T-celle-avledet interleukin-22 driver uttrykket av CD155 av kreftceller for å undertrykke NK-cellefunksjon og fremme metastase

SAMMENDRAG

Selv om T-celler kan utøve kraftig antitumorimmunitet, er en undergruppe av T-hjelper (Th)-celler som produserer interleukin-22 (IL-22) i bryst- og lungetumorer knyttet til dystre pasientresultater. Her undersøkte vi mekanismene hvorved disse T-cellene bidrar til sykdom. I murine modeller av lunge- og brystkreft reduserte konstitusjonell og T-cellespesifikk sletting av Il22 metastaser uten å påvirke primær tumorvekst. Sletting av IL-22-reseptoren på kreftceller reduserer metastasering i en grad som ligner på den man ser hos mus med IL-22-mangel. IL-22 induserte høy ekspresjon av CD155, som bandt seg til den aktiverende reseptoren CD226 på NK-celler. Overdreven aktivering førte til reduserte mengder CD226 og funksjonshemmede NK-celler, noe som økte metastaseringsbyrden. IL-22-signalering var også assosiert med CD155-uttrykk i menneskelige datasett og med dårlige pasientresultater. Samlet viser funnene våre en immunsuppressiv krets aktivert av T-celle-avledet IL-22 som fremmer lungemetastaser.

Fordeler med cistanche tubulosa-Antitumor

INTRODUKSJON

Det viktigste kjennetegnet ved neoplastisk progresjon og den primære årsaken til kreftrelatert dødelighet er kreftcellenes evne til å spre seg til sekundære steder og danne metastaser.1,2 Dannelsen av metastaser kan forhindres ved immunovervåking som involverer naturlig morder (NK), cytotoksisk , og T-hjelper (Th) 1-celler.3,4 I motsetning til dette danner regulatoriske T-celler (Treg), sirkulerende monocytter og Th-celle-avledet IL-17A et immunsuppressivt mikromiljø, som muliggjør immunflukt og fremmer metastaser. 4–6 Derfor er det avgjørende å identifisere signalkaskader som definerer funksjonen til antitumorogene immunceller.7,8 Interleukin-22 (IL-22) er et cytokin produsert av Th17 og, hos mennesker, også av Th1-undergruppen, kjent for å fremme kreftcellevekst, øke migrasjon, beskytte mot apoptose, indusere epitel-til-mesenkymal overgang og opprettholde stammen til ondartede celler.9–13 Det fremmer også tidlig karsinogenese, virker på forløperlesjoner eller umodne kreftstamceller.14–18 IL-22-produserende celler, hovedsakelig Th-celler, men også gamma delta (gd) T-celler, invariante naturlig drepende T (iNKT)-celler og medfødte lymfoide celler (ILCs) ), har blitt påvist i primære kreftlesjoner.19–24 IL-22 uttrykkes ved biologisk relevante nivåer i bryst-, kolon-, lunge-, gastrisk og hepatocellulært karsinom.9,11,12,25,26 I de fleste studier , dets uttrykk er assosiert med dårlig prognose, høyere sykdomsstadium og raskere tumorprogresjon.13,22–24,27–29 IL-22 virker utelukkende gjennom IL-22-reseptoren (IL{{40 }}R) består av to underenheter, IL-22RA1 og IL-10RB.30,31 Virkningen til utskilt IL-22 moduleres av en inhibitor, IL{{47} } bindende protein (IL-22BP, IL-22RA2), en homolog av IL-22RA1, som hovedsakelig produseres av myeloide celler.32,33 Under steady-state forhold, IL -22 er et essensielt homeostatisk cytokin ved epitelbarrierer som tarm, lunge og hud.34,35 På disse stedene fremmer IL-22 beskyttelse, regenerering og reparasjon for å opprettholde barriereintegriteten,36, 37 og dets fravær forverrer inflammasjonsindusert karsinogenese.13,38 Sammen fremhever disse dataene de brede, kontekstavhengige funksjonene til IL-22 både i fysiologiske og patologiske tilstander. Ved reseptorbinding utløser IL-22 Janus-kinasene Jak1 og Tyk2 til å fosforylere STAT3, STAT1 eller STAT5, men IL-22 kan initiere andre nedstrømsveier, inkludert den mitogenaktiverte proteinkinaser (MAPK)-kaskaden eller PI3K-AktmTOR-signalering, avhengig av den cellulære konteksten.13,36,39–44 Dette mangfoldet av signalveier reflekteres av mangfoldet av fysiologiske effekter som har blitt assosiert med IL-22-signalering, inkludert de som er beskrevet ovenfor, samt beskyttelse mot genotoksisk skade og induksjon av antibakterielle peptider, slim, pro- og antiinflammatoriske cytokiner og kjemokiner.36,38,39,45,46 Kreftceller induserer produksjonen av IL-22 fra Th-celler i bryst- og lungekreftpasienter.12,47,48 NLRP3 inflammasomdrevet frigjøring av IL-1b induserer IL-22-produksjon fra T-celler i svulsten, og begge IL-22+ Th-celler og en NLRP3-IL-1b-signatur kan finnes i svulstprøver av bryst- og lungekreft.48,49 Her har vi satt ut for å avgrense en mekanisme der IL-22 fremmer progresjon av bryst- og lungekreft. Vi fant at IL-22 fremmer spredning av metastaser til lungen, og avslører en krets der IL-22 mediert immunsuppresjon i den metastatiske nisjen ved å fremme ekspresjonen av CD155 på kreftceller, som var assosiert med redusert ekspresjon av CD226 på NK-celler og redusert interferon-g (IFNg) produksjon. Kliniske data indikerer at aktivering av slike veier er knyttet til pasientutfall.

RESULTATER

cistanche supplement fordeler-øke immunitet

IL-22 påvirker spredte kreftceller i syngene musemodeller av lunge- og brystkarsinom

To understand the impact of the IL-22-IL-22R1 signaling axis on cancer progression, we analyzed syngeneic murine models of breast and lung carcinoma. As cancer patients mostly succumb to metastatic disease, we recapitulated this with phenotypically relevant models. We implanted either 4T1 breast cancer or Line-1 lung cancer cells subcutaneously (s.c.) in the right flank of wild-type mice (WT) and mice lacking IL-22 expression (Il22 / ) (Figure 1A). IL-22 did not impact the outgrowth of the primary tumors in either model (Figures 1B and 1C). Upon reaching pre-defined termination criteria (tumor >225 mm2 eller sårdannelse), var lungene hovedmetastaseringsstedet i vår modell med sporadiske metastaser funnet andre steder (ikke vist). Il22 / mus viste redusert metastatisk spredning av Line-1- og 4T1-celler til lungen sammenlignet med villtypedyr uavhengig av den primære tumorstørrelsen ved bruk av forskjellige metoder for metastasedeteksjon (figur 1B, 1C og S1A). Vi har også observert en lignende metastatisk fenotype i en ortotopisk modell av brystkreft, der 4T1-celler ble implantert i brystfettputen (figur S2B). Alle brukte metoder for blindet makroskopisk telling, klonogene analyser eller histologi viste høy konsistens når det gjaldt å oppdage lavere metastatisk belastning hos Il22 / dyr (figur 1B, 1C og S1C). Dette impliserer den sentrale rollen til IL-22 i den metastatiske prosessen. Deretter tvang vi metastasering gjennom intravenøs kreftcelleinjeksjon, som omgår behovet for vevsløsning og invasjon (figur 1D). Intravenøse (iv) injeksjoner av begge cellelinjene speilet fenotypen i den subkutane modellen. Vi kunne faktisk bekrefte en lavere metastatisk belastning i Il22 / mus (figur 1E og 1F). Disse resultatene indikerer en spesifikk rolle for IL-22 i spredte celler i sirkulasjon. For å skjelne stammespesifikke effekter brukte vi en E0771 brystkreftmodell (Figur 1G).50,51 Intravenøs injeksjon av E0771- GFP-celler avslørte en redusert metastatisk byrde i Il22 / dyr validert ved flowcytometri (Figur 1H og S1D). Tilsvarende observerte vi en lavere metastatisk belastning i leveren til mus når E0771-GFP-celler ble injisert intrasplenisk (figur S1E). Hele venstre lunge til E0771-GFP-injiserte mus ble optisk renset etter en iDISCO-protokoll for å kvantifisere metastaser med lysarkmikroskopi in situ (Figur 1I).52 Her viste Il22/mus en redusert tilbøyelighet til å utvikle metastaser , mens størrelsen på de visualiserte metastasene ikke var forskjellig og hadde ikke noe spesifikt mønster for deres lokalisering (figur 1J). Oppsummert, IL-22 virket på spredte kreftceller, og muliggjorde bryst- og lungekreftmetastaser til lungen.

