Vedvarende cytotoksisk respons av mononukleære celler i perifert blod fra uvaksinerte individer innlagt på intensivavdelingen på grunn av kritisk COVID-19 er avgjørende for å unngå et dødelig utfall

Abstrakt: Hovedmålet med denne studien var å bestemme påvirkningen av den cytotoksiske aktiviteten til perifere mononukleære blodceller (PBMC) på utfallet av uvaksinerte individer med kritisk COVID-19 innlagt på intensivavdelingen. Blodprøver fra 23 individer ble tatt ved innleggelse og deretter hver 2. uke i 13 uker frem til død (Exitus-gruppe) (n=13) eller utskrivning (overlevelsesgruppe) (n=10). Vi fant ikke signifikante forskjeller mellom grupper i sosiodemografiske, kliniske eller biokjemiske data som kan påvirke det dødelige utfallet. Imidlertid ble direkte cellulær cytotoksisitet av PBMC fra individer fra Exitus-gruppen mot pseudotype SARS-CoV-2-infiserte Vero E6-celler betydelig redusert ved innleggelse (-2.69- ganger; p=0. 0234) og etter 4 uker på intensivavdelingen (−5.58-fold; p=0.0290), sammenlignet med individer som overlevde, og det ble ikke bedre under innleggelse. In vitro gjenopprettet ikke behandling med IL-15 av disse cellene effektiv cytotoksisitet på noe tidspunkt før det dødelige utfallet, og en økt ekspresjon av immunutmattelsesmarkører ble observert i NKT, CD4+ og CD 8+ T-celler. Imidlertid økte IL-15-behandling av PBMC fra individer fra overlevelsesgruppen signifikant cytotoksisitet ved uke 4 (6.18-fold; p=0.0303). Følgelig kan immunmodulerende behandlinger som kan overvinne immunutmattelse og indusere vedvarende, effektiv cytotoksisk aktivitet være avgjørende for overlevelse under sykehusinnleggelse på grunn av kritisk COVID-19.

Nøkkelord: SARS-CoV-2; COVID-19; immun respons; cytotoksisk respons; IL-15

cistanche tubulosa-forbedre immunsystemet

1. Introduksjon

Flere tilfeller av atypisk viral lungebetennelse relatert til et utbrudd i et sjømatmarked i Wuhan City (Hubei-provinsen, Kina) ble oppdaget i desember 2019. Et nytt koronavirus kalt alvorlig akutt respiratorisk syndrom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) raskt spredt over hele verden og forårsaket pandemien av koronavirussykdom 2019 (COVID-19) [1]. Siden den gang har rundt 626 millioner tilfeller av COVID-19 og 6,5 millioner assosierte dødsfall blitt rapportert rundt om i verden (oppdatert oktober 2022) [2]. Ulike risikofaktorer og komorbiditeter kan påvirke utviklingen av COVID-19 blant individer, noe som påvirket sammenligningen av kliniske data mellom de berørte landene fra begynnelsen av pandemien [3]. Det ble imidlertid fastslått at de kliniske manifestasjonene av COVID-19 kan variere fra asymptomatisk infeksjon til akutt respiratorisk distress syndrom (ARDS) [4]. Blant de ulike risikofaktorene som var assosiert med en høyere sannsynlighet for å utvikle en alvorlig form for covid-19 er alderdom, mannlig kjønn og tidligere komorbiditeter som diabetes, hypertensjon og/eller fedme [5,6]. Alvorlig og kritisk covid-19 har også blitt assosiert med cytopeni, for det meste av CD4+ T-lymfocytter, så vel som med overdreven utmattelse av naturlig morder (NK) og CD8+ T-celler, som resulterer i en immunkompromittert tilstand som ikke klarer å fjerne infeksjonen, i tillegg til utvikling av alvorlige komplikasjoner som cytokinstorm og trombotiske hendelser [7]. Hovedårsaken til utvikling av en alvorlig form for sykdommen og død hos pasienter med COVID-19 har blitt ansett som en overdreven inflammatorisk respons som kan fremme utviklingen av sjokk og/eller hypercytokinemi med multiorgandysfunksjon [4]. Dette syndromet er kjent som en cytokinstorm [8], og det ligner på hemofagocytisk lymfohistiocytose (sHLH) sykdom, som består av en tilstand av hyperinflammasjon utløst av en virusinfeksjon [9,10]. Det kan relateres til det faktum at SARS-CoV-2 bruker reseptoren til angiotensin-konverterende enzym 2 (ACE2) for å infisere målcellene. Bindingen av SARS-CoV-2 til ACE2-reseptoren, som er vidt uttrykt av celler i forskjellige vev [11], fører til en økning i angiotensin II, som aktiverer nukleær faktor-KB (NF-KB). Aktiveringen av denne essensielle transkripsjonsfaktoren stimulerer uttrykket av proinflammatoriske cytokiner, kjemokiner og adhesjonsmolekyler [12]. Til tross for denne overdrevne inflammatoriske responsen, ser det ut til å være ineffektivt å fjerne infeksjonen, og på grunn av T-celleaktivering kan det ende i apoptose [13]. Denne cytokinstormen kan være ansvarlig for lymfopeni [12,14] og også reduserte nivåer av NK- og CD8+ T-celler med en utmattet fenotype og økt ekspresjon av hemmende reseptorer som NKG2A i NK-celler og PD{{47 }} i CD8+ T-celler [15,16]. Dessuten er uttrykket av degranuleringsmarkører som CD107a vanligvis redusert på overflaten av disse cellene [15], noe som beviser eksistensen av en svekkelse i kapasiteten til å eliminere infiserte celler hos individer med alvorlig og kritisk COVID-19 [17 ]. Til tross for den raske globale responsen for å utvikle og administrere effektive vaksiner, har fremveksten av nye varianter som kan unnslippe den vaksineinduserte immunresponsen resultert i en rask nedgang i beskyttelsen mot symptomatisk sykdom [18]. Derfor er det nødvendig å fortsette forskningen for effektive behandlinger mot covid-19. Flere behandlinger har blitt testet for å forbedre statusen til individer som er innlagt på sykehus på grunn av alvorlig og kritisk sykdom, men ingen har ennå vist seg å være spesifikk for å eliminere de infiserte cellene eller redusere infeksjonsraten [15,19]. Derfor er støttende behandling som oksygen- og væskebehandling fortsatt blant de viktigste strategiene som brukes for behandling av disse individene [2,4,16,20]. Uspesifikke behandlinger som kortikosteroider har også vært gunstig for å kontrollere og redusere den overdrevne inflammatoriske responsen [21,22]. Nylig har flere legemidler blitt godkjent av FDA for behandling av personer med mild til moderat COVID-19, som molnupiravir, nirmatrelvir og ritonavir, men bare i nødstilfeller for de personene med høy risiko å utvikle seg til alvorlig sykdom [23–26]. Molnupiravir viser en bredspektret antiviral aktivitet på grunn av dens evne til å indusere RNA-mutagenese ved interferens med flere virale RNA-avhengige RNA-polymeraser (RdRp), inkludert RdRp brukt av SARS-CoV-2 for replikasjon og transkripsjon av dets RNA-genom [27]. Kombinasjonen av nirmatrelvir og ritonavir har også vist seg å kunne stoppe spredningen av infeksjonen i dyremodeller ved å hemme den viktigste virale proteasen 3CLpro av SARS-CoV-2- 2 [28]. Imidlertid må disse antivirale legemidlene administreres i forbindelse med andre tiltak som vaksiner for å utløse en potent cytotoksisk immunrespons som er i stand til å eliminere de infiserte cellene. De fleste celler med cytotoksisk aktivitet, som CD8+ T-lymfocytter og NK- og NKT-celler, krever tilstedeværelse av interleukin-15 (IL-15) for deres funksjon og homeostatiske regulering [29]. IL-15 primer CD8+ T-celler for deres aktivering av spesifikke antigener og forbedrer også NK-celles cytotoksisitet og proliferasjon. Derfor kan IL-15 forsterke både medfødte og adaptive cellulære immunresponser mot de infiserte cellene [22,25]. IL-15 forhindrer også NK- og T-celler fra apoptose ved å oppregulere anti-apoptotiske faktorer som Bcl-2 og nedregulere pro-apoptotiske faktorer som GSK-3 [26], og dermed unngå cytopeni. Følgelig har IL-15 blitt foreslått som et nytt immunmodulerende cytokin i kreftimmunterapi og har blitt ansett som en adjuvans i vaksineregimer [26,30]. Fase 1 kliniske studier med human bolus iv infusjon IL-15 (rhIL-15) eller IL-15 superagonist N-803 har vist at dette cytokinet kan indusere betydelig utvidelse og/eller aktivering av CD4+, CD8+ og NK-effektorceller in vivo, og derfor har den blitt brukt til å behandle kreft eller virusinfeksjoner som HIV [31–35]. Derfor kan bruk av immunmodulerende midler som IL-15 som kan gjenopprette den cytotoksiske aktiviteten hos personer innlagt på sykehus på grunn av kritisk covid{108}} være nyttig for å fjerne viruset fra organismen. I denne observasjons-, longitudinelle studien karakteriserte vi utviklingen av den cytotoksiske immunresponsen mot SARS-CoV-2 i perifere mononukleære blodceller (PBMC) isolert fra individer diagnostisert med COVID{111}} som ble innlagt på intensiven omsorgsenhet (ICU) på grunn av alvorlige komplikasjoner, samt påvirkning av denne responsen på det endelige resultatet sammenlignet med andre viktige risikofaktorer. Vi evaluerte også kapasiteten til disse cellene til å svare på behandling med IL-15 og forbedre deres cytotoksiske antivirale respons. Resultatene som er oppnådd i denne studien kan bidra til en bedre forståelse av rollen til den cytotoksiske responsen i det dødelige utfallet av covid{113}} og til å gå videre mot utviklingen av effektive immunmodulerende behandlinger som fremmer viral clearance.

