 2011;42(07):932-938.

22. Monji A, Inoue H, Oshima H, et al. Tyrosinase-induksjon og inaktivering i normale dyrkede humane melanocytter med endotelin-1. J Int J Vevsreakt. 2005;27(2):41-49.

23. Takeshi S, Masashi Y, Tomoh M. Molekylær karakterisering av endotelinreseptorer. J Tips. 1992;13(3):103-108.

24. Georgia K, Ali B, Bou DG, Srivastava AK. Modulerende rolle for nitrogenoksid/cGMP-systemet i endotelin-1-induserte signalresponser i vaskulære glatte muskelceller. J Curr Cardiol Rev. 2010;6(4):247-254.

25. Sp H, Angela C. Endotelinsignalering i hjertemyocytten og dens patofysiologiske relevans. J Curr Vasc Pharmacol. 2005;3(4):343-351.

26. Clouthier DE, Hosoda K, Richardson JA, et al. Kraniale og hjertenevrale kamdefekter hos mus med endotelin-A-reseptormangel. J Utvikle. 1998;125(5):813-824.

27. Imokawa G, Yada Y, Kimura M, et al. Signaleringsmekanismer for endotelinindusert mitogenese og melanogenese i humane melanocytter. Biochem J. 1996;314(Pt 1):305-312.

28. Zhang C, Xie LP, Huang J, et al. En ny matriseproteinfamilie som deltar i den prismatiske lagrammedannelsen av perleøsters. Pinctada fucata. Biochem Bioph Res Co. 2006;344(3):735-740.

29. Wu WL, Zhang LP, Yang ZJ, et al. Komponenter og ultrastruktur med sin dannelse av pære. J Mater Rep. 2011;025(021):79-85.

30. Shao DZ, Wang CK, Wang HJ, et al. Sammendrag: sammenligning av hydrering, tyrosinase-resistens og antioksidantaktivering i tre typer perlepulver. Int J Cosmet Sci. 2010;32(5):396.