Diskusjon

Den aldrende befolkningen fortsetter å vokse i en enestående hastighet over hele verden. Aldring er assosiert med en nedgang i cellulære funksjoner, skadeakkumulering og en økende sannsynlighet for kroniske sykdommer som fører til systemkollaps og til slutt død [3–7]. Forekomsten av aldersrelaterte patologier sent i livet har en betydelig innvirkning på livskvalitet og helsekostnader. Det er derfor et presserende behov for intervensjoner med en effektiv antialdringsaktivitet som kan utnyttes som en geroprotektor for å forsinke aldring og forlenge helsen.

Glykosid av cistanche kan også øke aktiviteten til SOD i hjerte- og levervev, og redusere innholdet av lipofuscin og MDA i hvert vev betydelig, effektivt rense ulike reaktive oksygenradikaler (OH-, H₂O₂, etc.) og beskytte mot DNA-skader forårsaket av OH-radikaler. Cistanche-fenyletanoidglykosider har en sterk renseevne for frie radikaler, en høyere reduserende evne enn vitamin C, forbedrer aktiviteten til SOD i sædsuspensjon, reduserer innholdet av MDA og har en viss beskyttende effekt på sædmembranfunksjonen. Cistanche-polysakkarider kan øke aktiviteten til SOD og GSH-Px i erytrocytter og lungevev hos eksperimentelt senescent mus forårsaket av D-galaktose, samt redusere innholdet av MDA og kollagen i lunge og plasma, og øke innholdet av elastin, har en god rensende effekt på DPPH, forlenger hypoksitiden hos eldre mus, forbedrer aktiviteten til SOD i serum og forsinker den fysiologiske degenerasjonen av lunge hos eksperimentelt eldre mus. Med cellulær morfologisk degenerasjon har eksperimenter vist at Cistanche har den gode antioksidantevnen og har potensial til å være et medikament for å forebygge og behandle aldringssykdommer. Samtidig har echinacoside i Cistanche en betydelig evne til å rense DPPH-frie radikaler og har evnen til å rense reaktive oksygenarter og forhindre frie radikal-indusert kollagen-nedbrytning, og har også en god reparasjonseffekt på anionskader av tymin frie radikaler.

Klikk for å få Cistanche-produkter for detaljhandel

【For mer informasjon: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Cellulær aldring styres av et nettverk av sammenkoblede komplekse biologiske prosesser [8, 9]. Nyere studier har vist at intervensjon i de biologiske aldringsprosessene kan øke den sunne levetiden til modellorganismer, inkludert pattedyr, betydelig [10, 14]. Kronologisk aldring i spirende gjær Saccharomyces cerevisiae er det veletablerte modellsystemet for å bestemme intervensjonene til menneskelig post-mitotisk cellealdring [16–19].

Vi utviklet en ny, rask og billig kvantitativ metode kalt PICLS for måling av CLS ved bruk av (1) gjærceller inkubert med media og testforbindelser på klare 96-brønnplater; (2) det fluorescerende fargestoffet propidiumjodid (PI), en celleimpermeant som bare trenger inn i døde celler [23–25]; og (3) en mikroplateleser for kvantitativ celleoverlevelsesavlesning. For å merke seg, måling av celletetthet (og cellevekst) ved OD600nm kan utføres fra samme plate. For døde gjærceller på 96-brønnplater fant vi en høy lineær korrelasjon mellom PI-fluorescens og OD600nm-absorbans innenfor et optimalt celletetthetsområde tilsvarende 0,05–12 OD. Denne metodiske tilnærmingen kan brukes for å kvantifisere cellelevedyktighet i høykapasitetsanalyser.