cistanche tubulosa-forbedre immunsystemet

Klikk her for å se Cistanche Enhance Immunity-produkter

【Be om mer】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2. Materialer og metoder

2.1. Studieemner

23 personer med kritisk COVID-19 innlagt på intensivavdelingen ved Hospital Universitario Ramón y Cajal (Madrid, Spania) fra oktober 2020 til april 2021 ble rekruttert til denne studien. Denne perioden dekket både den andre og tredje pandemiske bølgen av covid-19 i Spania (henholdsvis fra juni til desember 2020 og fra desember 2020 til mars 2021). Deltakerne ble tilfeldig rekruttert ved sykehusinnleggelse i henhold til følgende kriterier: autorisasjon av informert skriftlig eller muntlig vitnesamtykke til å delta i studien, innlagt på intensivavdelingen på grunn av kritisk COVID-19, positiv SARS-CoV-2 RT-qPCR-analyse i nasofaryngeal utstryk utført ved sykehusinnleggelse i henhold til interne validerte protokoller, eldre enn 18 år og uvaksinert mot SARS-CoV-2 ved infeksjonstidspunktet. Perifere blodprøver og kliniske data ble samlet inn annenhver uke i totalt 13 uker, og blodprøver ble behandlet og kryokonservert frem til analyseøyeblikket. Denne perioden ble beregnet under hensyntagen til at lengden på sykehusopphold i Spania under de første pandemibølgene ble estimert til 35 dager i gjennomsnitt [36], slik at vi kunne utføre minst to komplette runder med rekruttering og oppfølging. Etter 13 uker ble deltakerne delt inn i to grupper i henhold til det endelige utfallet: dødelig utfall (n=13), heretter Exitus; eller sykehusutskrivning (n=10), heretter overlevelse.

2.2. Etisk erklæring

Personene som deltok i denne studien ble rekruttert fra Hospital Universitario Ramón y Cajal (Madrid, Spania). Alle ga informert skriftlig samtykke til å delta i studien eller var vitne til muntlig samtykke med skriftlig samtykke fra en representant for å unngå håndtering av kontaminerte dokumenter. Gjeldende spanske og europeiske databeskyttelseslover sikret konfidensialitet og anonymitet til alle deltakere. Protokoll for denne studien (CEI PI 32_2020-v2) ble utarbeidet i samsvar med Helsingfors-erklæringen og tidligere gjennomgått og godkjent av de etiske komiteene ved Instituto de Salud Carlos III (IRB IORG0006384) og det deltakende sykehuset.

2.3. Celler

Fem milliliter fullblod ble samlet i EDTA Vacutainer-rør (Becton Dickinson, Madrid, Spania) og umiddelbart behandlet for å isolere PMBC og plasma ved Ficoll-Hypaque (Pharmacia Corporation, North Peapack, NJ, USA) tetthetsgradientsentrifugering, og deretter ble de kryokonservert frem til analysen. Cellelevedyktighet etter tining ble vurdert ved optisk mikroskopi og flowcytometri. Vero E6 (afrikansk grønn ape nyre) cellelinje (ECACC 85020206) ble vennlig levert av Dr. Antonio Alcami (CBM Severo Ochoa, Madrid, Spania), og disse cellene ble dyrket i DMEM supplert med 10 % FCS, 2 mM L- glutamin, og 100 enheter/ml penicillin og streptomycin (Lonza, Basel, Sveits).

cistanche fordeler for menn styrker immunforsvaret

2.4. Pseudotype SARS-CoV-2 infeksjonsanalyse

Cytotoksisk aktivitet mot SARS-CoV-2 av PBMC-er fra deltakerne ble analysert ved bruk av Vero E6-celler infisert av enkeltsyklus pseudotypevirus pNL4-3∆env_SARS CoV-2-S ∆19(G614)_Ren. Dette viruset koder for SARS-CoV-2 piggglykoprotein med mutasjon D614G innenfor HIV-1-genomet, samt Renilla luciferasegenet generert som tidligere beskrevet [37,38]. Varianter av SARS-CoV-2 som inneholder D614G-mutasjonen i spike (S)-proteinet begynte å sirkulere tidlig i pandemien og ble raskt dominerende i mange regioner [39,40]. Kort fortalt ble et monolag av Vero E6 infisert med pNL4-3∆env_ SARS-CoV-2-S∆19(G614)_Ren (100 ng p24 Gag/brønn) ) i 48 timer. Deretter ble cellene vasket og samdyrket i 1 time med PBMC-er fra deltakerne (forhold 1:1), tidligere behandlet eller ikke med IL -15 (13 ng/ml) i 48 timer. Dosen av IL-15 som ble brukt for denne studien ble valgt, tatt i betraktning den tidligere beskrevne dosen som forårsaker den høyeste effekten på NK-proliferasjon (10–25 ng/mL) [41] og også den foretrukne utvidelsen av hukommelsescytotoksisk CD8+ T-celler (mindre enn eller lik 5 ng/ml) [42]. Den cytotoksiske aktiviteten til PBMC-ene på monolaget til Vero E6 ble bestemt etter fjerning av supernatanten med cellene i suspensjon og dissosiasjon av Vero E6-celler fra platen med trypsin-EDTA-løsning (Sigma Aldrich-Merck, Darmstadt, Tyskland) og påfølgende kvantifisering av caspase-3-aktivitet i de løsrevne cellene ved luminescens ved bruk av Caspase-Glo 3/7 analysesystem (Promega, Madison, WI, USA). For å bestemme hvilke cytotoksiske cellepopulasjoner som var ansvarlige for denne aktiviteten, ble PBMC-er samlet fra supernatanten og deretter analysert ved flowcytometri.

2.5. Flowcytometrianalyse

For farging av celleoverflatefenotypingsmarkører ble følgende konjugerte antistoffer brukt: CD{{0}}PE, CD8-APC-H7, CD56-FITC og CD1{{24 }}7a-PE-Cy7, kjøpt fra BD Biosciences (San Jose, CA, USA). For farging av utmattelsesmarkører ble følgende konjugerte antistoffer brukt: CD3-BV510, CD8-APC-H7, CD56-FITC og PD1-BV650, kjøpt fra BD Biosciences, samt CD4-PE, kjøpt fra Immunostep SL (Salamanca, Spania) og TIGIT-AlexaFluor700 kjøpt fra Thermo Fisher (Waltham, MA, USA). Prøver ble innhentet ved å bruke BD LSRFortessa X-20 flowcytometer med FACS Diva-programvare v 6.0 (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) og deretter analysert med FlowJo-programvare v10.0.7 (Tree Star Inc., Ashland, OR , USA).

2.6. Påvisning av SARS-CoV-2 RNAemi

Totalt RNA ble ekstrahert fra plasmaprøver ved å bruke QIAamp MinElute Virus Kit (Qiagen Iberia, Madrid, Spania) i en automatisert ekstraktor QIAcube (Qiagen, Hilden, Tyskland). SARS-CoV-2-RNA-deteksjon ble utført ved RT-qPCR-analyse med mål i konvolutt- (E)- og nukleokapsid- (N)-genene, som tidligere beskrevet [43], som er en del av Interim Guidance of the World Health Organisasjon (WHO) for diagnostisk testing av SARS-CoV- 2 [44]. Prøver ble ansett som positive for analysen når kvantifiseringssyklus-verdien (Cq) var under 45 sykluser.

cistanche fordeler for menn styrker immunforsvaret

2.7. Statistisk analyse

Alle statistiske analyser og grafikk ble utført ved bruk av GraphPad Prism programvareversjon 8.4.3 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Gruppesammenligninger ble utført ved bruk av Mann–Whitney U-test, Wilcoxon matchet-par signert rangtest, enveis ANOVA og Tukeys multiple sammenligningstest. Fishers eksakte test ble brukt til å evaluere forskjeller i de kliniske egenskapene mellom de to gruppene. Verdiene av p < 0.{{10}}5 (to-tailed) ble ansett som statistisk signifikante. Gjennomsnittet og standardavviket ble brukt til å beregne Cohens d-statistikk ved å bruke en Excel-effektstørrelseskalkulator [45]. En effektstørrelse på 0.2, 0.5, 0.8 eller større enn eller lik 1.2 var en indikasjon på henholdsvis små, middels, store og veldig store effektstørrelser [46].

