Synergistisk anti-hud pigmenteringseffekt av cistanche fenyletanoid glykosider og glabridin
Jan 14, 2025
Abstrakt for å undersøke synergistikkenEffekt av cistancheFenyletanolsiden (PHG) og glabridin (GLA) mot hudpigmentering, masseforholdet mellom PHG -er og GLA ble screenet ved in vitro tyrosinaseinhibering eksperiment, 1, 1- difenyl -2- trinitrophenylhydrazine (dapphpphph) og trinitrofenylhydrazine (difhenyl {2} 2, 2- diazo-bis (3- etyl-benzothiazol -6- sulfonsyre diammoniumkation (Abts+) Free Radical Scavenging Experimenter. UVB-indusert hypopigment-modellen var B16F10 var etablert, og og den induserte Melopigment-modellen av B16f10 var etablert, og den in-induserte hypopigmenteringsmodellen for å gjøre det vende for å bruke tyrene. Melanininnhold som indekser.
DeinflammatoriskModell av HACAT-celler indusert av lipopolysaccharide (LPS) ble etablert, og den antiinflammatoriske effekten av medikamentet ble evaluert ved å hemme frigjøring av interleukin -6 (il -6) og tumor nekrose faktor- (tnf-). Den oksidative stressmodellen av HACAT -celler indusert av azodiisobuamidinhydroklorid (AAPH) ble ytterligere etablert, og den forbedrede aktiviteten til superoksyd dismutase (SOD) og katalase (CAT) ble brukt som indekser for å evaluere antioksidantffekten av stoffet. Det optimale masseforholdet mellom PHG -er og GLA ble bestemt av de tre cellemodellene ovenfor. Resultatene viste at vandige oppløsninger av PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) og PHGS/GLA (10∶1) fremstilt med M (PHGS) ∶M (GLA) =1 ∶1, 5∶1, 10∶1 viste antio -inhibritory og Synnergistiske effekter på T -tyrene. Inhiberingshastigheten til PHGS/GLA (1∶1),
PHGS/GLA (5∶1) og PHGS/GLA (1 0 ∶1) vandige oppløsninger med en massekonsentrasjon på 0,4 g/l var henholdsvis 94,37%, 92,93%og 88,06%. Opprinnelsesraten for DPPH -frie radikaler var henholdsvis 89,44%, 88,72,%og 88,10%.
Opprinnelsen av ABTS+ frie radikaler var henholdsvis 1 0 0,13%, 100,0,1%og 99,87%. Når massekonsentrasjonen av PHGS/GLA var 25 ug/ml, viste PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) og PHGS/GLA (10∶1) vandige oppløsninger ingen cytotoksisitet til B16F10 og HACAT -celler. Inhiberingen av tyrosinaseaktivitet i PHGS/GLA (1 ∶1) vandig løsning var sterkere (tyrosinaseaktivitet 23,80%), og melanininnholdet (30,90%) ble betydelig redusert. PHGS/GLA (1∶1) vandig løsning viste den beste hemmingseffekten på IL -6 og TNF-frigjøring, og evnen til å forbedre aktiviteten til SOD og CAT. Kombinasjonen av PHG -er og GLA viste god synergistisk ytelse, overlegen A til enkelt medikament og høyere enn PHGS/ GLA (5∶1) og PHG/ GLA (10∶1) vandig løsning. Kombinasjonen av PHG-er og GLA spilte en synergistisk rolle i å forbedre hudpigmentering ved å hemme melaninproduksjon, og antiinflammatoriske og antioksidanteffekter.
Nøkkelord cistanche fenyletanoid glykosider; glabridin; synergistiske effekter; anti-hud pigmentering; anti-oksidasjon; antiinflammatorisk; narkotikamaterialer
Cistanche fenyletanol side for bleking
Støttende tjeneste for Wecistanche-den største Cistanche-eksportøren i Kina:
E -post: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tlf: +86 15292862950
For mer informasjon om potensielle rabatter, ikke nøl med å kontakte kundeserviceteamet vårt. De hjelper deg gjerne!