Det er flere viktige innovasjoner knyttet til PICLS: (i) PICLS er den foreløpig eneste utvekstfrie metoden for CLS-kvantifisering. Et kritisk tids- og ressurskrevende trinn er klippet ut av protokollen, og dermed er PICLS den første sanne high throughput screening (HTS) for kjemiske midler og dyrkingsforhold for CLS-måling. (ii) Den metodiske ideen bak PICLS kan generelt formuleres som en platebasert metode hvor (a) andelen døde/overlevende celler og (b) den totale mengden celler bestemmes direkte samtidig fra samme plate med en optisk intensitet måleenhet (den vanlig tilgjengelige plateleseren). I dette arbeidet brukte vi 96-brønnplater, men 384-brønnplater ser også ut til å være anvendelige (med muligens noe redusert følsomhet på grunn av den mindre mengden kultur). Ethvert fargestoff som skiller døde og overlevende celler og som har fluorescens eller absorpsjon i en kanal som ikke forstyrrer generell celletetthetsmåling (f.eks. via absorpsjon ved OD600nm) kan brukes. Vi brukte propidiumjodid som selektivt markerer døde celler, men dette er ikke kritisk for PICLS.

Fig. 7 Tester effekten av 2,5-anhydro-D-mannitol-analoger på den kronologiske levetiden til gjæren. Den prototrofe gjærstammen (CEN.PK113-7D) ble dyrket i det syntetisk definerte mediet med forskjellige konsentrasjoner av 2,5-vannfri-Dmannitol (2,5-AM), D-fruktose , D-mannitol, D-maltose og D-sorbitol i 96-brønnplater ved 30 grader. En cellevekst OD600nm ble målt ved forskjellige tidspunkter 24 timer, 48 timer og 72 timer ved bruk av en mikroplateleser og graf plottet mot forskjellige konsentrasjoner av 2,5-AM, fruktose, mannitol, maltose og sorbitol. B Den kronologiske levetiden (CLS) for ulike konsentrasjoner av 2,5-AM, fruktose, mannitol, maltose og sorbitol inkuberte celler ble bestemt ved å bruke den propidiumjodidfluorescensbaserte metoden. Celleoverlevelse ved forskjellige kronologiske alderspunkter ble kvantifisert og veksttidspunktet 72 timer ble betraktet som dag 1. C CLS for de gamle cellene ble bestemt ved utvekstmetoden i YPD flytende medium. Veksttidspunktet 72 timer ble betraktet som dag 1. Ved forskjellige kronologiske alderspunkter ble en 3-μL kultur overført til en andre 96-brønnplate som inneholdt 200μL YPD-medium. Utvekst OD600nm i YPD flytende medium ble målt etter inkubering i 24 timer ved 30 grader ved bruk av en mikroplateleser. Grafen er plottet i forhold til dag 1. D Utvekst i YPD flytende medium av en 96-brønnplate ble fotografert etter inkubering i 24 timer ved 30 grader. E Ved ulike kronologiske alderspunkter ble 3-μL-kulturer oppdaget på YPD-agarplaten. Utvekst ble fotografert etter inkubasjon i 48 timer ved 30 grader. Alle data representerer som middel±SD.; *P<0.05, **P<0.01, and  ****P<0.0001 based on two-way ANOVA followed by Dunnett's multiple comparisons tests (B and C). n.s, non-significant 

Vi legger merke til at svarte mikroplater vanligvis anbefales for fluorescensanalyser fordi dette materialet delvis slukker autofluorescens. Vi evaluerte imidlertid metoden i klare mikroplater og fant lignende effektivitet som med svarte mikroplater. Siden svarte mikroplater er forbundet med høye kostnader, er dette en betydelig fordel for storskala screeningsprosjekter med høy gjennomstrømning.

Vi validerte vår utviklede metode med kjente antialdringsintervensjoner som rapamycinadministrasjon og kalorirestriksjon [10–16] ved å reprodusere deres effekt på gjærens CLS. Disse resultatene tyder på at metoden vår er effektiv for å identifisere nye antialdringsintervensjoner. Vi har utnyttet vår nyutviklede protokoll for screening av kjemiske midler for å identifisere nye antialdringsforbindelser (fig. 8). Vi identifiserte 2,5-anhydro-D-mannitol (2,5-AM) som utvider gjærens CLS. Basert på resultatene våre foreslår vi bruk av 2,5-AM individuelt eller i kombinasjon med andre antialdringsintervensjoner.