T-celler er den relevante kilden til IL-22 i den metastatiske nisjen i lungen

Vi har tidligere identifisert CD4+ T-celler som hovedkilden til IL-22 i primære humane lungetumorer og bronkoalveolære lavageprøver.12,47,48 For å avgrense kilden til IL-22 i lungene til modellene våre injiserte vi intravenøst ​​E0771-celler i Foxp3mRFP Il17aGFPIl22sgBFP-reporterdyr og kvantifiserte IL-22+-celler ved bruk av flowcytometri (figur 2A og S2A).53 Populasjoner ble definert som CD{{14{1}5, CD{14{1}5, CD }} og dobbeltnegative (DN) (CD4 , CD8 ) ab T-celler (CD3+ gdTCR NK1.1 ), gd T-celler (CD3+ gdTCR+ NK1.1 ), og CD{{ 26}} NK1.1+ og CD3 NK1.1+ celler (figur 2B og S2B). Vi observerte en økning i andelen CD4+, CD8+ T-celler og NK1.1+-celler som produserte IL-22 i lungene til tumorinjiserte dyr ( Figurene 2C, S2C og S2D). Her utgjorde CD4+ og CD8+ T-celler majoriteten av IL-22-produserende celler i tumorbærende mus (figur 2C). Dessuten identifiserte vi at slike CD4+ T-celler produserte IL-22 men ikke IL-17A (figur 2D). Disse cellene hadde lav CD44-ekspresjon, noe som bekrefter hukommelsesfenotypen i tråd med våre tidligere observasjoner (figur S2E).48 For å utforske disse funnene videre på tvers av modeller brukte vi intracellulær farging for å vurdere produksjonen av IL-22 i linjen{ {56}} sc-modell, som ga lignende resultater bortsett fra en redusert brøkdel av CD8+ T-celle IL-22-produsenter (figurene S2F–S2I). Vi kunne også identifisere at IL-22+-celler ikke co-uttrykte IFNg, noe som skiller muse-IL-22-produsenter fra Th1-undergruppen (Figur 2G).49 Videre brukte vi konfokalmikroskopi på presisjonskutt lungeskiver fra reporterdyr for å undersøke deres romlige fordeling i lungene til tumorinjiserte mus. Her kunne vi identifisere at slike IL-22- og IL-17A-produsenter lokaliserer seg nesten utelukkende til de metastatiske fociene (Figur 2E). Som demonstrert med flowcytometri fant vi ingen korrelasjon mellom IL-22 og IL-17En produksjon fra reportercellene i de metastatiske fociene, noe som indikerer at IL-22 og IL-17 produseres faktisk av to forskjellige cellulære undergrupper. Vi bekreftet også at en stor del av IL-22-produserende celler er CD4+ T-celler (figur 2E). Siden disse dataene indikerte en dominerende rolle for T-celler i IL-22-produksjon, genererte vi en Il22floxCd4cre-mus med en betinget sletting av Il22 i alle modne T-celler (figur 2F). Når de ble utfordret med E0771-GFP-celler, hadde Il22floxCd4cre-mus en redusert tilbøyelighet til å utvikle metastaser i lungen, noe som minner om fenotypen observert i de globale Il22/dyrene (Figur 2F). Vi kunne imidlertid også bekrefte at cre-recombinase under kontroll av CD4-promotoren fullstendig opphevet IL-22-produksjonen ikke bare i CD4+, men også i CD8+ T-celler isolert fra milten av Il22floxCd4cre-mus, og derfor kunne ikke denne modellen brukes til å finne en spesifikk kilde til IL-22 (figur S2J). For å bekrefte rollen til Th-celler som den avgjørende kilden til IL-22 i modellen vår, overførte vi villtype- og Il22/CD{101}}-T-celler til Rag1/II22/-dyr som senere mottok E{{ 104}} GFP-celler iv (Figur 2G). Her kunne vi bekrefte at IL-22 produksjon av adoptivt overførte CD4+ T-celler er tilstrekkelig til å fremme lungemetastaser i modellen vår, men avskaffet ved bruk av CD4+ T-celler isolert fra II22/dyr (Figur 2G). Det er viktig at forskjeller i metastase ble påvirket av T-celletransplantasjon ved overføring (figur S2K). Som konklusjon identifiserte vi Th-celler som en tilstrekkelig kilde til IL-22 som driver metastaser i lungene til tumorbærende mus, og deretter forsøkte vi å identifisere den relevante målcellen.

Figur 1. IL-22-knockout reduserer antall lungemetastaser, men påvirker ikke tumorvekst i syngene musemodeller av lunge- og brystkarsinom

Figur 2. T-celler er den primære kilden til IL-22 i lungene til tumorbærende mus

Ekspresjonen av IL-22RA1 på tumorceller er uunnværlig for dannelsen av metastaser

IL-22RA1-uttrykk er begrenset til ikke-hematopoietiske celler og fungerer som en begrensende faktor for IL-22-signalering. For å undersøke dens innflytelse på den metastatiske fenotypen, genererte vi en stabil Il22ra1-sletting i 4T1- og Line-1-celler (figur 3A). I tråd med våre tidligere funn var tumorvekst av 4T1 Il22ra1-celler stort sett upåvirket sammenlignet med 4T1-kontrollceller (figur 3B). Mus som ble injisert med 4T1 Il22ra1-celler sc eller iv hadde imidlertid færre makroskopiske og klonogene metastaser i lungen sammenlignet med kontroll 4T1-celler (figur 3B og 3C). For å bekrefte at denne effekten ikke er klonavhengig, genererte og analyserte vi tre Line-1 Il22ra1-kloner og testet dem mot tre kontrollkloner, som ga lignende resultater (figur 3D og 3E). Dette bekrefter at IL-22RA1-uttrykkende kreftceller er det relevante målet for IL-22 i drivende lungemetastaser. For å utelukke effektene av metoden utenfor målet, brukte vi IL-22BP for å hemme IL-22-signalering. Vi etablerte 4T1 og Line-1 cellelinjer som konstitutivt utskilte IL-22BP (Il22ra2+) (Figur S3A). Når de ble injisert sc, vokste Line-1 Il22ra2+-celler sammenlignbart med kontrollen på implantasjonsstedet, som tidligere sett i Il22ra1-modellene og Il22/musene, selv om 4T1 Il22ra2+-celler vokste langsommere (Figur S3B). Her hadde 4T1 Il22ra2+-celler et stort sett redusert antall metastaser når de ble injisert sc (figur S3B og S3C). Til tross for større variasjon, dannet Line-1 Il22ra2+-cellene også færre metastaser når de ble injisert sc eller iv (figur S3D og S3E). Dermed etterlignet IL-22-nøytralisering gjennom IL-22BP i stor grad fenotypen observert med Il22ra1-celler og Il22/mus, noe som bekrefter relevansen til cytokinet for den metastatiske prosessen.

cistanche supplement fordeler-øke immunitet

IL-22 kontrollerer utveksten av tumorceller under det tidlige stadiet av metastatisk engraftment