Hudpigmentering er en hudsykdom forårsaket av faktorer som skade, hudbetennelse og ultrafiolett stråling [1-2]. Disse faktorene kan føre til en unormal økning i melanin, noe som igjen forårsaker problemer som Chloasma, fregner og postinflammatorisk hyperpigmentering (PIH) [3-4], som påvirker folks mentale tilstand og livskvalitet. For tiden fokuserer behandlingen av hudpigmentering hovedsakelig på å hemme tyrosinase, et nøkkelenzym i dannelsen av melanin [5-6].
Den siste forskningen [7-8] viser at hudpigmentering avhenger av den nære forbindelsen mellom keratinocytter og melanocytter i overhuden. Når frie radikaler og inflammatoriske faktorer frigitt av keratinocytter kommer i kontakt med melanocytter, vil de indusere en økning i tyrosinaseaktivitet, noe som fører til en økning i melanininnholdet. De vil også akselerere melanintransport og få melanin til å avsette på overflaten av huden. Derfor krever behandling av hudpigmentering en rekke tiltak som å hemme melaninproduksjon, betennelsesdempende og antioksidasjon.
For øyeblikket, selv om tradisjonelle medikamentpreparater, som hydrokinon og hydrokinon, har visse effekter i behandlingen av hudpigmentering, er deres virkemåter relativt enkelt og kan gi bivirkninger [9-10]. Til sammenligning er naturlige medisiner naturlige og milde i kraft og blir stadig mer anerkjent og rost av forbrukere [11-12]. Spesielt kan kombinasjonen av flere planteekstrakter [13-14] ikke bare hemme produksjonen av melanin, men har også flere effekter som antiinflammatoriske og antioksidanteffekter, og gir nye ideer og metoder for behandling av hudpigmentering.
Cistanche Deserticola Ma har unik medisinsk verdi og er kjent som "Desert Ginseng". Studier har funnet at den karakteristiske ingrediensfenyletanoidglykosid inneholdt i cistanche har god antioksidantaktivitet [15] og antiinflammatoriske effekter [16], og har også en viss tyrosinase-hemmende effekt [17]. Glycyrrhizin er en flavonoidkomponent i glycyrrhiza glabra L., som har en kraftig blekingseffekt og er kjent som "whitening gull" [18]. Tradisjonell kinesisk medisinbehandling av hudpigmentering starter vanligvis å følge milten og nyre, rydde bort varme og avgifte, og fylle på qi og blod [19].
Fenyletanolisk glykosider av Cistanche Deserticola kan fylle på nyre Yang og være nytte av essens og blod, mens glycyrrhiza glabra kan fylle milt og qi, rydde bort varmen og avgifte. De to kan samarbeide for å motstå pigmentering. Kombinasjonen av fenyletanoidc glykosider av cistanche ørkenicola og glabridin kan motstå hudpigmentering fra flere dimensjoner og mål, beskytte mot ultrafiolette stråler i hele båndet, synergistisk hemming av tyrosinase og redusere melaninproduksjon, og kan redusere hurtigproduksjoner og inflammatoriske faktorer, og redusere melaninproduksjonen, og kan redusere skuddproduksjon og inflammatorisk faktor og redusere melaninproduksjonen, og kan redusere skinnet og inflammatoriske aktiviteter, og redusere melaninproduksjonen og redusere Imidlertid er det få rapporter i litteraturen om den synergistiske hemming av hudpigmentering ved fenyletanoidglykosider av cistanche ørkenicola og glabridin.
Denne artikkelen har til hensikt å utforske om det er en synergistisk effekt mellom pphenyletanoidglykosider av Cistanche Deserticola (PHGS) og glabridin (GLA) gjennom in vitro biokjemiske eksperimenter og etablering av 3 cellemodeller, og oppnår optimal sammensatt masse ratio for en synnergistisk effekt. Det forventes å gi teoretisk støtte og praktisk veiledning for utvikling av naturlige plantehudpleieprodukter og for å bidra til å fremme hudpleieindustrien til å utvikle seg i en mer naturlig, sunn og effektiv retning.