2,5-AM er en analog av fruktose, og begge sukkerarter kan gå inn i den glykolytiske veien. Glykolyse er en metabolsk prosess der glukose først blir fosforylert av heksokinase for å danne glukose-6-fosfat (G6P). Fosfoglukoisomerase interkonverterer G6P til fruktose-6-fosfat (F6P) som metaboliseres videre til forskjellige nedstrøms glykolytiske mellomprodukter, inkludert pyruvat som går inn i mitokondriell TCA-syklus. I likhet med glukose, blir fruktose også fosforylert av heksokinase for å danne F6P. Fosfofruktokinase konverterer F6P til fruktose-1,6-bisfosfat (FBP), som metaboliseres videre til forskjellige nedstrøms glykolytiske mellomprodukter. 2,5-AM kan også fosforyleres av heksokinase for å danne 2,5-AM- 6-fosfat (2,5-AM6P) [39–41]. Videre konverterer fosfofruktokinase 2,5-AM6P til 2,5-AM- 1,6-bisfosfat (2,5-AMBP). Imidlertid kan 2,5-AMBP ikke metaboliseres videre til nedstrøms glykolytiske mellomprodukter [39–41].

Siden 2,5-AM er en fruktoseanalog, har vi undersøkt om fruktose også kan forlenge levetiden til gjær. Imidlertid observerte vi ikke antialdringsaktiviteten til fruktose for å utvide CLS av gjær. Mannitol og maltose kan også gå inn i glykolyse og metaboliseres til nedstrøms glykolytiske mellomprodukter. Vi undersøkte også effekten av mannitol og maltose på levetiden til gjær. Fruktose, mannitol og maltose er heller ikke i stand til å utvide CLS av gjær.

Som sorbitol, et annet ennå ikke-metabolisert sukker ble tidligere rapportert å påvirke CLS ved svært høye konsentrasjoner (18 prosent tilsvarende 1 M) [20, 45], vi ønsket å avklare om antialdringsaktiviteten til 2,{{7 }}AM kan skyldes den økte osmolariteten til kulturmediet. Eksperimentene våre viste at sorbitol ikke klarer å øke CLS av gjær ved de lavere konsentrasjonene som er effektive i tilfelle 2,5- AM. Siden sorbitol krever høyere konsentrasjoner for å øke CLS av gjær, er antialdringsmekanismen til 2,5-AM uavhengig av osmolaritetseffekter. Disse funnene viste at antialdringsaktiviteten til 2,5-AM er spesifikk og ikke parallelt med flere andre analoger med lignende kjemiske strukturer.

Hvordan 2,5-AM forlenger levetiden gjenstår imidlertid å undersøke. Det vil være interessant å undersøke om 2,5-AM direkte modulerer aldringskjennetegnene [8]. TORC1 og AMPK er de glukosefølende kompleksene som er involvert i aldringsprosessen [32, 43]. Imidlertid reduseres den kronologiske levetiden som forlenges ved hemming av TORC1 når AMPK hemmes. Glukose og glykolytiske mellomprodukter regulerer aktiviteten til TORC1 og AMPK [34, 46, 47]. 2,5-AMBP har vist seg å hemme aktiviteten til aldolase som katalyserer omdannelsen av FBP til glyceraldehyd-3-fosfat (G3P) og dihydroksyacetonfosfat (DHAP) [39, 40]. DHAP blir interkonvertert til G3P av triosefosfatisomerase. Nyere bevis tyder på at DHAP er det viktige glukosesignalmolekylet som aktiverer TORC1 [48].