To determine the role of IL-22 signaling during the dissemination process, we analyzed the kinetics of metastatic seeding in our models. For this, we injected 4T1-GFP cells i.v. and analyzed lungs at 12 and 48 h after injection (Figure S4A). We used confocal microscopy to quantify the numbers of GFP+ colonies (defined as cell clusters of >100 mm) og individuelle celler per mm2 lungevev (figur S4B). Vi kunne ikke oppdage forskjeller 12 timer etter injeksjon, noe som indikerer at såingen kanskje ikke er vesentlig påvirket av IL-22 (figurene S4C og S4D). På 48-t-tidspunktet reduserte imidlertid antallet GFP+-celler og kolonier i lungene til Il22/mus (figurene S4C og S4D). Dette antydet en rolle for IL-22 i å forårsake tidlig metastasering i lungene. For å vurdere spredningshastigheten injiserte vi mus med 5-etynyl-20 -deoksyuridin (EdU) 4 timer før undersøkelse 12, 24, 48 timer og 7 dager etter tumorinjeksjon (Figur S4E) . I likhet med mikroskopisk telling oppdaget vi ikke forskjeller i antall GFP+-celler tidligere enn 48 timer etter injeksjon (figurene S4F–S4G). Derimot kunne vi oppdage forskjeller i EdU-inkorporering, noe som indikerer en høyere brøkdel av delende celler bare på dag 7 etter injeksjon (figur S4G). Derfor begrunner vi at forskjeller i lungetumorbelastning påvirket av IL -22 observert så tidlig som 48 timer er mediert av en mekanisme uavhengig av spredning.

Figur 3. IL-22RA1-ekspresjon på tumorceller er uunnværlig for metastasedannelse

IL-22 regulerer uttrykket av CD155 på tumorceller og fremmer derved metastasering

Basert på funnene våre om at IL-22 virker på IL-22ra1+-kreftceller for å fremme metastase, utførte vi bulk-RNA-sekvensering av 4T1-celler behandlet med IL-22 for å avgrense ytterligere den underliggende mekanismen (GEO: GSE202314) (Figur 4A). Vi oppdaget 147 gener som var differensielt regulert. Av disse ble ekspresjonen av 133 gener økt, og 14 redusert ved IL-22-behandling (figur 4B og S5A). Vi validerte Pvr (poliovirusreseptor, Pvr) som et av de mest betydelig økte målene ved å bruke qPCR (Figur S5B). Dette er bemerkelsesverdig fordi CD155, produktet av Pvr, er overuttrykt i ulike kreftformer og har tumorfremmende egenskaper, inkludert metastase.54–56 For å bekrefte funnene våre evaluerte vi uttrykket av CD155 i IL-22-stimulert 4T1, Linje-1 og E0771-celler ved flowcytometri (figur 4C). Vi oppdaget en økning i ekspresjonen av CD155 i alle cellelinjer over 72 timer (figur 4D og 4E), men denne effekten var fraværende i celler som mangler IL-22RA1 (figur S5C). Deretter evaluerte vi virkningen av IL-22 på CD155-ekspresjon i E0771-GFP-celler fra lungene til tumorbærende mus (figur 4F). Her kunne vi bekrefte at celler implantert i Il22 / mus hadde et lavere uttrykk for CD155, noe som korrelerte med en mindre andel av E0771-GFP-celler detektert ved flowcytometri (figur 4G og 4H). For å bekrefte rollen til CD155 i metastaser etablerte vi Pvr Line-1 og 4T1 cellelinjer (figur 4I, S5D og S5G). Selv om dette hadde liten effekt på deres evne til å vokse subkutant (figur S5E og S5F), opphevet det evnen til å danne metastaser i lungen (figur 4J og S5H). Vi kunne reversere denne prosessen ved konstitutiv CD155-ekspresjon i Pvr-celler uavhengig av IL-22-indusert regulering (Pvr+).

Figur 4. IL-22-signalering øker ekspresjonen av CD155 på overflaten av tumorceller og gir motstand mot metastasekontroll

I denne innstillingen kunne vi indusere metastaser i lungene til Il22 / mus, og fremheve koblingen mellom disse to molekylene og deres rolle som mediatorer av den metastatiske prosessen (figur 4K og S5I).

CD155 på tumorceller er assosiert med redusert ekspresjon av CD226 på NK-celler og redusert IFNg-produksjon

CD155 spiller en iboende rolle i spredning og adhesjon i kreftceller, blant annet 54–57. Vi oppdaget ikke mangler i spredningen av Line-1 Pvr-celler in vitro (data ikke vist). Viktigere er at CD155 har en celleekstrinsisk pro-metastatisk rolle ved å binde seg til de immunmodulerende reseptorene CD96, CD226 eller TIGIT på overflaten av NK- og T-celler.54–56,58,59 For å finne bindingspartnerne til CD155, analyserte vi antitumorresponser i lungene til mus som inneholder 4T1-luciferase+-celler (4T1-Luc) (Figur 5A). Vi bekreftet ved bruk av et in vivo bildesystem (IVIS) at villtype og Il22 / mus hadde lignende såing av tumorceller på dag 5 etter injeksjon, og forskjellene i tumorbelastning økte i løpet av to uker (figur 5B og 5C) . Faktisk viste defekten av IFNg-produksjon av NK-celler, men ikke andre celletyper, tapet av humorale effektormekanismer (figur 5D, 5E og S6A) og korrelerte med høyere tumorbyrde (figur S6B). Denne effekten ble konsekvent funnet i Line-1 sc-modellen (figurene S6C–S6E). Gransket med chipcytometri, viste 60 prøver fra 4T1-lungemetastasebærende mus økt ekspresjon av CD155 i de metastatiske fociene i WT, men ikke i Il22/dyr (figur 5F og S6F). Vi fant høyere infiltrasjon av NK-celler i de metastatiske fociene til Il22 / men ikke WT-dyr, noe som tyder på høyere aktivering og bekrefter avhengigheten av NK-celler som antitumoreffektorceller (Figur 5F). CD226, men ikke TIGIT eller CD96, ble differensielt uttrykt av NK-celler og, i mindre grad, av CD8+ T-celler i lungene til villtype og Il22/dyr (figur 5G og S6G–S6H). CD226 er en koreseptor som er essensiell for aktivering av effektorfunksjoner til NK- og CD8-T-celler. Derfor satte vi oss for å utforske dens patofysiologiske relevans i vår modell.61–64

cistanche tubulosa-forbedre immunsystemet

Blokade av CD226 opphever den anti-metastatiske fenotypen til IL--22-mangelfulle dyr

Overdreven CD155-mediert signalering tilstede i tumormikromiljøet kan indusere internalisering og degradering av CD226 i effektorceller.61,63 For å avgrense rollen til overdreven CD155-ekspresjon på CD226 og påfølgende antitumorrespons, injiserte vi 4T1-kontroll og Pvr+-celler iv i Il22/-mus, og to grupper mottok også anti-CD226-blokkerende antistoff (480.1) (Figur 6A). Både Pvr+-celler og CD226-blokkering kunne på samme måte fremme lungemetastase i Il22/mus, og disse effektene hadde ikke synergi (Figur 6B). I likhet med våre tidligere observasjoner i villtype dyr, var dette tilstrekkelig til å hemme IFNg-produksjon av NK-celler (figur 6C). Til slutt oppdaget vi en reduksjon i CD226-ekspresjon på NK-celler i Pvr+-injiserte mus sammenlignet med kontrollceller. Dette korrelerte med den reduserte kapasiteten til disse NK-cellene til å produsere IFNg (figur 6D). Videre undersøkte vi potensialet til agonistisk TIGIT-antistoff (IG9) for å hemme NK-celleaktivering i Il22 / dyr og CD96-blokkering (3.3) for å forhindre hemming av NK-cellefunksjon (Figur 6E). Verken TIGIT-agonisten eller CD96-antagonisten endret antall metastaser sammenlignet med Il22/dyr som mottok henholdsvis kontroll- eller Pvr+ 4T1-celler (figur 6F). Når den er aktivert, kan TIGIT hemme IFNg-produksjon fra CD8+ T, men ikke NK-celler (Figur 6G). Dermed utløser en IL-22- CD155-akse redusert ekspresjon av CD226 i NK-celler og gjør dem inerte i tumormikromiljøet.