3. Resultater

3.1. Kjennetegn på deltakerne

Denne observasjonsstudien inkluderte 23 pasienter diagnostisert med COVID-19 som ble innlagt på intensivavdelingen på grunn av alvorlige komplikasjoner. Blodprøver ble tatt hver 2. uke i totalt 13 uker eller til det endelige utfallet. Ingen av deltakerne i denne studien ble rapportert å være vaksinert mot COVID-19 på tidspunktet for infeksjon og sykehusinnleggelse. De viktigste sosiodemografiske og kliniske egenskapene til alle deltakerne er oppsummert i tabell 1.

Tabell 1. Demografiske og kliniske data for alle deltakerne fra Exitus-gruppen og Survival-gruppen som ble rekruttert til denne studien.

Medianalderen for Exitus-gruppen var 65.0 år (IQR 62.0–69.0), mens medianalderen for overlevelsesgruppen var 63.{{7} } år (IQR 59.0–68.5). De fleste deltakerne (73,9 %) var menn, og 65,2 % hadde minst én komorbiditet. De viktigste komorbiditetene var dyslipidemi (52,2 %), hypertensjon (39,1 %) og diabetes mellitus (26,1 %). De fleste pasientene fikk kortikoider (82,6 %), antibiotika (82,6 %) og antikoagulantia (82,6 %) som standardbehandling. De fikk også andre behandlinger som tocilizumab (17,4 %) og remdesivir (8,7 %). De vanligste tegnene og symptomene var lungebetennelse (100%), hoste og oppspytt (87,0%), dyspné (87,0%) og feber (87,0%). Under oppholdet på intensivavdelingen trengte 12 pasienter (92,3 %) fra Exitus-gruppen og 10 pasienter (100 %) fra overlevelsesgruppen invasiv mekanisk ventilasjon. Vi fant ikke signifikante forskjeller mellom begge gruppene i sosiodemografiske og kliniske data. Vi analyserte også blodbiokjemidata ved baseline (første prøve) mellom begge gruppene, og vi fant heller ikke signifikante forskjeller mellom gruppene. Mer detaljert informasjon om kliniske data, sykehusinnleggelse og blodbiokjemidata for hver deltaker er vist i tilleggstabeller S1 og S2.

3.2. Lengde på sykehusopphold og intensivavdeling

Median lengde på sykehusopphold var 59.0 (IQR 36.0–100.0) dager i Exitus-gruppen og 73. 0 (IQR 44.5–90.{{20}}) dager i overlevelsesgruppen (Figur 1A). Median lengde på ICU-opphold var 49,0 (IQR 25,5–82,0) dager i Exitus-gruppen og 44,0 (IQR 25,0–66,5) dager i overlevelsesgruppen (Figur 1B). Ingen signifikante forskjeller i disse parameterne ble funnet mellom begge gruppene.

Figur 1. Lengde på sykehus- og intensivavdeling. Lengde på sykehusopphold (A) og ICU (B) (dager) hos personer med kritisk COVID-19 som ble delt inn i to grupper i henhold til det endelige utfallet: dødelig utfall, Exitus-gruppe (fylte prikker); eller restitusjon og sykehusutskrivning, Overlevelsesgruppe (blanke prikker). Hver prikk tilsvarer ett individ, og vertikale linjer representerer gjennomsnittet ± standardfeilen for gjennomsnittet (SEM). Statistisk signifikans mellom grupper ble beregnet ved hjelp av Mann–Whitney U-test.

3.3. Nivåer av perifere blodlymfocytter

Personer fra Exitus-gruppen viste lymfopeni (<1000 cells/mm3 ) only at the time of hospitalization (t = 0), but at Week 2, all participants showed levels of lymphocytes above the threshold for lymphopenia (Figure 2). Lymphocyte count was 1.54 (p = 0.0318; Cohen's d = 1.00)- and 1.71 (p = 0.0030; Cohen's d = 3.17)-fold higher in patients from the Survival group in comparison with the Exitus group at baseline and after 4 weeks of hospitalization, respectively. Although both groups showed an increase in the levels of lymphocytes in peripheral blood during hospitalization, they remained on average 1.54-fold higher in individuals of the Survival group in comparison with the participants of the Exitus group for at least 10 weeks. In the Survival group, the lymphocyte counts steadily increased until Week 6 of hospitalization and then decreased until Week 10.

Figur 2. Antall lymfocytter i perifert blod under sykehusinnleggelse på grunn av kritisk COVID-19. Antall lymfocytter (celler/mm3) ble bestemt annenhver uke i totalt 13 uker eller frem til det endelige utfallet i blodprøver fra deltakerne i gruppene Exitus (fylte prikker) og overlevelse (blanke prikker). Terskelen for lymfopeni er vist ved 1000 celler/mm3 med en stiplet linje. Hver prikk tilsvarer gjennomsnittet av data, og vertikale linjer representerer SEM. Statistisk signifikans mellom grupper ble beregnet ved hjelp av Mann–Whitney U-test, og innenfor grupper ble Wilcoxon U-test brukt.

3.4. PBMCs cytotoksiske aktivitet mot Vero E6-celler infisert med pseudotype SARS-CoV-2

Vi evaluerte den cytotoksiske aktiviteten til PBMC-er til sykehusinnlagte pasienter i de langsgående prøvene ved å kvantifisere caspase-3-aktivering i et monolag av Vero E6-celler infisert med pseudotype SARS-CoV-2 etter samkultur i 1 time ( forhold 1:1). Den cytotoksiske kapasiteten til PBMC-er isolert fra individer fra Exitus-gruppen endret seg ikke signifikant under sykehusinnleggelsen, og den forble jevnt lav inntil det dødelige utfallet (figur 3). Denne cytotoksiske aktiviteten økte ikke signifikant når disse cellene ble stimulert med IL-15 i 48 timer. I overlevelsesgruppen ble den cytotoksiske aktiviteten til PBMC-er økt 2.69- ganger (p=0.0234; Cohens d=1.12) i basalprøven (t {{17} }) sammenlignet med Exitus-gruppen, og den økte jevnt frem til uke 6 med sykehusinnleggelse. Denne økningen viste statistisk signifikans i sammenligningen mellom grupper ved uke 4 (5.58-fold; p=0.0290; Cohen's d=1.28). Fra uke 6 og utover avtok cellegiftaktiviteten i overlevelsesgruppen frem til sykehusutskrivning, noe som var i samsvar med nedgangen av lymfocytttallet i samme uke av innleggelsen (se figur 2). Behandling med IL-15 økte i gjennomsnitt 2.30-den cytotoksiske aktiviteten til PBMC-er fra individer fra overlevelsesgruppen i alle prøver under oppfølgingen. Etter 4 ukers sykehusinnleggelse ble IL-15-indusert cytotoksisk aktivitet økt 6.18- ganger (p=0.0303; Cohen's d=1.05) i PBMC-ene til individer fra Survival-gruppen.

Figur 3. Direkte cellulær cytotoksisitet til PBMC-er isolert fra sykehusinnlagte pasienter med kritisk COVID-19. Den cytotoksiske kapasiteten til PBMC-er fra individer fra gruppene Exitus (fylte prikker) og overlevelse (blanke prikker) ble målt ved å kvantifisere caspase-3-aktivitet i et monolag av Vero E6-celler infisert med pseudotype SARS-CoV-2 etter samkultur (1:1) i 1 time under basale forhold (grå linjer) eller etter behandling med IL-15 i 48 timer (svarte linjer). Hver prikk tilsvarer gjennomsnittet av data, og vertikale linjer representerer SEM. Statistisk signifikans mellom grupper ble beregnet ved hjelp av Mann–Whitney U-test, og innenfor grupper ble Wilcoxon U-test brukt.