Hvor: en reaksjon er absorbansen av prøveløsning, L-tyrosinoppløsning, PBS og tyrosinaseløsning; En reaksjonskontroll er absorbansen av prøveløsning, L-tyrosinløsning, N og PBS-løsning; En blank er absorbansen av L-tyrosinløsning, PBS-løsning og tyrosinase-løsning; En tom kontroll er absorbansen av L-tyrosin- og PBS-løsninger.
'
1.3.2 Bestemmelse av DPPH Free Radical Scavenging Evne
Først, nøyaktig veier {{0}}. 0 197 g (0. 0 5 mmol) av dpph og oppløse det i 25 0 {{{{ mmol/l. Deretter ble PHGs og GLA fremstilt i PHGs etanoloppløsning og GLA -etanoloppløsning med massekonsentrasjoner på 0. 0 01, 0,01, 0,1, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2,0 mg/ml ved å bruke 50%. Deretter ble PHGS etanoloppløsning og GLA -etanoloppløsning blandet jevnt ved M (PHGS -løsning) ∶ M (GLA -løsning)=40 ∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40 for å oppnå 9 slag som PHGS/Gla ethan etols med DIFL -er med DIFLE -ene som var PHGS/GGS/GGS/GGS/GGS/GLAS/GLAS/GLAS/GLAS/GLES/GLES/GLAS/GLAS/GLES/GLES/GLES/GLES/GLES/GLES/GLES/GLES/GLES/GLES/GLES/GLES/GGS/GGS/GLES/GGS/GGS/Gla, 1∶1, 1∶1, 1∶1, 1∶1, (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Etanolløsninger. Til slutt, tilsett 100 μl forskjellige prøveløsninger og 100 ul DPPH -arbeidsløsning til 96- brønnplaten, bland godt, og hold deg unna lys ved romtemperatur i 30 minutter. Mål absorbansen ved 517 nm med en enzymmarkør. VC ble brukt som den positive kontrollen, og hvert eksperiment ble gjentatt 3 ganger. Beregn DPPH -frie radikale rensingsgrad (%) i henhold til formel (2).
DPPH Free Radical Scavenging Rate/%=(1 −𝐴1 - 𝐴3𝐴2) × 100 (2) hvor: A1 er absorbansen av prøveløsning + DPPH arbeidsløsning; A2 er absorbansen av 50% etanol etter volum + DPPH -arbeidsløsning; A3 er absorbansen av prøveløsning + 50% etanol etter volum.
1.3.3 Bestemmelse av ABTS+ Free Radical Scavenging Evne
Først veier 1 g (1,82 mmol) av ABTS og løser den opp i avionisert vann for å fremstille en ABTS -arbeidsløsning med en sluttkonsentrasjon på 7,4 mmol/L; Vei 0. 5 g kaliumpersulfat og oppløst det i avionisert vann for å fremstille en kaliumpersulfatarbeidsløsning med en sluttkonsentrasjon på 2,6 mmol/L; Bland ABTS -arbeidsløsningen og kaliumpersulfatarbeidsløsningen i like volumer, og reag i 12 timer i mørket for å fremstille ABTS+ arbeidsløsningen. I henhold til metoden i avsnitt 1.3.2, forbereder PHGS etanolløsning, GLA etanolløsning, N og VC etanolløsning, så vel som PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) etanolløsning.
Til slutt tilsett 40 μl forskjellige prøveløsninger og 160 μl ABTS+ arbeidsløsning til 96- brønnplaten, bland godt, reag ved romtemperatur i mørket i 6 minutter, og måle absorbansen til løsningen ved 734 nm ved bruk av en ELISA -leser. Beregn ABTS+ frie radikale rensingshastigheter (%) i henhold til formel (3).