Glykolytisk fuks er kompromittert når G3P- og DHAP-syntesen påvirkes, noe som fører til mindre ATP-produksjon. Interessant nok aktiveres AMPK når energistatusen til cellene er kompromittert og hemmer cellevekst ved å hemme TORC1 [46, 47]. Dermed er AMPKs og TORC1s antagonistiske forhold en effektiv metabolsk tilpasning for å sikre cellulær homeostasebalanse for friske celler. Selv om vi ikke observerte en effekt av 2,5-AM på cellevekst (fig. 6 og 7). Disse funnene utelukket enhver glukoserestriksjonseffekt som kompromitterte celleveksten (fig. 5), men forlenget levetiden med en langsom vekstfenotype [49]. Forlengelse av levetiden med rapamycin krever imidlertid ikke høyere dose enn det kompromitterer celleveksten (fig. 4). Derfor kan vi ikke utelukke muligheten for antialdringsaktivitet av 2,5-AM via TORC1/AMPK eller uavhengig av TORC1/AMPK.

I motsetning til den hemmende effekten av 2,5-AMBP på aldolase, er det rapportert å aktivere pyruvatkinasen, det siste glykolyseenzymet [39–41]. Pyruvatkinase katalyserer omdannelsen av fosfoenolpyruvat til pyruvat, en av kildene for å generere NAD pluss (nikotinamidadenindinukleotid). NAD pluss er en viktig metabolitt som regulerer flere cellulære prosesser og funksjoner som er avgjørende for å opprettholde sunne celler og forlenge levetiden [50, 51]. Pyruvat er også hovedsubstratet for mitokondrielle reaksjoner for å generere ulike byggesteinsmetabolitter for å syntetisere vitale elementer, inkludert aminosyrer, nukleinsyrer og ATP, hovedsakelig for celleoverlevelse og sunn aldring [52–55]. Faktisk er nedgangen i mitokondriell aktivitet assosiert med aldring og aldersrelaterte sykdommer [53–56]. Nylig har 2,5-AM blitt foreslått som et potensielt terapeutisk middel for å behandle akutt myeloid leukemi (AML) kreft [57].

Som en sidenotat kalte vi vår nye metode PICLS (PI-basert CLS-metode) med ordspillet "pickles" i tankene. Mens alle elementene i vår nye protokoll allerede er beskrevet uavhengig andre steder, gjør deres "fermenterte" kombinasjon målingen enkel og billig, og til slutt klar for høy gjennomstrømning.

Avslutningsvis har vi utviklet en kvantitativ metode for å måle den kronologiske levetiden til gjæren og identifisert 2,5-AM som en ny antialdringsforbindelse. En studie pågår for tiden for å undersøke mekanismene for antialdringsaktivitet til 2,5-AM.

Materialer og metoder

Gjærstamme, media og kjemikalier

Den prototrofe genetiske bakgrunnen av CEN.PK113-7D-stammen ble brukt i denne studien [35, 36]. Standardrikt medium YPD (1 prosent Bacto-gjærekstrakt, 2 prosent Bacto-pepton og 2 prosent glukose), YPD-agar (2,5 prosent Bacto-agar) og syntetisk definert (SD) medium som inneholder 6,7 g/L gjærnitrogenbase med ammoniumsulfat uten aminosyrer (DIFCO) og 2 prosent glukose. Rapamycin (Enzo) stamløsning ble fremstilt i dimetylsulfoksid (Sigma). Sluttkonsentrasjonen av DMSO oversteg ikke 1 prosent i noen analyse. 2,5-Anhydro-D-mannitol (Santa Cruz), D-fruktose (Sigma), D-mannitol (Sigma), D-maltose (Sigma) og D-sorbitol (Sigma) arbeidskonsentrasjoner fremstilt fersk av direkte oppløse pulveret i medium og filter steriliseres.

Gjærvekstforhold

Gjærstamme ble gjenvunnet fra frossen glyserollager på YPD-agarmedium ved 30 grader. Gjær ble dyrket i SD-medium over natten ved 30 grader med risting ved 220 rpm. Celler dyrket over natten ble fortynnet til OD600nm~0,2 i ferskt SD-medium for å starte de kronologiske levetidsforsøkene.