CD155-uttrykk utfyller IL-22-gensignaturen hos bryst- og lungekreftpasienter

Til slutt vurderte vi den kliniske relevansen til CD155 i sammenheng med IL-22-IL-22RA1-aksen. CD155-ekspresjon alene er assosiert med ugunstig prognose i en rekke kreftenheter.54 Vi analyserte RNA-sekvenseringsdata fra kreftgenomatlaset (TCGA) lungeadenokarsinom (TCGA: LUAD, n=504) og HER2- positive pasientprøver fra det invasive brystkarsinom (TCGA: BRCA, n=110) ​​datasett. Vi fokuserte på viktige IL-22-relaterte gener: IL22RA1, IL22RA2, IL10RB og PVR. For å stratifisere pasientkohorter, brukte vi agglomerative clustering, en uovervåket klyngemetode, noe som resulterte i tre hovedklynger (figur 7A og 7B). Dette avslørte særegne genuttrykksmønstre: klynge 0 (IL22RA1hi, IL22RA2lo, IL10RBmed, PVRhi), klynge 1 (IL22RA1lo, IL22RA2hi, IL10RBhi, PVRlo) og klynge 2 (IL22RA1lo, IL22RA2lo, IL10RBlo, PVRmed) (Figur 7C). Disse klyngene var jevnt fordelt i disse to kohortene (Figur 7D). Pasienter i klynge 0 og LUAD datasett klynge 2 hadde dårligere overlevelse enn pasienter i klynge 1 (Figur 7E). Overlevelsen av klyngene 1 og 2 var ikke forskjellig i begge kohorter (figur 7E). Videre beregnet vi begrensede gjennomsnittlige overlevelsestider (RMST) for klyngene 0 og 1 for å kvantifisere forskjellen i forventet overlevelsestid frem til fem års oppfølging, noe som resulterte i 361,18 dager for LUAD og 93,23 dager for BRCA (Figur 7F). Klynge 0 og 1 hadde forskjeller i frekvensen av patologiske sykdomsstadier i seg i LUAD, men ikke i BRCA-kohorten (Figur 7G). Viktigere er at slike overlevelsesforskjeller mellom klynger (IL22RA1hiPVRhi) og 1 (IL22RA1loPVRlo) hovedsakelig stammer fra pasienter diagnostisert i de tidlige (I og II), men ikke i avanserte stadier av sykdommen (III og IV) (Figur S7A). For å vurdere virkningen av hvert gen på overlevelse, brukte vi Cox sin proporsjonale faremodell. Både IL22RA1 (hazard ratio [HR]=1.23) og PVR (HR=1.28) påvirker overlevelsen, mens IL22RA2 og IL10RB ikke endret faren i LUAD-kohorten (Figur S7B). Dessuten var det bare CD226 (p=0.06), men ikke TIGIT eller CD96, som hadde en tendens til å påvirke overlevelsen, i tråd med funnene våre i prekliniske modeller (Figur S7B). Vi brukte CIBERSORTx-dekonvolusjonsalgoritmen på LUAD-kohorten for å vurdere om genekspresjonsmønstre i våre klynger har en innvirkning på immuncelleinfiltrasjon hos pasienter.65 Interessant nok er det en økning i CIBERSORTx-enheter for aktiverte NK-celler i klynge 1 sammenlignet med klynger 0 og 2 hos LUAD-pasienter, mens det ikke var noen forskjeller i hvilende NK-celler eller aktiverte CD{80}}-minne-T-celler (figur S7C) med en lignende trend i BRCA-kohorten (figur S7D). Sammen viser disse resultatene fra kliniske kohorter relevansen av en regulatorisk kobling mellom T-celle-avledet IL-22 og CD155.

Figur 5. CD226-ekspresjon er høyere på NK-celler i Il22–/– mus

DISKUSJON

I denne studien oppdaget vi en mekanisme der T-celler produserer IL-22 for å fremme lungemetastaser i musemodeller av lunge- og brystkreft. Mekanistisk produserer T-celler ved de metastatiske fociene i lungen, hovedsakelig CD4+, IL-22 som signaliserer direkte gjennom sin reseptor uttrykt i kreftceller, og fremmer ekspresjon av det pro-metastatiske molekylet CD155.{{ 5}},58,59 Til tross for det godt studerte pan-cancer-uttrykket av CD155 og dets iboende og ytre roller i kreftprogresjon,54 forblir veien som er ansvarlig for CD155-regulering i ondartede celler unnvikende.66–68 Vi demonstrerte at IL{{ 15}} økte CD155-ekspresjon i lunge- og brystkreftcellelinjer in vitro og in vivo, mens dets konstitutive uttrykk muliggjorde metastaser i Il22/mus, sammenlignet med kontrollceller og mangelfulle celler. Økt ekspresjon av CD155 i tumorlungemikromiljøet førte til en reduksjon av co-stimulerende molekyl CD226 på NK-celler, noe som reduserte deres lokalisering til metastaser og IFNg-produksjon, som korrelerte med høyere tumorbyrde. I våre tidligere studier oppdaget vi en akkumulering av IL-22-produserende T-celler i ikke-småcellet lungekarsinom (NSCLC)-pasienttumorprøver.12,48 Vi har vist at kreftceller utløser NLRP3- avhengig sekresjon av IL-1b som induserer slik IL-22 produksjon hovedsakelig fra Th-celler.18 Verdt å merke seg er at hos mennesker, på grunn av forskjellene i Th-cellens cytokinprofiler, IL{{ 31}} induseres også i Th1-celler. Det kan tenkes at dette kan svekke antitumor-immunresponsen. Det er viktig at slike Th1-varianter delvis kan forklare krefthyperprogresjon ved T-celleaktivering etter sjekkpunktblokkering.69 I tråd med våre tidligere observasjoner bekreftet vi akkumuleringen av IL-22-produserende CD4+ og CD{{38} } T-celler, men også NK1.1+-celler, i den metastatiske nisjen i lungen til tumorinjiserte dyr. Det er viktig å merke seg at vi observerte stammespesifikke forskjeller i akkumuleringen av slike IL-22-produserende CD8+ T-celler på tvers av modellene våre. Avskaffelse av IL-22-produksjonen i totalt modne T-celler var imidlertid tilstrekkelig til å rekapitulere effekten vi observerte hos dyr med IL-22-mangel.70 Også adoptiv overføring av CD4+ T-celler til Rag / II22 / mus var tilstrekkelig til å indusere lungemetastaser, og pekte på Th-cellenes viktigste rolle som en kilde til IL-22. Omvendt tyder våre tidligere funn på at til tross for en akkumulering av CD8+ T-celler i tumorprøver, er deres bidrag til IL-22-poolen mindre.48 Uansett, karakteriseringen av en slik CD{{53 }} IL-22-produserende T-celler er avgjørende for nøye å evaluere deres pro- eller antitumoregenskaper ettersom nye data om denne underpopulasjonen dukker opp.71,72 Dessuten oppveier den primære rollen til NK- og NKT-celler i tumorkontroll deres potensielt bidrag til metastasedannelse gjennom IL-22, som er observert i et Rag / II22 / adoptivt overføringseksperiment med dyr som er blottet for modne T-celler, men som har funksjonelle NK-celler.37 Denne hypotesen støttes ytterligere av funnene våre i metastaseringen foci hvor NK-celler ble funnet mer rikelig enn cytotoksiske T-celler, og fremhever NK-celler som essensielle spillere i tumorkontroll i fravær av IL-22. Det er viktig å merke seg at vi fokuserte på IL-22-produsenter ved metastatiske foci i lungen, men tok ikke hensyn til deres opprinnelse, klonalitet eller deres distribusjon i blod eller lymfoide organer. Dessuten fremmer ulike kilder til IL-22 tumorprogresjon på en kontekstavhengig måte mediert av den pleiotrope virkningen til dette cytokinet. På denne måten kan lignende IL--22-produserende celler i ulike avdelinger (lunge vs. milt vs. lymfeknute) påvirke protumorale fenotyper forskjellig eller ikke ha noen funksjon avhengig av konteksten, noe som må undersøkes nærmere. Kreftstudier rapporterer gjentatte ganger at IL-22 påvirker utviklingen og veksten av primære svulster og til slutt neoplastisk progresjon.26,73–76 Denne oppfatningen er hovedsakelig rettferdiggjort av evnen til å fremme migrasjon, invasjon og stammen til kreftceller in vitro og dermed fremme metastasedannelse.76,77 Det er viktig at ablasjon av IL-22 kan lindre det immunsuppressive mikromiljøet i en Kras-mutant modell av lungekarsinom.14 I den nåværende studien viste vi at den økte metastaseringsbyrden var en direkte effekt av IL-22 på disseminerte IL-22RA1+-tumorceller, noe som resulterte i økt koloniutvekst. Viktigere er at dataene våre formelt ikke utelukker en innvirkning på ikke-tumorceller. Som sådan er påvirkningen av IL-22 på tumorcellespredning gjennom den iboende virkningen av endogent uttrykt IL-22R omfattende fremhevet av Giannou et al.78