Hvor: A1 er absorbansen av prøveløsning + ABTS + arbeidsløsning; A2 er absorbansen av avionisert vann + ABTS + arbeidsløsning; A3 er absorbansen av prøveløsning + avionisert vann.
1.4 Celleeksperiment
1.4.1 Cellekultur
Etter at B16F10- og HACAT-celler blir gjenopplivet, blir de inokulert i DMEM høyt glukosemedium (som inneholder en blanding av 10% føtalt bovint serum og 1% penicillin-streptomycin ved en massefraksjon) og dyrket i en inkubator ved 37 grader, 5% CO2 volum fraksjon og 70% for 24 timer ved 37 grader, 5% CO2 volum fraksjon og 70% for 24 timer. Cellevekststatusen observeres under et mikroskop, og mediet erstattes eller subkulturerte i henhold til cellevekststatus.
1.4.2 Eksperimentell gruppering
B16F10 og HACAT -celler i den logaritmiske vekstfasen inokuleres i 96- Brønnplater med passende celletall og dyrkes i 24 timer for å la cellene feste seg til veggen. Prøveløsninger med forskjellige massekonsentrasjoner fremstilles ved bruk av et DMEM -kulturmedium. Normal gruppe, modellgruppe, lavdose PHGS (125 ug/ml) gruppe, middels dose PHGS (250 ug/ml) gruppe, høydose PHGs (500 ug/ml) gruppe, lavdose GLA (6,25 ug/ml (mellomgruppe, mellomgruppe, og phg (6,25 ug/ml) gruppe (1 ml/ml) gruppe (12 PHGS/GLA (5∶1) gruppe, og PHGS/GLA (10∶1) kulturmediumgruppe ble satt opp.
I den UVB-induserte B16F10-pigmenteringsmodellen ble modellgruppecellene tilsatt med 30 ul PBS (pH =7. 4) og plassert 3 cm rett under UVB-bestrålingen i 110 sek; Den eksperimentelle gruppen ble forbehandlet med 100 ul prøveløsninger med forskjellige massekonsentrasjoner i 1 time, deretter tilsatt med 30 ul PBS og plasserte 3 cm rett under UVB -bestrålingen i 110 sek; Den normale gruppen brukte alltid høyt glukose DMEM-kulturmedium; Den blanke gruppen ble ikke inokulert med celler, men med en like stor mengde kulturmedium i stedet.
I den LPS-induserte HACAT-cellebetennelsesmodellen ble modellgruppen dyrket med PBS-løsning av LPS i en konsentrasjon på 20 ug/ml i 24 timer; Den eksperimentelle gruppen ble forbehandlet med 100 ul prøveløsninger med forskjellige massekonsentrasjoner i 24 timer og deretter tilsatt med 20 ug/ml LPS -løsning i 24 timer; Den normale gruppen brukte alltid høyt glukose DMEM-medium; Den blanke gruppen ble ikke inokulert med celler, men med en like stor mengde kulturmedium.
I den AAPH-induserte HACAT-celleoksidative stressmodellen ble modellgruppen dyrket med 100 ml AAPH (2,5 mmol) løsning i en konsentrasjon på 25 mmol/l i 24 timer; Den eksperimentelle gruppen ble forbehandlet med 100 ul prøveløsninger med forskjellige massekonsentrasjoner i 24 timer og deretter tilsatt med AAPH -løsning i en konsentrasjon på 25 mmol/l i 24 timer; Den normale gruppen brukte alltid høyt glukose DMEM-medium; Den blanke gruppen ble ikke inokulert med celler, men med en like stor mengde kulturmedium.
Hver gruppe ble satt opp med 3 replikatbrønner og dyrket i en inkubator ved 37 grader, 5% CO2 -volumfraksjon og 70% fuktighet.