Kronologisk levetidsanalyse

Kronologisk levetid (CLS)-eksperimenter ble utført i {{0}}brønnplater med totalt 20{{10}} µL gjærkultur som beskrevet tidligere [58]. Det cellulære inokulumet ble overført til 96-brønnplaten som inneholdt serielle dobbeltfortynnede konsentrasjoner (0–10 nM) av rapamycin. For kalorirestriksjonsanalysen ble cellulære inokulum fremstilt i SD-medium som inneholdt 2 prosent, 0,5 prosent og 0,25 prosent glukose og overført til 96-brønnplater. På samme måte ble det cellulære inokulumet overført til 96-brønnplatene som inneholdt serielle dobbeltfortynnede konsentrasjoner (0–8 mM) av 2,5-anhydro-D-mannitol, D-fruktose, D-mannitol, D-maltose og D-sorbitol. Celler ble inkubert ved 30 grader, og veksten ble målt på forskjellige tidspunkter. Veksttidspunktet 72 timer ble betraktet som dag 1 for CLS-analysen. Celleoverlevelse ble kvantifisert ved forskjellige alderstidspunkter ved tre forskjellige tilnærminger: (i) propidiumjodid fluorescens-basert metode, (ii) utvekst i YPD flytende medium og (iii) spotting assay.

(i) Propidiumjodidfluorescensbasert metode:De detaljerte prosedyrene for å utvikle den propidiumjodid (PI) fluorescensbaserte tilnærmingen er nevnt i resultatdelen. For CLS-analysen ble {{0}} µl gjærceller på forskjellige alderstidspunkter overført til en andre 96-brønnplate. Celler ble vasket og inkubert i 100 µl 1 x PBS med PI (5 µg/ml) i 15 minutter i mørket. Positiv og negativ prøvekontroll ble inkludert for kvantitativ analyse. Positiv kontroll (celler kokt ved 100 grader i 15 minutter) ble PI-farget og behandlet i samme 96-brønnplate. Prøver uten PI-fargede celler tjente som negativ kontroll. Etter inkubering ble cellene vasket og resuspendert i 100 ul PBS. Prøvens fluorescensavlesning (eksitasjon ved 535 nm, emisjon ved 617 nm) og OD600nm ble målt av mikroplateavleseren (BioTek). Fluorescensintensiteten til hver prøve ble normalisert med OD600nm. Den normaliserte fluorescensintensiteten til hver prøve ble trukket fra bakgrunnssignalet til den ufargede negative prøven. Den oppnådde fluorescensintensiteten til den positive kontrollprøven (kokte døde celler) ble ansett som 0 prosent celleoverlevelse. Vi bekreftet cellens død b slik at den kunne vokse i mediet. Celleoverlevelse av prøver med forskjellige alderstidspunkter ble beregnet ved normalisering av fluorescensintensiteten med en positiv kontrollprøve (kokte celler).

der Iij(535nm∕617nm) er fluorescensintensiteten målt ved brønnen med platekoordinatene i og j med eksitasjon ved 535 nm og emisjon ved 617 nm, ID(535nm∕617nm) er fluorescensintensiteten målt for en celle med 1000 prosent død celler farget med PI, IC(535nm∕617nm) er fluorescensintensiteten målt for celler uten PI, og de respektive OD-verdiene er absorpsjonen målt for de respektive cellene ved 600 nm normalisert for antall celler.

(ii) Utvekst i YPD flytende medium:Gjærstasjonær kultur (3-μL) av forskjellige alderstidspunkter ble overført til en andre 96-brønnplate som inneholdt 200μL YPD-medium og inkubert i 24 timer ved 30 grader. Utvekst (OD600nm) av gamle celler ble målt av mikroplateavleseren. Kvantifisering av celleoverlevelse for hvert alderspunkt ble bestemt i forhold til dag 1 (betraktet som 100 prosent celleoverlevelse) som beskrevet tidligere [19, 20, 58].