3.5. Nivåer av NK- og NKT-celler

Nivåene av celler med cytotoksiske fenotyper ble analysert i PBMC-ene som ble dyrket sammen med Vero E6-celler infisert med pseudotype SARS-CoV-2. Vi fant ikke signifikante forskjeller mellom nivåene av celler med NK-fenotype (CD3-CD56+) mellom begge grupper av individer, selv etter behandling med IL-15 (Figur 4A). Ekspresjonen av degranuleringsmarkøren CD107a på overflaten av disse cellene forble uendret hos individene fra Exitus-gruppen. Selv om dette uttrykket økte jevnt fra uke 4 til sykehusutskrivning i overlevelsesgruppen, oppnådde ikke denne forskjellen statistisk signifikans i sammenligningen med Exitus-gruppen (Figur 4B). Behandling med IL-15 modifiserte ikke uttrykket av CD107a signifikant i disse cellene. Fra uke 4 viste PBMC-er fra individer fra begge gruppene en økning i nivåene av celler med NKT-fenotype (CD3+CD56+) som var 4.17- ganger høyere i PBMC-ene fra individene i Exitus-gruppen i uke 6, selv om denne forskjellen ikke oppnådde betydning (p=0.0571; Cohen's d=3.15) (Figur 5A). Denne økningen var litt høyere når celler ble behandlet med IL-15 i begge gruppene, selv om data heller ikke nådde statistisk signifikans (figur 5A). Uttrykket av CD107a endret seg ikke signifikant mellom begge grupper eller etter behandling med IL-15 (Figur 5B).

Figur 4. Nivåer av NK-celler i PBMC-er fra personer innlagt på sykehus med kritisk COVID-19. (A) Totale nivåer av NK-celler (CD3-CD56+) og (B) ekspresjon av degranuleringsmarkøren CD107a i disse cellene ble evaluert i PBMC-er under basale forhold (grå linjer) eller etter behandling med IL-15 i 48 timer (svarte linjer) etter samkultur (1:1) med Vero E6-celler infisert med pseudotype SARS-CoV-2 i 1 time. Hver prikk tilsvarer gjennomsnittet av data, og vertikale linjer representerer SEM. Statistisk signifikans mellom grupper ble beregnet ved hjelp av Mann–Whitney U-test, og innenfor grupper ble Wilcoxon U-test brukt.

Figur 5. Nivåer av NKT-celler i PBMC-er fra personer innlagt på sykehus med kritisk COVID-19. Totale nivåer av NKT-celler (CD3+CD56+) (A) og ekspresjon av degranuleringsmarkøren CD107a i disse cellene (B) ble evaluert under basale forhold (grå linjer) eller etter behandling med IL{ {5}} i 48 timer (svarte linjer) etter samkultur (1:1) i 1 time med Vero E6-celler infisert med pseudotype SARS-CoV-2. Hver prikk tilsvarer gjennomsnittet av data, og vertikale linjer representerer SEM. Statistisk signifikans mellom grupper ble beregnet ved hjelp av Mann–Whitney U-test, og innenfor grupper ble Wilcoxon U-test brukt.

3.6. Nivåer av CD8+ T-celler

CD8-tallet ble forsterket 2.07- ganger (p=0.0409; Cohens d=0.94) i basalprøven (t=0) av Exitus-gruppen i sammenligning med overlevelsesgruppen, og disse nivåene forble stabile til det dødelige utfallet (figur 6A). IL-15 ga ikke en signifikant gunstig effekt på nivåene til denne cellepopulasjonen. I overlevelsesgruppen ble CD8+ T-celler redusert 1.51- ganger i gjennomsnitt sammenlignet med Exitus-gruppen (Figur 6A). Ekspresjonen av CD107a reduserte 1.53- ganger (p=0.0313) ved uke 4 i CD8+ T-celler fra individene i Exitus-gruppen, og den forble uendret inntil den dødelige utfall. Behandling med IL-15 viste en liten fordel i uttrykket av denne degranuleringsmarkøren, men denne forskjellen var ikke signifikant (figur 6B). I overlevelsesgruppen var det også en reduksjon i ekspresjonen av CD107a i CD8+ T-celler ved uke 4, og deretter var det en økning og utover, men ingen betydning ble oppnådd før eller etter behandling med IL{{26 }} (Figur 6B).

Figur 6. Nivåer av CD8+ T-celler i PBMCer fra individer innlagt på sykehus med kritisk COVID-19. (A) Totale nivåer av CD8+ T-celler (CD3+CD8+) og (B) ekspresjon av degranuleringsmarkøren CD107a i disse cellene ble evaluert i PBMCer under basale forhold (grå) linjer) eller etter behandling med IL-15 i 48 timer (svarte linjer) etter samkultur (1:1) med Vero E6-celler infisert med pseudotype SARS-CoV-2 i 1 time. Hver prikk tilsvarer gjennomsnittet av data, og vertikale linjer representerer SEM. Statistisk signifikans mellom grupper ble beregnet ved hjelp av Mann–Whitney U-test, og innenfor grupper ble Wilcoxon U-test brukt.

3.7. Nivåer av utmattelsesmarkører

Ekspresjonsnivåene til immunutmattelsesmarkørene PD-1 (Programmert celledødsprotein) og TIGIT (T-celle-immunreseptor med Ig- og ITIM-domener) ble analysert ved flowcytometri i CD4+ T-celler og cytotoksiske celler fra alle deltakere. Prøver tatt på tidspunktet for sykehusinnleggelse (t=0) frem til uke 6 av sykehusinnleggelsen ble analysert, på grunn av mangel på prøver tilgjengelig etter dette tidspunktet. CD4+ og CD8+ T-celler fra individer fra Exitus-gruppen viste nivåer av PD-1 som ble betydelig økt med 1,72 (p=0.0095; Cohens d {{ 11}}.87)- og 2.92-fold (p=0.0317; Cohen's d=2.07) etter henholdsvis 4 ukers sykehusinnleggelse, sammenlignet med individer fra Overlevelsesgruppe (Figur 7A, B, venstre grafer). I NKT-celler økte nivåene av TIGIT signifikant fra tidspunktet for sykehusinnleggelse til 6 ukers sykehusinnleggelse hos personer fra Exitus-gruppen, og disse nivåene ble økt 1.76- ganger (p=0.0357 ; Cohens d=0.33) etter 2 ukers sykehusinnleggelse, sammenlignet med overlevelsesgruppen (Figur 7C, høyre graf).

Ingen signifikante forskjeller mellom grupper ble observert i ekspresjonsnivåene til disse utmattelsesmarkørene i NK-celler (figur 7D).

Figur 7. Uttrykksnivåer av utmattelsesmarkører i PBMC-er fra individer innlagt på sykehus med kritisk COVID-19. Ekspresjonsnivåer av PD-1 og TIGIT i CD4+ T-celler (A), CD8+ T-celler (B), NKT-celler (C) og NK-celler (D). Hver prikk tilsvarer gjennomsnittet av data, og vertikale linjer representerer SEM. Statistisk signifikans mellom grupper ble beregnet ved hjelp av Mann–Whitney U-test, og innenfor grupper ble ANOVA brukt.

3.8. Kvantifisering av SARS-CoV-2 RNAemia i plasma

Tilstedeværelsen av RNA fra SARS-CoV-2 ble analysert i plasmaet til alle individer i basalprøven (t=0), og ingen positive resultater ble oppnådd hos noen deltaker, med Cq-verdier under grensen av positiv deteksjon av 45 sykluser.

4. Diskusjon

SARS-CoV-2-infeksjon kan forårsake flere kliniske presentasjoner av COVID-19 som spenner fra asymptomatisk infeksjon til alvorlig, kritisk eller til og med dødelig sykdom [4]. Selv om den generelle vaksinasjonen av befolkningen i stor grad har redusert de alvorlige formene av sykdommen, øker fremveksten av nye varianter av SARS-CoV-2 antallet individer som utvikler kritisk covid-19 og må innlagt på sykehus på grunn av gjennombruddsinfeksjoner [47,48]. Derfor er det fortsatt en prioritet å utvikle forebyggende og terapeutiske strategier som kan unngå utviklingen av kritiske former for covid-19 og dødelige utfall hos sykehusinnlagte pasienter. Det er beskrevet at eldre mennesker med komorbiditeter utgjør en høyere risiko for å utvikle alvorlig og kritisk covid{{1{{30}}}} [49]. I Spania er de viktigste uavhengige prediktorene for død på grunn av covid-19 menn over 50 år med tilhørende komorbiditeter som hypertensjon og diabetes [36]. I vår studie presenterte de fleste av deltakerne i begge gruppene disse karakteristikkene, uten signifikante forskjeller mellom dem i sosiodemografiske, kliniske eller biokjemiske data som kan påvirke sykdommens alvorlighetsgrad eller det dødelige utfallet. Faktisk viste begge gruppene økte nivåer av biokjemiske parametere som har vært assosiert med en høyere risiko for et dårlig utfall av COVID-19, slik som C-reaktivt protein (CRP) og laktatdehydrogenase (LDH) [50–56 ]. På den annen side, selv om det er rapportert at personer med alvorlig COVID-19 kan ha påvisbar SARS-CoV-2 RNAnemi [54], som har vært relatert til økt risiko for dødelighet [55], ingen av deltakerne i vår studie presenterte påviselig RNA i serum, så vi kunne ikke etablere en korrelasjon mellom påvisbar viremi og et dødelig utfall. Til slutt viser COVID-19 en høyere lengde på sykehusopphold og dødelighet sammenlignet med andre infeksjonssykdommer som krever innleggelse på intensivavdelingen, for eksempel samfunnservervet lungebetennelse (CAP) eller sepsis [56], og det ble anslått i 35 dager i gjennomsnitt for de individene som ble innlagt på sykehus i Spania under de første pandemibølgene [36]. I vår studie var median lengde på sykehusopphold lik mellom både Exitus- og Survival-gruppene (henholdsvis 59,0 og 73,0 dager), og 50 % av alle deltakerne ble mer enn 40 dager på intensivavdelingen. Derfor må andre differensielle faktorer vurderes for å forklare det dødelige utfallet i Exitus-gruppen og utvinningen i Survival-gruppen.