1.4.3 Cytotoksisitetsanalyse
CCK8 -metoden ble brukt for å bestemme cytotoksisitet. B16F1 0 og HACAT -celler i den logaritmiske vekstfasen ble fordøyd med 0,25% trypsin i 3 minutter. Etter at fordøyelsen ble avsluttet, ble kulturmediet gjentatte ganger blåst for å lage en cellesuspensjon med en tetthet på 1 × 104 celler/ml. Cellene ble jevnt inokulert i en 96- brønnplate, 100 ul per brønn, og PBS ble tilsatt til brønnene rundt cellene. Etter at cellene festet seg til veggen, ble forskjellige massekonsentrasjoner av prøveløsning tilsatt, 3 replikerte brønner per gruppe og dyrket i en inkubator ved 37 grader, 5% CO2 -volumfraksjon og 70% fuktighet i 24, 48 og 72 timer, og deretter ble løsningen kastet. Alle grupper ble tilsatt med 100 ul komplett kulturmedium inneholdende 10% CCK8 -volumfraksjon og inkubert i 60 minutter. Absorbansen av løsningen ved 450 nm ble målt ved bruk av en ELISA -leser. Cellelevedyktighet (%) ble beregnet i henhold til formel (4).
Hvor: en eksperimentell gruppe er absorbansen av brønnene som inneholder celler og prøveløsning under UVB -bestråling; En normal gruppe er absorbansen av brønnene som inneholder celler og prøveløsning uten UVB -bestråling; En tom gruppe er absorbansen til brønnene som inneholder kulturmedium, men ingen celler.
1.4.5 Bestemmelse av melanininnhold
Melanininnholdet ble bestemt ved NaOH -lyseringsmetoden. Etter behandling av cellene i 72 timer i henhold til metoden i avsnitt 1.4.2, ble supernatanten kastet og vasket to ganger med PBS, og 100 ul NaOH vandig løsning inneholdende 10% DMSO etter volum (konsentrasjon på 1 mol/L) ble tilsatt. Etter å ha blitt plassert i en ovn på 90 grader i 1 time, ble absorbansen av løsningen ved 490 nm bestemt av en enzymmarkør. Eksperimentet ble gjentatt 3 ganger. Melanininnholdet (%) ble beregnet i henhold til formel (5).
1.5 Bestemmelse av inflammatorisk faktorinnhold og oksidativ stressindeks
Etter behandling av cellene i 48 timer i henhold til metoden i avsnitt 1.4.2, ble HACAT -cellene i hver gruppe samlet med en celleskraper, sentrifugert og supernatanten ble samlet. Innholdet i IL -6 og Tnf- ble bestemt i henhold til instruksjonene fra ELISA-settet.
Etter behandling av cellene i 48 timer i henhold til metoden i avsnitt 1.4.2, ble HACAT -cellene i hver gruppe samlet med en celleskraper, og cellene ble brutt av gjentatt frysing og tining. Cellene ble sentrifugert ved 12000 r/min ved 4 grader i 10 minutter, og supernatanten ble samlet. SOD -aktiviteten og CAT -innholdet ble bestemt i henhold til instruksjonene fra ELISA -settet.
1.6 Bestemmelse av den kombinerte indeksen
Den kombinerte indeksen (CI) -metoden [20] ble brukt for å bestemme om PHG-er og GLA i forskjellige masseforhold hadde en synergistisk effekt i å hemme tyrosinaseaktivitet og anti-oksidasjon. Kombinasjonsindeksen ble beregnet i henhold til formel (6):
Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 indikerer en antagonistisk effekt, CI =1 indikerer en additiv effekt, og CI<1 indicates a synergistic effect.
1.7 Dataanalyse
Alle data uttrykkes som "aritmetisk gjennomsnitt ± standardavvik (𝑥̅ ± 𝑠)". Graf Prism 9.5. 0 programvare ble brukt til statistisk analyse. Enveis variansanalyse ble brukt til sammenligning mellom flere grupper. P<0.05 was considered statistically significant.