(iii) Spotting-analyse:Gjærstasjonær kultur (3 μL) av forskjellige alderstidspunkter ble oppdaget på YPD-agarplaten og inkubert i 48 timer ved 30 grader. Utveksten av gamle celler på YPD-agarplaten ble fotografert ved bruk av BioRad GelDoc-bildesystemet.

Dataanalyse

Statistisk analyse av alle resultatene som gjennomsnittsverdi, standardavvik, korrelasjon (R2), signifikans og graftegning ble utført ved bruk av GraphPad Prism v.9.3.1 programvare. Resultatene ble statistisk sammenlignet ved bruk av den ordinære enveis ANOVA og toveis ANOVA etterfulgt av multipler sammenligning med Dunnetts post hoc test eller Sidaks post hoc test. I alle grafplottene vises P-verdier som *P<0.05,  **P<0.01, ***P<0.001, and ****P<0.0001 were considered significant. n.s, non-significant.

AnerkjennelserForfatterens MA og FE er oppfinnerne av to patentsøknader (10202201534P og 10202201536U) som inkluderer deler av arbeidet beskrevet i denne artikkelen.

ForfatterbidragMA unnfanget prosjektet, utførte eksperimentene og analyserte dataene. FE var med på prosjektet, evaluerte data og utarbeidet en strategi. MA og FE skrev papiret, og alle forfattere gjennomgikk papiret og gikk med på den endelige versjonen.

FinansieringDette arbeidet ble støttet av Bioinformatics Institute (BII), A*STAR Career Development Fund (C210112008), og Global Healthy Longevity Catalyst Awards-stipendet (MOH-000758–00).

Erklæringer

Konkurrerende interesserForfatterne erklærer ingen konkurrerende interesser.

Åpen tilgangDenne artikkelen er lisensiert under en Creative Commons Attribution 4.0 internasjonal lisens, som tillater bruk, deling, tilpasning, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium eller format, så lenge du gir passende kreditt til den(e) originale forfatteren(e) ) og kilden, oppgi en lenke til Creative Commons-lisensen, og angi om endringer ble gjort. Bildene eller annet tredjepartsmateriale i denne artikkelen er inkludert i artikkelens Creative Commons-lisens med mindre annet er angitt i en kredittgrense til materialet. Hvis materiale ikke er inkludert i artikkelens Creative Commons-lisens og din tiltenkte bruk ikke er tillatt av lovbestemt regulering eller overskrider tillatt bruk, må du innhente tillatelse direkte fra opphavsrettsinnehaveren.

Referanser

1. das nações Unidas, O. United Nations, Department of Economic and Social Affairs, Population Division (2019). Verdens befolkningsutsikter, høydepunkter (ST/ESA/SER.A/423). 2019.

2. Robine J. Aldrende befolkninger: vi lever lengre liv, men er vi sunnere? FN, Department of Economics and Social Affairs, Population Division, UN DESA/ POP/2021/TP/NO. 2. (2021).

3. Niccoli T, Partridge L. Aldring som risikofaktor for sykdom. Curr Biol. 2012.

4. Hou Y, et al. Aldring som en risikofaktor for nevrodegenerativ sykdom. Nat Rev Neurol. 2019.

5. Harman D. Aldringsprosessen: Stor risikofaktor for sykdom og død. Proc Natl Acad Sci US A. 1991.

6. Partridge L, Deelen J, Slagboom PE. Å møte de globale utfordringene med aldring. Natur. 2018.

7. Fontana L, Kennedy BK, Longo VD. Medisinsk forskning: behandle aldring. Natur. 2014.

8. López-Otín C, Blasco MA, Partridge L, Serrano M, Kroemer G. Kjennetegnene på aldring. Celle. 2013.

9. Kennedy BK, et al. Gerovitenskap: Knytter aldring til kronisk sykdom. Celle. 2014.

10. Partridge L, Fuentealba M, Kennedy BK. Jakten på å bremse aldring gjennom medikamentoppdagelse. Nat Rev Drug Discovery. 2020.