Fordeler med cistanche tubulosa-styrke immunsystemet

Lymfopeni regnes også som en risikofaktor for alvorlighetsgrad av sykdommen som har vært relatert til lengre sykehusopphold [57]. I vår studie viste 73,9 % av deltakerne i både Exitus- og Survival-gruppene lave lymfocyttall. Nivået av totale lymfocytter var imidlertid høyere i gjennomsnitt hos deltakerne i Survival-gruppen, sammenlignet med Exitus-gruppen. Dette er i samsvar med den forrige observasjonen at de individene som døde på grunn av COVID-19 utvikler en mer alvorlig lymfopeni over tid sammenlignet med de som overlever [58] og at disse lymfocyttene vanligvis viser en utmattet fenotype, noe som resulterer i en gradvis immunsvikt [15,16]. På grunn av en effektiv cytotoksisk antiviral respons som er avgjørende for kontroll av virusinfeksjoner, inkludert SARS-CoV-2 [17], er immunrekonstituering avgjørende for utvinningen fra COVID-19. Akselerasjonen av denne immunrekonstitusjonen avhenger i stor grad av den homeostatiske perifere ekspansjonen av lymfocytter, noe som kan være en god strategi for å forbedre utfallet av individer som er innlagt på sykehus på grunn av alvorlig covid-19 [58]. IL-15 er et cytokin som er nødvendig for funksjon og homeostase av CD8+ T-celler, NK- og NKT-celler [29], og det har blitt foreslått som en ny immunmodulerende behandling for flere sykdommer som kreft og HIV-infeksjon [26,30,35,59]. I denne studien evaluerte vi derfor om behandling in vitro med IL-15 kunne forbedre den cytotoksiske responsen i PBMC-er til sykehusinnlagte personer med alvorlig og kritisk COVID-19 etter hvert som infeksjonen progredierte, for å fastslå gyldigheten som en kandidat for å stimulere immunrekonstitusjonen under COVID-19. Med dosen som ble analysert, observerte vi en total økning i cytotoksisk respons mot målceller infisert med pseudotype SARS-CoV-2 i PBMC-ene til de individene som overlevde COVID-19 etter 44 dager i gjennomsnitt etter sykehusinnleggelse kl. intensivavdelingen. Denne cytotoksiske responsen ble effektivt økt 2.3- ganger i gjennomsnitt ved behandling med IL-15 i alle prøver samlet under oppfølgingen, med uke 6 av sykehusinnleggelse som vendepunktet hvorfra både lymfocytttellingen og cellegiftaktiviteten begynte å avta frem til sykehusutskrivning. Til tross for at de deler lignende sosiodemografiske, kliniske og biokjemiske egenskaper og har vært innlagt på sykehus i nesten like lang tid (totalt 59 dager, hvorav 49 dager var på intensivavdelingen), overlevde gruppen av individer som ikke overlevde COVID{{34} } viste PBMC-er som ikke responderte i nærvær av de infiserte målcellene, selv når de ble stimulert med IL-15. De totale nivåene av lymfocytter var over terskelen for lymfopeni hos individene fra denne gruppen siden uke 2 av sykehusinnleggelsen. Disse nivåene økte imidlertid ikke signifikant i løpet av sykehusinnleggelsen, og ingen effektiv antiviral respons ble påvist, selv i nærvær av IL-15 ved den analyserte dosen. Fraværet av respons på IL-15 er beskrevet for andre kroniske infeksjoner som humant immunsviktvirus (HIV), hepatitt C-virus (HCV), hepatitt B-virus (HBV) og humant T-lymfotropt virus (HTLV), der immunutmattelsen kan påvirke uttrykket av den spesifikke reseptoren til IL-15, CD122, i CD8+ T-celler [60], noe som gjør dem ikke reagerer på denne homeostatiske stimulansen. Immunutmattelsen som er karakteristisk for COVID-19 har ikke bare blitt observert i CD8+ T-celler, men også i andre cytotoksiske celletyper som NK- og NKT-celler [15,16]. Derfor kan fraværet av respons på IL-15 i PBMC fra Exitus-gruppen være relatert til økt immunutmattelse som ikke kunne overvinnes med IL-15-behandling alene ved den analyserte dosen. Dette har også blitt observert i fase I kliniske studier der monoterapi med IL-15 var ineffektiv til tross for den enorme utvidelsen av cytotoksiske celler [31,32]. Følgelig vil andre kostnadsstimulerende behandlinger være nødvendige for å indusere en effektiv respons hos disse individene, slik som immunologiske sjekkpunkthemmere eller monoklonale antistoffer rettet mot de infiserte cellene, for å øke den antistoffavhengige cellulære cytotoksisiteten (ADCC).

Vi bestemte også celletypene som hovedsakelig var involvert i utviklingen av denne forsterkede cytotoksiske responsen i gruppen av individer som overlevde COVID-19. Det har blitt påvist at tilstedeværelsen av funksjonelle CD8+ T-celler er avgjørende for å beskytte dyremodeller mot utviklingen av alvorlig COVID-19 [61,62]. Dessuten har fraværet av en effektiv CD8-mediert cytotoksisk respons blitt utpekt som en vesentlig faktor for eldre menneskers økte mottakelighet for å utvikle alvorlig eller kritisk covid-19 [63]. Overraskende nok var nivåene av CD8+ T-celler 2.07- ganger (p=0.0409) høyere i Exitus-gruppen på tidspunktet for sykehusinnleggelse (t=0) , og de forble forbedret til det dødelige utfallet, sammenlignet med Survival-gruppen. Selv om individene fra Exitus-gruppen viste lymfocytttellinger litt over terskelen for lymfopeni, forble disse nivåene nesten uendret gjennom hele tiden de var innlagt på sykehus. Dessuten har det blitt beskrevet at lymfopeni kan føre til et mønster av sameksisterende undertrykkelse og aktivering der det er et perifert tap av T-celler samtidig med den intense spredningen av CD8+ T-cellepoolen [64,65]. Dette vil forklare de noe økte nivåene av CD8+ T-celler som er observert i PBMC-ene til deltakerne fra Exitus-gruppen siden uke 6 av sykehusinnleggelsen og utover, til tross for at de totale nivåene av lymfocytter forble uendret og over terskelen for lymfopeni, som også indikerer en potensiell reduksjon av CD4+ T-celler. Imidlertid viste disse CD8+ T-cellene lav cytotoksisk aktivitet, som ble bestemt av det lave uttrykket av degranuleringsmarkøren CD107a på celleoverflaten, mens uttrykket av denne markøren økte i CD8+ T-celler fra deltakerne i Overlevelsesgruppen fra uke 4 og utover. Ekspresjonen av CD107a regnes som en biomarkør for å evaluere den cytotoksiske kapasiteten [66], og den har blitt beskrevet å være redusert i overflaten av celler isolert fra individer med COVID-19 sammenlignet med uinfiserte, friske donorer [15 ].