Figur 6. CD226-signalering er uunnværlig for IFNg-produksjon fra NK-celler

Vi viste at Pvr er et av genene med økt ekspresjon på kreftceller ved IL-22-behandling. I denne sammenhengen dannet CD155-mangelceller få metastaser, både i villtype og Il22/mus, og, viktigere, gjeninnføringen av CD155 tillot oss å rekonstituere den metastatiske fenotypen. Den iboende rollen til CD155 i kreftceller har blitt godt studert og er kjent for å påvirke seeding, tumorcelleproliferasjon og migrasjon.56,57 Pvr-celler viste imidlertid ikke hemmet spredning eller migrasjon i våre hender, og seeding av tumorceller var upåvirket i Il22 / mus. Opprinnelig identifisert på antigenpresenterende celler, fungerer CD155 som en ekstrinsisk promotor for tumorprogresjon som undertrykker NK- og T-cellefunksjon ved å binde seg til CD96 og TIGIT på overflaten og induserer internalisering og nedregulering av CD226.56,61–64,79–85Due til sin immunsuppressive funksjon utøver CD155 i kreft- og vertsceller pro-metastatiske egenskaper og er foreslått som et mål for sjekkpunkthemmingsblokkade.61, 86 NK-celler mottar et co-stimulerende signal fra antigenpresenterende celler via CD226. 87 Overdreven stimulering av CD226 i tumormikromiljøet fører imidlertid til internalisering og nedbrytning.63 Dette motvirkes typisk av CD96 og TIGIT, som binder CD155 med høyere affinitet.58 Interessant nok er 4T1-celler kjent for å indusere CD226-nedregulering ved tumorinfiltrering. lymfocytter og undertrykker IFNg-produksjon.88 Her demonstrerte vi at IL-22-mangel bevarte CD226-ekspresjon på NK- og CD8+-T-celler. Imidlertid hadde bare NK-celler dramatisk høyere IFNg-produksjonsevne og var omvendt korrelert med metastatisk belastning. Interessant nok hemmet aktivering av TIGIT-signalering i vår studie IFNg-produksjon fra CD8+ T, men ikke NK-celler, og var ikke tilstrekkelig til å øke den metastatiske byrden. På samme måte ble en annen reseptor for CD155, CD96, verken differensielt regulert i Il22/mus, og hemming derav forhindret heller ikke metastase, noe som indikerer at CD155 ikke undertrykker NK-celler via CD96 i vår modell. Dette fremhever celletypespesifikk regulering av antitumorresponser av CD155 og dets ulike bindingspartnere.

cistanche supplement fordeler-hvordan styrke immunforsvaret

Klikk her for å se Cistanche Enhance Immunity-produkter

【Be om mer】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Virkningen av CD155 på prognosen og dens rolle i patogenesen av lunge-, bryst-, tykktarmskreft og andre typer kreft er etablert.79–85 Det er omfattende bevis på den prognostiske relevansen av IL-22 og dets relaterte gener i ulike kreftenheter.10,21,27,75,89–91 Noen studier rapporterer imidlertid ingen påvirkning av IL-22-uttrykk på overlevelse.12 Selv om disse avvikene kan skyldes heterogeniteten i pasientpopulasjoner, prøvetaking og rapportering av problemer, fokuserer mange av disse studiene på ett enkelt gen relatert til IL-22-signalering. Her brukte vi agglomerativ klynging for å skjelne uttrykksmønstre for IL22RA1, IL22RA2, IL10RB og PVR i LUAD- og BRCA-kohorter i TCGA og knytte dem til de kliniske dataene. Her identifiserte vi tre uttrykksmønstre for disse genene: mønster 0 (IL22RA1hi, IL22RA2lo, PVRhi), mønster 1 (IL22RA1lo, IL22RA2hi, PVRlo) og mønster 2 (IL22RA1lo, IL22RA2lo, PVRmed). Vi identifiserte at høy ekspresjon av IL22RA1 falt sammen med et høyt uttrykk av PVR, som også oversatte til dårlige totale overlevelsesresultater, spesielt hos pasienter diagnostisert med tidlige (I og II), men ikke avanserte (III og IV), patologiske stadier, som fremhever den scenespesifikke rollen til denne mekanismen. Motsatt var høy ekspresjon av IL22RA2, også kjent som IL-22BP, korrelert med lavere PVR-ekspresjon og bedre overlevelse.18,34 Det tredje mønsteret tilsvarte helt lavt uttrykk og representerte immunologisk kalde svulster.92 Langs disse linjene , CIBERSORTx-dekonvolusjon indikerte at klynge 1 karakterisert ved høy IL22RA2-ekspresjon har en gensignatur for aktiverte, men ikke hvilende, NK-celler sammenlignet med andre klynger. CD226-ekspresjon er demonstrert å stratifisere pasienter for utfall i flere NSCLC-studier.93 På grunn av den doble måten for pre- og posttranslasjonell regulering av CD226, reflekteres imidlertid ikke uttrykk alltid i mRNA-sekvenseringsdata.94 Derfor er studier som fokuserer på på post-translasjonell regulering av CD226 evaluere uttrykket i kliniske prøver ved bruk av antistofffarging.63 Likevel, når man avhørte TCGA-datasettet angående forholdet mellom CD155-bindingspartnere og overlevelse, var det bare CD226 som hadde en trend mot bedre prognose (log (HR) {{57 }}.24, p=0.06), mens TIGIT og CD96 ikke viste noen korrelasjon med overlevelse. Det er viktig at tumorceller konstruert for å skille ut IL-22BP dannet færre metastaser, noe som fremhever potensialet til IL-22-veien for målrettet terapeutisk intervensjon. Dette kan motvirke tumor CD155-overekspresjon, da direkte målretting fortsatt er utfordrende på grunn av et komplekst nettverk av ko-reseptorer. Det er videre å merke seg at de langsiktige effektene av IL-22-nøytralisering på metastaser er ukjente, men kan ha en direkte innvirkning på den terapeutiske vurderingen av T-celler eller gi begrunnelsen for IL-22-nøytralisering ved bruk av antistoffer med en gunstig sikkerhetsprofil, som Fezakinumab (prøve NCT01941537) eller konstruert IL-22 med strukturbasert design.39,95 Oppsummert identifiserte vi IL-22-indusert CD155-overekspresjon på tumorcellene som en mekanisme som fordeler metastatisk utvekst. Denne viktige rollen i prognose understreket potensialet til IL-22 som et terapeutisk mål ved kreft. Så langt er nøytralisering av IL-22 hovedsakelig foreslått som en strategi for å behandle autoimmune sykdommer.31,49 Våre data om IL-22BP som en nøytralisator av IL-22, som fenokopierte global IL-22-mangel, underbygget det terapeutiske potensialet for målretting mot IL-22-IL-22R1-aksen og bør utforskes videre i prekliniske og kliniske studier.

REFERANSER

1. Hanahan, D. og Weinberg, RA (2011). Kjennetegn på kreft: neste generasjon. Celle 144, 646–674. https://doi.org/10.1016/j.cell.2011. 02.013.