Derfor kan det økte uttrykket av CD107a på overflaten av CD8+ T-celler i det minste delvis forklare bidraget til disse cellene til den økte cytotoksiske aktiviteten observert i PBMC-er til deltakerne fra Survival-gruppen. I tillegg observerte vi et økt uttrykk for utmattelsesmarkøren PD-1 i både CD4+ og CD8+ T-celler fra individer fra Exitus-gruppen, noe som også kan bidra til redusert cellegift aktivitet og respons på IL-15 av disse cellene. Andre cellepopulasjoner kan være involvert i den cytotoksiske aktiviteten mot de pseudotypede SARS-CoV-2-infiserte cellene, slik som NK- og NKT-celler. Som det skjer med andre alvorlige akutte infeksjoner, kan NK-celler rekrutteres til infeksjonsstedet med SARS-CoV-2 [67], noe som vil forklare det reduserte antallet sirkulerende NK-celler som ble observert hos alle deltakerne. Dessuten kan cytokinstormen som utvikles under alvorlig og kritisk COVID-19 resultere i en dysfunksjonell status for NK-celler som vil uttrykke høye nivåer av hemmende sjekkpunktreseptorer som NKG2A eller PD-1 [68]. I vår studie var nivåene av NK-celler lik mellom begge gruppene frem til uke 6, hvor deltakerne i overlevelsesgruppen viste en progressiv økning frem til sykehusutskrivning. Dette korrelerte med en økt ekspresjon av CD107a, som har blitt assosiert i NK-celler med en forbedret cytokinsekresjon og forbedret lysis av målceller [7,69], selv om prosentandelen av NK-celler som uttrykker aktiveringsmarkører som CD107a har blitt beskrevet å være lavere hos personer med covid-19 sammenlignet med friske kontroller [70]. Omvendt, selv om nivåene av NKT-celler ble kraftig forbedret i overlevelsesgruppen fra uke 6 og utover, forble uttrykket av CD107a nesten uendret, mens de viste økte nivåer av utmattelsesmarkøren TIGIT på celleoverflaten som økte jevnt frem til uke 6 av sykehusinnleggelse . En av de viktigste begrensningene i vår studie var den reduserte utvalgsstørrelsen. Likevel ble det oppnådd statistisk signifikans mellom grupper i flere essensielle parametere som også viste stor eller svært stor effektstørrelse når de samlede forskjellene mellom gruppene ble beregnet.

cistanche tubulosa-forbedre immunsystemet

5. Konklusjoner

Avslutningsvis er det viktigste bidraget fra denne studien til kampen mot immunopatologien forårsaket av SARS-CoV-2-infeksjon bekreftelsen på at den svekkede antivirale kapasiteten til PBMC-er så ut til å være en kritisk faktor i utviklingen til dødelig COVID{ {2}}, selv over andre sosiodemografiske, kliniske og biokjemiske faktorer. Derfor kan bruk av immunmodulerende behandlinger som kan øke cytotoksisiteten bidra til et positivt resultat under sykehusinnleggelse på grunn av kritisk COVID-19. Den økte cytotoksiske aktiviteten mediert av IL-15 hos individer fra Survival-gruppen var sannsynligvis ikke avhengig av økte nivåer av cytotoksiske celler, men på immunkompetansen til disse cellene til å reagere på slik stimulus. Derfor kan overvåking av uttrykket av utmattelsesmarkører og responsen på homeostatiske stimuli som IL-15 av disse cellepopulasjonene hos innlagte individer være nyttig som en prediktormarkør for et dødelig utfall for å sette i gang ytterligere tiltak for å forhindre den. Følgelig er denne observasjonsstudien et bevis på at bruk av IL-15 hos personer innlagt på sykehus med COVID-19 kan forbedre den antivirale immunresponsen, selv om denne stimulansen alene ikke ville være effektiv hos de individene som ikke reagerer. celler på grunn av immunutmattelse eller svekket IL-15R-signalvei, som er essensielt for å forhindre utmattelse [71], selv når de viser lymfocyttantall over terskelen for lymfopeni. Flere studier med en større populasjon er nødvendig for å evaluere kombinasjoner av økende doser av IL-15 med andre immunmodulerende midler som immunkontrollpunkthemmere eller monoklonale antistoffer rettet mot de infiserte cellene for å bidra til å gjenopprette og forsterke den antivirale responsen under kritiske former for COVID -19.

Referanser

1. Atzrodt, CL; Maknojia, I.; McCarthy, RDP; Oldfield, TM; Po, J.; Ta, KTL; Stepp, HE; Clements, TP A Guide to COVID-19: En global pandemi forårsaket av det nye koronaviruset SARS-CoV-2. FEBS J. 2020, 287, 3633–3650. [CrossRef] [PubMed]

2. Dashboard for WHO Coronavirus (COVID-19). Tilgjengelig på nett: https://covid19.who.int/ (åpnet 18. oktober 2022).

3. Capalbo, C.; Aceti, A.; Simmaco, M.; Bonfini, R.; Rocco, M.; Ricci, A.; Napoli, C.; Rocco, M.; Alfonsi, V.; Teggi, A.; et al. Den eksponentielle fasen av COVID-19-pandemien i sentrale Italia: En integrert omsorgsvei. Int. J. Environ. Res. 2020, 17, 3792. [CrossRef] [PubMed]

4. Huang, C.; Wang, Y.; Li, X.; Ren, L.; Zhao, J.; Hu, Y.; Zhang, L.; Fan, G.; Xu, J.; Gu, X.; et al. Kliniske trekk ved pasienter infisert med 2019 nytt koronavirus i Wuhan, Kina. Lancet 2020, 395, 497–506. [CrossRef] [PubMed]

5. Haybar, H.; Kazemnia, K.; Rahim, F. Underliggende kronisk sykdom og COVID-19-infeksjon: En toppmoderne gjennomgang. Jundishapur J. Chronic Dis. Care 2020, 9, e103452. [CrossRef] 6. Hamed, SM; Elkhatib, WF; Khairalla, AS; Noreddin, AM Global dynamics of SARS-CoV-2 clades and their relation to COVID{11}} epidemiology. Sci. Rep. 2021, 11, 8435. [CrossRef]

7. Erdinc, B.; Sahni, S.; Gotlieb, V. Hematologiske manifestasjoner og komplikasjoner av COVID-19. Adv. Clin. Exp. Med. 2021, 30, 101–107. [CrossRef]

8. Hu, B.; Huang, S.; Yin, L. Cytokinstormen og COVID-19. J. Med. Virol. 2021, 93, 250–256. [CrossRef]

9. Ramos-Casals, M.; Brito-Zerón, P.; López-Guillermo, A.; Khamashta, MA; Bosch, X. Voksen hemofagocytisk syndrom. Lancet 2014, 383, 1503–1516. [CrossRef]

10. Mehta, P.; McAuley, DF; Brown, M.; Sanchez, E.; Tattersall, RS; Manson, JJ; på vegne av HLH Across Specialty Collaboration, Storbritannia. På tvers av spesialitet. COVID-19: Vurder cytokinstormsyndromer og immunsuppresjon. Lancet 2020, 395, 1033–1034. [CrossRef]

11. Li, M.-Y.; Li, L.; Zhang, Y.; Wang, X.-S. Ekspresjon av SARS-CoV-2-cellereseptorgenet ACE2 i et bredt utvalg av humant vev. Infisere. Dis. Fattigdom 2020, 9, 45. [CrossRef]

12. Jiang, Y.; Rubin, L.; Peng, T.; Liu, L.; Xing, X.; Lazarovici, P.; Zheng, W. Cytokinstorm i COVID-19: Fra virusinfeksjon til immunrespons, diagnose og terapi. Int. J. Biol. Sci. 2022, 18, 459–472. [CrossRef] [PubMed]

13. Zhan, Y.; Carrington, EM; Zhang, Y.; Heinzel, S.; Lew, AM Liv og død av aktiverte T-celler: Hvordan er de forskjellige fra naive T-celler? Front. Immunol. 2017, 8, 1809. [CrossRef] [PubMed]

14. Huang, I.; Pranata, R. Lymphopenia in severe coronavirus disease-2019 (COVID-19): Systematisk gjennomgang og metaanalyse. J. Intensive Care 2020, 8, 36. [CrossRef] [PubMed]

15. Zheng, M.; Gao, Y.; Wang, G.; Song, G.; Liu, S.; Sun, D.; Xu, Y.; Tian, ​​Z. Funksjonell utmattelse av antivirale lymfocytter hos COVID-19-pasienter. Celle. Mol. Immunol. 2020, 17, 533–535. [CrossRef]

16. Rha, M.-S.; Jeong, HW; Ko, J.-H.; Choi, SJ; Seo, I.-H.; Lee, JS; Sa, M.; Kim, AR; Joo, E.-J.; Ahn, JY; et al. PD-1-uttrykker SARS-CoV-2-spesifikke CD8+ T-celler er ikke utmattede, men funksjonelle hos pasienter med COVID-19. Immunitet 2021, 54, 44–52. [CrossRef]

17. Vigón, L.; Fuertes, D.; García-Pérez, J.; Torres, M.; Rodríguez-Mora, S.; Mateos, E.; Corona, M.; Saez-Marín, AJ; Malo, R.; Navarro, C.; et al. Nedsatt cytotoksisk respons i PBMCer fra pasienter med COVID-19 innlagt på intensivavdelingen: Biomarkører for å forutsi alvorlighetsgraden av sykdommen. Front. Immunol. 2021, 12, 665329. [CrossRef]

18. HVEM. Midlertidig erklæring om beslutningsmessige vurderinger for bruk av variantoppdaterte COVID-19-vaksiner. Tilgjengelig på nettet: https://www.who.int/news/item/17-06-2022-interim-statement-on-decision-making-considerations-for-the-use-of variant-updated-covid{{15} }vaccines (åpnet 15. august 2022).

19. Mishra, SK; Tripathi, T. Ett års oppdatering om COVID-19-pandemien: Hvor er vi nå? Acta Trop. 2021, 214, 105778. [CrossRef] 20. Li, X.; Geng, M.; Peng, Y.; Meng, L.; Lu, S. Molekylær immunpatogenese og diagnose av COVID-19. J. Pharm. Anal. 2020, 10, 102–108. [CrossRef]

21. TRC Group. Deksametason hos pasienter på sykehus med covid-19. N. Engl. J. Med. 2021, 384, 693–704. [CrossRef]

22. Zhou, X.; Yu, J.; Cheng, X.; Zhao, B.; Manyam, GC; Zhang, L.; Schluns, K.; Li, P.; Wang, J.; Sun, S.-C. Deubiquitinase Otub1 kontrollerer aktiveringen av CD8+ T-celler og NK-celler ved å regulere IL-15-mediert priming. Nat. Immunol. 2019, 20, 879–889. [CrossRef]

23. Parums, DV Nåværende status for orale antivirale medikamentbehandlinger for SARS-CoV-2-infeksjon hos ikke-innlagte pasienter. Med. Sci. Monit. 2022, 28, e935952-1. [CrossRef] [PubMed]

24. Couzin-Frankel, J. Antivirale piller kan endre pandemiens forløp. Er. Assoc. Adv. Sci. 2021, 12, 799–800. [CrossRef] [PubMed]

25. Muntasell, A.; Ochoa, MC; Cordeiro, L.; Berraondo, P.; de Cerio, AL-D.; Cabo, M.; López-Botet, M.; Melero, I. Målretting av NK-cellekontrollpunkter for kreftimmunterapi. Curr. Opin. Immunol. 2017, 45, 73–81. [CrossRef] [PubMed]

26. Patidar, M.; Yadav, N.; Dalai, SK Interleukin 15: Et nøkkelcytokin for immunterapi. Cytokin Growth Factor Rev. 2016, 31, 49–59. [CrossRef]

27. Kabinger, F.; Stiller, C.; Schmitzová, J.; Dienemann, C.; Kokic, G.; Hillen, HS; Höbartner, C.; Cramer, P. Mechanism of molnupiravir-indused SARS-CoV-2 mutagenese. Nat. Struktur. Mol. Biol. 2021, 28, 740–746. [CrossRef] [PubMed]

28. Hung, Y.-P.; Lee, J.-C.; Chiu, C.-W.; Lee, C.-C.; Tsai, P.-J.; Hsu, I.-L.; Ko, W.-C. Oral nirmatrelvir/ritonavir-terapi for COVID-19: The Dawn in the Dark? Antibiotika 2022, 11, 220. [CrossRef]

29. Guo, Y.; Luan, L.; Patil, NK; Sherwood, ER Immunbiologi av IL-15/IL-15R-komplekset som et antitumor- og antiviralt middel. Cytokin Growth Factor Rev. 2017, 38, 10–21. [CrossRef]

30. Zhang, S.; Zhao, J.; Bai, X.; Handley, M.; Shan, F. Biologiske effekter av IL-15 på immunceller og dets potensiale for behandling av kreft. Int. Immunopharmacol. 2021, 91, 107318. [CrossRef]

31. Waldmann, TA; Dubois, S.; Miljkovic, MD; Conlon, KC IL-15 i kombinasjonsimmunterapi av kreft. Front. Immunol. 2020, 11, 868. [CrossRef]

32. Dubois, SP; Miljkovic, MD; Fleisher, TA; Pittaluga, S.; Hsu-Albert, J.; Bryant, BR; Petrus, MN; Perera, LP; Müller, JR; Shih, JH; et al. Kort-kurs IL-15 gitt som en kontinuerlig infusjon førte til en massiv utvidelse av effektive NK-celler: Implikasjoner for kombinasjonsbehandling med antitumorantistoffer. J. Immunother. Kreft 2021, 9, e002193. [CrossRef]

33. Conlon, KC; Potter, EL; Pittaluga, S.; Lee, C.-CR; Miljkovic, MD; Fleisher, TA; Dubois, S.; Bryant, BR; Petrus, M.; Perera, LP; et al. IL15 ved kontinuerlig intravenøs infusjon til voksne pasienter med solide svulster i en fase I-forsøk indusert dramatisk NK-celleundergruppe. Clin. Cancer Res. 2019, 25, 4945–4954. [CrossRef]

34. Romee, R.; Cooley, S.; Berrien-Elliott, MM; Westervelt, P.; Verneris, MR; Wagner, JE; Weisdorf, DJ; Blazar, BR; Ustun, C.; DeFor, TE; et al. Første-i-menneske fase 1 klinisk studie av IL-15 superagonistkomplekset ALT-803 for å behandle tilbakefall etter transplantasjon. Blood Am. J. Hematol. 2018, 131, 2515–2527. [CrossRef] [PubMed]

35. Miller, JS; Davis, ZB; Helgeson, E.; Reilly, C.; Thorkelson, A.; Anderson, J.; Lima, NS; Jorstad, S.; Hart, GT; Lee, JH; et al. Sikkerhet og virologisk virkning av IL-15-superagonisten N-803 hos mennesker som lever med HIV: En fase 1-studie. Nat. Med. 2022, 28, 392–400. [CrossRef] [PubMed]

36. Berenguer, J.; Ryan, P.; Rodríguez-Baño, J.; Jarrín, I.; Carratalà, J.; Pachón, J.; Yllescas, M.; Arriba, JR; Muñoz, EA; Gil Divasson, P.; et al. Karakteristikker og prediktorer for død blant 4035 pasienter på sykehus med covid-19 fortløpende i Spania. Clin. Microbiol. Infisere. 2020, 26, 1525–1536. [CrossRef]

37. Garcia-Perez, J.; Sanchez-Palomino, S.; Perez-Olmeda, M.; Fernandez, B.; Alcami, J. En ny strategi basert på rekombinante virus som et verktøy for å vurdere medikamentfølsomhet for humant immunsviktvirus type 1. J. Med. Virol. 2007, 79, 127–137. [CrossRef] [PubMed]

38. Ou, X.; Liu, Y.; Lei, X.; Li, P.; Mi, D.; Ren, L.; Guo, L.; Guo, R.; Chen, T.; Hu, J.; et al. Karakterisering av spike glykoprotein av SARS-CoV-2 ved virusinntrengning og dets immunkryssreaktivitet med SARS-CoV. Nat. Commun. 2020, 11, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

39. Volz, E.; Hill, V.; McCrone, JT; Pris, A.; Jørgensen, D.; O'Toole, Á.; Southgate, J.; Johnson, R.; Jackson, B.; Nascimento, FF; et al. Evaluering av effekten av SARS-CoV-2 spikemutasjon D614G på overførbarhet og patogenisitet. Celle 2021, 184, 64–75. [CrossRef]

40. Korber, B.; Fischer, WM; Gnanakaran, S.; Yoon, H.; Theiler, J.; Abfalterer, W.; Hengartner, N.; Giorgi, EE; Bhattacharya, T.; Foley, B.; et al. Sporing av endringer i SARS-CoV-2-spike: Bevis på at D614G øker smitteevnen til COVID-19-viruset. Celle 2020, 182, 812–827. [CrossRef]

41. Nandagopal, N.; Ali, AK; Komal, AK; Lee, S.-H. Den kritiske rollen til IL-15–PI3K–mTOR-veien i naturlige drepecellers effektorfunksjoner. Front. Immunol. 2014, 5, 187. [CrossRef]

42. Rosenthal, R.; Groeper, C.; Bracci, L.; Adamina, M.; Feder-Mengus, C.; Zajac, P.; Iezzi, G.; Bolli, M.; Weber, WP; Frey, DM; et al. Differensiell respons til IL-2, IL-7 og IL-15 vanlige reseptorkjedecytokiner av antigenspesifikke perifert blod naive eller hukommelsescytotoksiske CD8+ T-celler fra friske givere og Melanompasienter. J. Immunother. 2009, 32, 252–261. [CrossRef]

43. Corman, VM; Landt, O.; Kaiser, M.; Molenkamp, ​​R.; Meijer, A.; Chu, DKW; Bleicker, T.; Brünink, S.; Schneider, J.; Schmidt, ML; et al. Påvisning av 2019 nytt koronavirus (2019-nCoV) ved sanntids RT-PCR. Eurosurveillance 2020, 25, 2000045. [CrossRef] [PubMed]

44. HVEM. Diagnostisk testing for SARS-CoV-2: Midlertidig veiledning, 11. september 2020; Verdens helseorganisasjon: Genève, Sveits, 2020.