2. Massague´, J. og Obenauf, AC (2016). Metastatisk kolonisering ved sirkulerende tumorceller. Nature 529, 298–306. https://doi.org/10.1038/ nature17038.

3. Renner, P., Rovira, J., Klein, C., Schlitt, HJ, Geissler, EK og Kroemer, A. (2014). KLRG1(+) naturlige drepeceller beskytter mot lungemetastatisk sykdom ved immunovervåking. OncoImmunology 3, e28328. https://doi.org/10.4161/onci.28328.

4. Mohme, M., Riethdorf, S. og Pantel, K. (2017). Sirkulerende og spredte tumorceller - mekanismer for immunovervåking og rømning. Nat. Rev. Clin. Oncol. 14, 155–167. https://doi.org/10.1038/nrclinonc. 2016.144.

5. Briukhovetska, D., Do¨ rr, J., Endres, S., Libby, P., Dinarello, CA, og Kobold, S. (2021). Interleukiner i kreft: fra biologi til terapi. Nat. Rev. Kreft 21, 481–499. https://doi.org/10.1038/s41568-021-00363-z.

6. Kitamura, T., Qian, BZ og Pollard, JW (2015). Immuncellefremme av metastaser. Nat. Rev. Immunol. 15, 73–86. https://doi.org/10.1038/ nri3789.

7. Galon, J. og Bruni, D. (2020). Tumorimmunologi og tumorevolusjon: sammenvevde historier. Immunitet 52, 55–81. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2019.12.018.

8. Page` s, F., Mlecnik, B., Marliot, F., Bindea, G., Ou, FS, Bifulco, C., Lugli, A., Zlobec, I., Rau, TT, Berger, MD et al. (2018). Internasjonal validering av konsensus Immunoscore for klassifisering av tykktarmskreft: en prognostisk og nøyaktighetsstudie. Lancet 391, 2128–2139. https://doi. org/10.1016/S0140-6736(18)30789-X.

9. Rui, J., Chunming, Z., Binbin, G., Na, S., Shengxi, W., og Wei, S. (2017). IL-22 fremmer progresjonen av brystkreft ved å regulere HOXB-AS5. Oncotarget 8, 103601–103612. https://doi.org/10.18632/ oncotarget.22063.

10. Kryczek, I., Lin, Y., Nagarsheth, N., Peng, D., Zhao, L., Zhao, E., Vatan, L., Szeliga, W., Dou, Y., Owens, S. ., et al. (2014). IL-22(+)CD4(+) T-celler fremmer kolorektal kreftstamme via STAT3-transkripsjonsfaktoraktivering og induksjon av metyltransferasen DOT1L. Immunity 40, 772–784. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2014.03.010.

11. Jiang, R., Tan, Z., Deng, L., Chen, Y., Xia, Y., Gao, Y., Wang, X., og Sun, B. (2011). Interleukin-22 fremmer humant hepatocellulært karsinom ved aktivering av STAT3. Hepatology 54, 900–909. https://doi.org/10.1002/ hep.24486.

12. Kobold, S., Vo¨lk, S., Clauditz, T., K€ upper, NJ, Minner, S., Tufman, A., D€ uwell, P., Lindner, M., Koch, I. ., Heidegger, S., et al. (2013). Interleukin-22 kommer ofte til uttrykk i små- og storcellet lungekreft og fremmer vekst i kjemoterapi-resistente kreftceller. J. Thorac. Oncol. 8, 1032–1042. https://doi.org/10.1097/JTO.0b013e31829923c8.

13. Hernandez, P., Gronke, K. og Diefenbach, A. (2018). En hake-22: interleukin-22 og kreft. Eur. J. Immunol. 48, 15–31. https://doi.org/10. 1002/eji.201747183.

14. Khosravi, N., Caetano, MS, Cumpian, AM, Unver, N., De la Garza Ramos, C., Noble, O., Daliri, S., Hernandez, BJ, Gutierrez, BA, Evans, SE, et al. (2018). IL22 fremmer Kras-mutant lungekreft ved induksjon av en protumor-immunrespons og beskyttelse av stammeegenskaper. Cancer Immunol. Res. 6, 788–797. https://doi.org/10.1158/ 2326-6066.CIR-17-0655. 15. Li, H., Mou, Q., Li, P., Yang, Z., Wang, Z., Niu, J., Liu, Y., Sun, Z., Lv, S., Zhang, B. ., og Yin, C. (2019). MiR-486-5p hemmer IL-22-indusert epitel-mesenkymal overgang av brystkreftceller ved å undertrykke Dock1. J. Cancer 10, 4695–4706. https://doi.org/10.7150/jca.30596.

16. Kim, K., Kim, G., Kim, JY, Yun, HJ, Lim, SC, og Choi, HS (2014). Interleukin-22 fremmer epitelcelletransformasjon og brystsvulstdannelse via MAP3K8-aktivering. Carcinogenesis 35, 1352–1361. https:// doi.org/10.1093/carcin/bgu044.

17. Katara, GK, Kulshrestha, A., Schneiderman, S., Riehl, V., Ibrahim, S., og Beaman, KD (2020). Interleukin-22 fremmer utviklingen av ondartede lesjoner i en musemodell av spontan brystkreft. Mol. Oncol. 14, 211–224. https://doi.org/10.1002/1878-0261.12598.

18. Huber, S., Gagliani, N., Zenewicz, LA, Huber, FJ, Bosurgi, L., Hu, B., Hedl, M., Zhang, W., O'Connor, W., Jr., Murphy, AJ, et al. (2012). IL-22BP reguleres av inflammasomet og modulerer tumorgenese i tarmen. Nature 491, 259–263. https://doi.org/10.1038/ nature11535.

19. Perez, LG, Kempski, J., McGee, HM, Pelzcar, P., Agalioti, T., Giannou, A., Konczalla, L., Brockmann, L., Wahib, R., Xu, H., et al. (2020). TGFbeta-signalering i Th17-celler fremmer IL-22-produksjon og kolitt-assosiert tykktarmskreft. Nat. Commun. 11, 2608. https://doi.org/10.1038/ s41467-020-16363-w.

20. Meyer, A., Stark, M., Karstens, JH, Christiansen, H. og Bruns, F. (2012). Langerhans celle histiocytose av kraniebasen: er lavdose strålebehandling effektiv? Saksrepresentant Oncol. Med. 2012, 789640. https:// doi.org/10.1155/2012/789640.

21. Zhuang, Y., Peng, LS, Zhao, YL, Shi, Y., Mao, XH, Guo, G., Chen, W., Liu, XF, Zhang, JY, Liu, T., et al. (2012). Økt intratumoral IL-22-produserende CD4(+) T-celler og Th22-celler korrelerer med magekreftprogresjon og forutsier dårlig pasientoverlevelse. Cancer Immunol. Immunother. 61, 1965–1975. https://doi.org/10.1007/s00262-012- 1241-5.

22. Chen, X., Wang, Y., Wang, J., Wen, J., Jia, X., Wang, X. og Zhang, H. (2018). Akkumulering av T-hjelper 22-celler, interleukin-22 og myeloid-avledede suppressorceller fremmer magekreftprogresjon hos eldre pasienter. Oncol. Lett. 16, 253–261. https://doi.org/10.3892/ol.2018.8612.

23. Doulabi, H., Rastin, M., Shabahangh, H., Maddah, G., Abdollahi, A., Nosratabadi, R., Esmaeili, SA, og Mahmoudi, M. (2018). Analyse av Th22-, Th17- og CD4(+)-celler som samproduserer IL-17/IL-22 i forskjellige stadier av human tykktarmskreft. Biomed. Pharmacother. 103, 1101–1106. https://doi.org/10.1016/j.biopha.2018.04.147.

24. Zeng, H., Liu, Z., Wang, Z., Zhou, Q., Qi, Y., Chen, Y., Chen, L., Zhang, P., Wang, J., Chang, Y. ., et al. (2020). Intratumoral IL22-produserende celler definerer immunevasiv subtype muskelinvasiv blærekreft (2017). En beskyttende funksjon av IL-22BP ved iskemi-reperfusjon og acetaminophen-indusert leverskade. J. Immunol. 199, 4078–4090. https://doi. org/10.4049/jimmunol.1700587.