45. Becker, LA Effektstørrelse (ES); University of Colorado Colorado Springs: Colorado Springs, CO, USA, 2000.

46. ​​Cohen, J. Statistical Power Analysis for Behavioral Sciences; Routledge: Abingdon, Storbritannia, 1988. [CrossRef]

47. Moreno-Perez, O.; Ribes, I.; Boix, V.; Martinez-García, M.; Otero-Rodriguez, S.; Reus, S.; Sánchez-Martínez, R.; Ramos, JM; Chico-Sánchez, P.; Merino, E. Innlagte pasienter med gjennombrudd COVID-19: Kliniske egenskaper og dårlige resultatprediktorer. Int. J. Infect. Dis. 2022, 118, 89–94. [CrossRef] [PubMed]

48. Lee, CM; Lee, E.; Park, WB; Choe, PG; Song, K.-H.; Kim, ES; Park, S.-W. Gjennombrudd COVID-19-infeksjon under deltavariantens dominerende periode: Individuell behandling basert på vaksinasjonsstatus er nødvendig. J. Korean Med. Sci. 2022, 37, e252. [CrossRef] [PubMed]

49. Ejaz, H.; Alsrhani, A.; Zafar, A.; Javed, H.; Junaid, K.; Abdalla, AE; Abosalif, KO; Ahmed, Z.; Younas, S. COVID-19 og komorbiditeter: Skadelig innvirkning på infiserte pasienter. J. Infect. Folkehelse 2020, 13, 1833–1839. [CrossRef] [PubMed]

50. Azevedo, RB; Botelho, BG; de Hollanda, JVG; Ferreira, LVL; de Andrade, LZJ; Oei, SSML; Mello, TDS; Muxfeldt, ES COVID-19 og det kardiovaskulære systemet: En omfattende gjennomgang. J. Hum. Hypertens. 2021, 35, 4–11. [CrossRef]

51. Zhang, JJ; Lee, KS; Ang, LW; Leo, YS; Young, BE Risikofaktorer for alvorlig sykdom og effekt av behandling hos pasienter infisert med COVID-19: En systematisk oversikt, meta-analyse og meta-regresjonsanalyse. Clin. Infisere. Dis. 2020, 71, 2199–2206. [CrossRef]

52. Kermali, M.; Khalsa, RK; Pillai, K.; Ismail, Z.; Harky, A. Biomarkørenes rolle i diagnostisering av COVID-19–En systematisk gjennomgang. Life Sci. 2020, 254, 117788. [CrossRef]

53. Malik, P.; Patel, U.; Mehta, D.; Patel, N.; Kelkar, R.; Akrmah, M.; Gabrilove, JL; Sacks, H. Biomarkører og utfall av COVID-19 sykehusinnleggelser: Systematisk gjennomgang og metaanalyse. BMJ Evid. Basert Med. 2021, 26, 107–108. [CrossRef]

54. Li, Y.; Schneider, AM; Mehta, A.; Sade-Feldman, M.; Kays, KR; Gentili, M.; Charland, NC; Gonye, ​​AL; Gushterova, I.; Khanna, HK; et al. SARS-CoV-2-viremi er assosiert med distinkte proteomiske veier og forutsier utfall av covid-19. J. Clin. Undersøk. 2021, 131, e148635. [CrossRef]

55. Rodríguez-Serrano, DA; Roy-Vallejo, E.; Cruz, NDZ; Ramírez, AM; Rodríguez-García, SC; Arevalillo-Fernández, N.; Galván-Román, JM; García-Rodrigo, LF; Vega-Piris, L.; Llano, MC; et al. Påvisning av SARS-CoV-2 RNA i serum er assosiert med økt dødelighetsrisiko hos innlagte covid{10}}-pasienter. Sci. Rep. 2021, 11, 13134. [CrossRef]

56. Serafim, RB; Póvoa, P.; Souza-Dantas, V.; Kalil, AC; Salluh, JI Klinisk forløp og utfall av kritisk syke pasienter med COVID-19-infeksjon: En systematisk gjennomgang. Clin. Microbiol. Infisere. 2021, 27, 47–54. [CrossRef] [PubMed]

57. Liu, X.; Zhou, H.; Zhou, Y.; Wu, X.; Zhao, Y.; Lu, Y.; Tan, W.; Yuan, M.; Ding, X.; Zou, J.; et al. Risikofaktorer knyttet til alvorlighetsgraden av sykdommen og lengden på sykehusopphold hos COVID{1}}-pasienter. J. Infect. 2020, 81, e95–e97. [CrossRef]

58. Luo, XH; Zhu, Y.; Mao, J.; Du, RC T-celle-immunobiologi og cytokinstorm av COVID-19. Scand. J. Immunol. 2021, 93, e12989. [CrossRef] [PubMed]

59. Harwood, O.; O'Connor, S. Terapeutisk potensial for IL-15 og N-803 ved HIV/SIV-infeksjon. Virus 2021, 13, 1750. [CrossRef] [PubMed]

60. Shin, H.; Wherry, EJ CD8 T-celledysfunksjon under kronisk virusinfeksjon. Curr. Opin. Immunol. 2007, 19, 408–415. [CrossRef]

61. McMahan, K.; Yu, J.; Mercado, NB; Loos, C.; Tostanoski, LH; Chandrashekar, A.; Liu, J.; Peter, L.; Atyeo, C.; Zhu, A.; et al. Korrelerer av beskyttelse mot SARS-CoV-2 i rhesus-makaker. Nature 2021, 590, 630–634. [CrossRef]

62. Zhuang, Z.; Lai, X.; Sun, J.; Chen, Z.; Zhang, Z.; Dai, J.; Liu, D.; Li, Y.; Li, F.; Wang, Y.; et al. Kartlegging og rolle av T-cellerespons i SARS-CoV-2-infiserte mus. J. Exp. Med. 2021, 218, e20202187. [CrossRef]

63. Westmeier, J.; Paniskaki, K.; Karaköse, Z.; Werner, T.; Sutter, K.; Dolff, S.; Overbeck, M.; Limmer, A.; Liu, J.; Zheng, X.; et al. Nedsatt cytotoksisk CD8+ T-cellerespons hos eldre COVID-19-pasienter. MBio 2020, 11, e02243-20. [CrossRef]

64. Laing, AG; Lorenc, A.; del Barrio, IDM; Das, A.; Fish, M.; Monin, L.; Muñoz-Ruiz, M.; McKenzie, DR; Hayday, TS; Francos Quijorna, I.; et al. En dynamisk COVID-19-immunsignatur inkluderer assosiasjoner med dårlig prognose. Nat. Med. 2020, 26, 1623–1635. [CrossRef]

65. Kuri-Cervantes, L.; Pampena, MB; Meng, W.; Rosenfeld, AM; Ittner, CAG; Weisman, AR; Agyekum, RS; Mathew, D.; Baxter, AE; Vella, LA; et al. Omfattende kartlegging av immunforstyrrelser assosiert med alvorlig covid-19. Sci. Immunol. 2020, 5, eabd7114. [CrossRef]

66. Aktas, E.; Kucuksezer, UC; Bilgic, S.; Erten, G.; Deniz, G. Forholdet mellom CD107a-ekspresjon og cytotoksisk aktivitet. Celle. Immunol. 2009, 254, 149–154. [CrossRef]

67. Björkström, NK; Strunz, B.; Ljunggren, H.-G. Naturlige drepeceller i antiviral immunitet. Nat. Rev. Immunol. 2022, 22, 112–123. [CrossRef] [PubMed]

68. Bi, J. NK-celledysfunksjon hos pasienter med COVID-19. Celle. Mol. Immunol. 2022, 19, 127–129. [CrossRef] [PubMed]

69. Alter, G.; Malenfant, JM; Altfeld, M. CD107a som en funksjonell markør for identifisering av naturlig mordercelleaktivitet. J. Immunol. Metoder 2004, 294, 15–22. [CrossRef] [PubMed]

70. Gustine, JN; Jones, D. Immunopathology of Hyperinflammation in COVID-19. Er. J. Clin. Pathol. 2021, 191, 4–17. [CrossRef] [PubMed]

71. Han, C.; Zhou, Y.; Li, Z.; Farooq, MA; Ajmal, I.; Zhang, H.; Zhang, L.; Tao, L.; Yao, J.; Du, B.; et al. Samuttrykk av IL-7 forbedrer NKG2D-basert CAR T-celleterapi på prostatakreft ved å øke utvidelsen og hemme apoptose og utmattelse. Kreft 2020, 12, 1969. [CrossRef]