25. Jiang, R., Wang, H., Deng, L., Hou, J., Shi, R., Yao, M., Gao, Y., Yao, A., Wang, X., Yu, L. ., og Sun, B. (2013). IL-22 er relatert til utvikling av human tykktarmskreft ved aktivering av STAT3. BMC Cancer 13, 59. https://doi.org/10.1186/1471-2407-13-59.

26. Fukui, H., Zhang, X., Sun, C., Hara, K., Kikuchi, S., Yamasaki, T., Kondo, T., Tomita, T., Oshima, T., Watari, J. ., et al. (2014). IL-22 produsert av kreftassosierte fibroblaster fremmer invasjon av magekreftceller via STAT3- og ERK-signalering. Br. J. Cancer 111, 763–771. https://doi.org/ 10.1038/bjc.2014.336.

27. Liu, T., Peng, L., Yu, P., Zhao, Y., Shi, Y., Mao, X., Chen, W., Cheng, P., Wang, T., Chen, N. ., et al. (2012). Økt sirkulerende Th22- og Th17-celler er assosiert med tumorprogresjon og pasientoverlevelse ved human gastrisk kreft. J. Clin. Immunol. 32, 1332–1339. https://doi.org/10.1007/ s10875-012-9718-8.

28. Niccolai, E., Taddei, A., Ricci, F., Rolla, S., D'Elios, MM, Benagiano, M., Bechi, P., Bencini, L., Ringressi, MN, Pini, A. ., et al. (2016). Intratumorale IFN-gamma-produserende Th22-celler korrelerer med TNM-stadie og de verste utfallene ved kreft i bukspyttkjertelen. Clin. Sci. 130, 247–258. https:// doi.org/10.1042/CS20150437.

29. Xu, X., Tang, Y., Guo, S., Zhang, Y., Tian, ​​Y., Ni, B. og Wang, H. (2014). Økte intratumorale interleukin 22-nivåer og frekvenser av interleukin 22-produserende CD4+ T-celler korrelerer med progresjon av kreft i bukspyttkjertelen. Pancreas 43, 470–477. https://doi.org/10.1097/MPA.000000000000 0055.

30. Kotenko, SV, Izotova, LS, Mirochnitchenko, OV, Esterova, E., Dickensheets, H., Donnelly, RP, og Pestka, S. (2001). Identifikasjon av det funksjonelle interleukin-22 (IL-22) reseptorkomplekset: IL-10R2-kjeden (IL-10Rbeta ) er en felles kjede av både IL{{7 }} og IL-22 (IL- 10-relaterte T-celle-avledet induserbar faktor, IL-TIF) reseptorkomplekser. J. Biol. Chem. 276, 2725–2732. https://doi.org/10.1074/jbc.M0078 37200.

31. Ouyang, W. og O'Garra, A. (2019). IL-10 familiecytokiner IL-10 og IL- 22: fra grunnleggende vitenskap til klinisk oversettelse. Immunity 50, 871–891. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2019.03.020.

32. Kempski, J., Giannou, AD, Riecken, K., Zhao, L., Steglich, B., L€ucke, J., Garcia-Perez, L., Karstens, KF, Wo¨ stemeier, A. Nawrocki, M., et al. (2020). IL22BP medierer antitumoreffektene av lymfotoksin mot kolorektale svulster hos mus og mennesker. Gastroenterology 159, 1417– 1430.e3. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2020.06.033.

33. Kotenko, SV, Izotova, LS, Mirochnitchenko, OV, Esterova, E., Dickensheets, H., Donnelly, RP, og Pestka, S. (2001). Identifikasjon, kloning og karakterisering av en ny løselig reseptor som binder IL-22 og nøytraliserer aktiviteten. J. Immunol. 166, 7096–7103. https://doi. org/10.4049/jimmunol.166.12.7096.

34. Dudakov, JA, Hanash, AM og van den Brink, MRM (2015). Interleukin-22: immunbiologi og patologi. Annu. Rev. Immunol. 33, 747–785. https://doi.org/10.1146/annurev-immunol-032414-112123.

35. Wolk, K., Kunz, S., Witte, E., Friedrich, M., Asadullah, K., og Sabat, R. (2004). IL-22 øker den medfødte immuniteten til vev. Immunitet 21, 241–254. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2004.07.007.

36. Sabat, R., Ouyang, W. og Wolk, K. (2014). Terapeutiske muligheter for IL-22-IL-22R1-systemet. Nat. Rev. Drug Discov. 13, 21–38. https://doi. org/10.1038/nrd4176.

37. Zenewicz, LA, Yancopoulos, GD, Valenzuela, DM, Murphy, AJ, Stevens, S. og Flavell, RA (2008). Medfødt og adaptivt interleukin-22 beskytter mus mot inflammatorisk tarmsykdom. Immunity 29, 947–957. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2008.11.003.

38. Gronke, K., Herna´ndez, PP, Zimmermann, J., Klose, CSN, Kofoed Branzk, M., Guendel, F., Witkowski, M., Tizian, C., Amann, L., Schumacher, F., et al. (2019). Interleukin-22 beskytter intestinale stamceller mot genotoksisk stress. Nature 566, 249–253. https://doi.org/10.1038/ s41586-019-0899-7.

39. Saxton, RA, Henneberg, LT, Calafiore, M., Su, L., Jude, KM, Hanash, AM, og Garcia, KC (2021). De vevsbeskyttende funksjonene til interleukin-22 kan kobles fra pro-inflammatoriske handlinger gjennom strukturbasert design. Immunitet 54, 660–672.e9. https://doi.org/10. 1016/j.immuni.2021.03.008.

40. Dumoutier, L., Louahed, J. og Renauld, JC (2000). Kloning og karakterisering av IL-10-relatert T-celle-avledet induserbar faktor (IL-TIF), et nytt cytokin som er strukturelt relatert til IL-10 og induserbart av IL-9. J. Immunol. 164, 1814–1819. https://doi.org/10.4049/jimmunol.164. 4.1814.

41. Lejeune, D., Dumoutier, L., Constantinescu, S., Kruijer, W., Schuringa, JJ, og Renauld, JC (2002). Interleukin-22 (IL-22) aktiverer JAK/STAT-, ERK-, JNK- og p38 MAP-kinaseveiene i en hepatomcellelinje fra rotte. Baner som er delt med og forskjellig fra IL-10. J. Biol. Chem. 277, 33676–33682. https://doi.org/10.1074/jbc.M204204200.

42. Nagalakshmi, ML, Rascle, A., Zurawski, S., Menon, S., og de Waal Malefyt, R. (2004). Interleukin-22 aktiverer STAT3 og induserer IL-10 av tykktarmsepitelceller. Int. Immunopharmacol. 4, 679-691. https://doi. org/10.1016/j.intimp.2004.01.008.

43. Mitra, A., Raychaudhuri, SK og Raychaudhuri, SP (2012). IL-22-indusert celleproliferasjon reguleres av PI3K/Akt/mTOR-signaleringskaskade. Cytokin 60, 38–42. https://doi.org/10.1016/j.cyto.2012.06.316.

44. Bachmann, M., Ulziibat, S., H€ ardle, L., Pfeilschifter, J., og M€ uhl, H. (2013). IFNalpha konverterer IL-22 til et cytokin som effektivt aktiverer STAT1 og dets nedstrømsmål. Biochem. Pharmacol. 85, 396–403. https://doi.org/10.1016/j.bcp.2012.11.004.

45. Zheng, Y., Valdez, PA, Danilenko, DM, Hu, Y., Sa, SM, Gong, Q., Abbas, AR, Modrusan, Z., Ghilardi, N., de Sauvage, FJ, og Ouyang , W. (2008). Interleukin-22 formidler tidlig vertsforsvar mot å feste og utslette bakterielle patogener. Nat. Med. 14, 282–289. https://doi. org/10.1038/nm1720.

46. ​​Andoh, A., Zhang, Z., Inatomi, O., Fujino, S., Deguchi, Y., Araki, Y., Tsujikawa, T., Kitoh, K., Kim-Mitsuyama, S., Takayanagi A., et al. (2005). Interleukin-22, et medlem av IL-10-underfamilien, induserer inflammatoriske responser i subepiteliale myofibroblaster i tykktarmen. Gastroenterology 129, 969–984. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2005.06.071.

47. Tufman, A., Huber, RM, Vo¨lk, S., Aigner, F., Edelmann, M., Gamarra, F., Kiefl, R., Kahnert, K., Tian, ​​F., Boulesteix, AL, et al. (2016). Interleukin-22 er forhøyet ved skylling fra pasienter med lungekreft og andre lungesykdommer. BMC Cancer 16, 409. https://doi.org/10.1186/s12885-016- 2471-2.

48. Voigt, C., May, P., Gottschlich, A., Markota, A., Wenk, D., Gerlach, I., Voigt, S., Stathopoulos, GT, Arendt, KAM, Heise, C., et al. (2017). Kreftceller induserer interleukin-22 produksjon fra minne CD4(+) T-celler via interleukin-1 for å fremme tumorvekst. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 114, 12994–12999. https://doi.org/10.1073/pnas.17051 65114.

49. Markota, A., Endres, S. og Kobold, S. (2018). Målretting av interleukin-22 for kreftbehandling. Nynne. Vaksine. Immunother. 14, 2012–2015. https:// doi.org/10.1080/21645515.2018.1461300.

50. Ewens, A., Mihich, E. og Ehrke, MJ (2005). Fjernmetastase fra subkutant dyrket E0771 medullær brystadenokarsinom. Anticancer Res. 25, 3905–3915.

51. Sugiura, K., og Stock, CC (1952). Studier i et tumorspektrum. I. Sammenligning av virkningen av metyl bis (2-kloretyl)amin og 3-bis(2-kloretyl)aminometyl-4-metoksymetyl -5-hydroksy{{7} }metylpyridin på veksten av en rekke muse- og rottesvulster. Kreft 5, 382–402. https://doi.org/10.1002/1097-0142(195203)5:2<382::aidcncr2820050229>3.0.co;2-3.

52. Renier, N., Wu, Z., Simon, DJ, Yang, J., Ariel, P., og Tessier-Lavigne, M. (2014). iDISCO: en enkel, rask metode for å immunmerke store vevsprøver for volumavbildning. Celle 159, 896–910. https://doi.org/10. 1016/j.cell.2014.10.010.

53. Kleinschmidt, D., Giannou, AD, McGee, HM, Kempski, J., Steglich, B., Huber, FJ, Ernst, TM, Shiri, AM, Wegscheid, C., Tasika, E., et al.

54. O'Donnell, JS, Madore, J., Li, XY og Smyth, MJ (2020). Tumors indre og ytre immunfunksjoner til CD1

55. Semin. Kreft Biol. 65, 189–196. https://doi.org/10.1016/j.semcancer.2019.11.013. 55. Molfetta, R., Zitti, B., Lecce, M., Milito, ND, Stabile, H., Fionda, C., Cippitelli, M., Gismondi, A., Santoni, A., og Paolini, R. (2020). CD155: et multifunksjonelt molekyl i tumorprogresjon. Int. J. Mol. Sci. 21, 922. https://doi.org/10.3390/ijms21030922.

56. Gao, J., Zheng, Q., Xin, N., Wang, W., og Zhao, C. (2017). CD155, et onko-immunologisk molekyl i humane svulster. Cancer Sci. 108, 1934–1938. https://doi.org/10.1111/cas.13324.

57. Morimoto, K., Satoh-Yamaguchi, K., Hamaguchi, A., Inoue, Y., Takeuchi, M., Okada, M., Ikeda, W., Takai, Y., og Imai, T. ( 2008). Interaksjon av kreftceller med blodplater mediert av Necl-5/poliovirusreseptor forbedrer kreftcellemetastasering til lungene. Onkogen 27, 264–273. https://doi.org/10.1038/sj.onc.1210645.

58. Chan, CJ, Martinet, L., Gilfillan, S., Souza-Fonseca-Guimaraes, F., Chow, MT, Town, L., Ritchie, DS, Colonna, M., Andrews, DM, og Smyth, MJ (2014). Reseptorene CD96 og CD226 motsetter hverandre i reguleringen av naturlige mordercellefunksjoner. Nat. Immunol. 15, 431–438. https://doi.org/10.1038/ni.2850.

59. Fuchs, A., Cella, M., Giurisato, E., Shaw, AS, og Colonna, M. (2004). Nyskapende: CD96 (taktil) fremmer NK-celle-målcelleadhesjon ved å interagere med poliovirusreseptoren (CD155). J. Immunol. 172, 3994– 3998. https://doi.org/10.4049/jimmunol.172.7.3994.

60. Jarosch, S., Ko¨hlen, J., Wagner, S., D'Ippolito, E. og Busch, DH (2022). ChipCytometri for multiplekset deteksjon av protein- og mRNA-markører på humane FFPE-vevsprøver. STAR Protoc. 3, 101374. https://doi.org/10.1016/j.xpro.2022.101374.

61. Chauvin, JM, Ka, M., Pagliano, O., Menna, C., Ding, Q., DeBlasio, R., Sanders, C., Hou, J., Li, XY, Ferrone, S., et al. (2020). IL15-stimulering med TIGIT-blokade reverserer CD155-mediert NK-celledysfunksjon ved melanom. Clin. Cancer Res. 26, 5520–5533. https://doi.org/10.1158/ 1078-0432.CCR-20-0575.

62. Weulersse, M., Asrir, A., Pichler, AC, Lemaitre, L., Braun, M., Carrie´, N., Joubert, MV, Le Moine, M., Do Souto, L., Gaud, G., et al. (2020). Eomesavhengig tap av den koaktiverende reseptoren CD226 begrenser CD8(+) T-celle antitumorfunksjoner og begrenser effekten av kreftimmunterapi. Immunitet 53, 824–839.e10. https://doi.org/10.1016/j.immuni. 2020.09.006.

63. Braun, M., Aguilera, AR, Sundarrajan, A., Corvino, D., Stannard, K., Krumeich, S., Das, I., Lima, LG, Meza Guzman, LG, Li, K., et al. (2020). CD155 på tumorceller driver motstand mot immunterapi ved å indusere nedbrytningen av den aktiverende reseptoren CD226 i CD8(+) T-celler. Immunitet 53, 805–823.e15. https://doi.org/10.1016/j.immuni. 2020.09.010.

64. Lepletier, A., Madore, J., O'Donnell, JS, Johnston, RL, Li, XY, McDonald, E., Ahern, E., Kuchel, A., Eastgate, M., Pearson, SA, et al. (2020). Tumor CD155-uttrykk er assosiert med resistens mot antiPD1-immunterapi ved metastatisk melanom. Clin. Cancer Res. 26, 3671–3681. https://doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-19-3925.

65. Newman, AM, Steen, CB, Liu, CL, Gentles, AJ, Chaudhuri, AA, Scherer, F., Khodadoust, MS, Esfahani, MS, Luca, BA, Steiner, D., et al. (2019). Bestemme celletypeoverflod og uttrykk fra bulkvev med digital cytometri. Nat. Bioteknologi. 37, 773–782. https://doi.org/10.1038/s41587-019-0114-2.

66. Soriani, A., Zingoni, A., Cerboni, C., Iannitto, ML, Ricciardi, MR, Di Gialleonardo, V., Cippitelli, M., Fionda, C., Petrucci, MT, Guarini, A., et al. (2009). ATM-ATR-avhengig oppregulering av DNAM-1- og NKG2D-ligander på multippelt myelomceller ved hjelp av terapeutiske midler resulterer i økt NK-cellefølsomhet og er assosiert med en senescent fenotype. Blood 113, 3503–3511. https://doi.org/10.1182/blood- 2008-08-173914.