11. Mattison JA, et al. Kalorirestriksjon forbedrer helsen og overlevelsen til rhesusaper. Nat Commun.

12. Bitto A, et al. Forbigående behandling med rapamycin kan øke levetiden og helsen hos middelaldrende mus. Elife. 2016.

13. Fontana L, Partridge L. Fremme helse og lang levetid gjennom kosthold: fra modellorganismer til mennesker. Celle. 2015.

14. Zhang Y, Zhang J, Wang S. Rapamycins rolle i forlengelse av helsespennet via forsinkelsen av organaldring. Aging Res Rev. 2021.

15. Selvarani R, Mohammed S, Richardson A. Effekten av rapamycin på aldring og aldersrelaterte sykdommer - fortid og fremtid. GeroScience. 2021.

16. Fontana L, Partridge L, Longo VD. Forlenger sunn levetid fra gjær til mennesker. Vitenskap. 2010.

17. Zimmermann A, et al. Gjær som et verktøy for å identifisere antialdringsforbindelser. FEMS Gjær Res. 2018.

18. Longo VD, Shadel GS, Kaeberlein M, Kennedy B. Replikativ og kronologisk aldring i Saccharomyces cerevisiae. Cell Metab. 2012.

19. Powers RW, Kaeberlein M, Caldwell SD, Kennedy BK, Fields S. Forlengelse av kronologisk levetid i gjær ved redusert TOR-banesignalering. Genes Dev. 2006.

20. Murakami CJ, Burtner CR, Kennedy BK, Kaeberlein M. En metode for høy-throughput kvantitativ analyse av gjær kronologisk levetid. J Gerontol. Ser. En Biol. Sci. Med. Sci. (2008).

21. Teng X, Hardwick JM. Kvantifisering av genetisk kontrollert celledød i spirende gjær. Metoder Mol Biol. 2013.

22. Garay E, et al. Høyoppløselig profilering av overlevelse i stasjonær fase avslører gjærlivsfaktorer og deres genetiske interaksjoner. PLoS Genet. 2014.

23. Alfatah M, et al. Hypokulosid, en sphingoid base-lignende forbindelse fra Acremonium forstyrrer membranintegriteten til gjærceller. Sci Rep. 2019.

24. Alfatah M, et al. Kjemisk-genetisk interaksjonslandskap av mono-(2-etylheksyl)-ftalat ved bruk av kjemogenomisk profilering i gjær. Kjemosfære. 2019.

25. Kwolek-Mirek M, Zadrag-Tecza R. Sammenligning av metoder som brukes for å vurdere levedyktigheten og vitaliteten til gjærceller. FEMS Gjær Res. 2014.

26. Chadwick SR, et al. En verktøykasse for rask kvantitativ vurdering av kronologisk levetid og overlevelse i Saccharomyces cerevisiae. Trafc. 2016.

27. Pereira C, Saraiva L. Interferens av aldringsmedier på vurdering av gjærs kronologiske levetid ved propidiumjodidfarging. Folia Microbiol. (Praha). (2013).

28. Lamming DW, Ye L, Sabatini DM, Baur JA. Rapalogs og mTOR-hemmere som antialdringsmedisiner. J Clin Investig. 2013.

29. Arriola Apelo SI, Lamming DW. Rapamycin: en hemmer av aldring dukker opp fra jorda på Påskeøya. Journals of Gerontology - Series A Biological Sciences and Medical Sciences. 2016.

30. Wilkinson JE, et al. Rapamycin bremser aldring hos mus. Aldrende celle. 2012.

31. Saxton RA, Sabatini DM. mTOR-signalering i vekst, metabolisme og sykdom. Celle. 2017;168:960–76.

32. Johnson SC, Rabinovitch PS, Kaeberlein M. MTOR er en nøkkelmodulator for aldring og aldersrelatert sykdom. Natur. 2013.

33. González A, Hall MN. Næringsføling og TOR-signalering hos gjær og pattedyr. EMBO J. 2017;36:397–408.

34. Alfatah M, et al. TORC1 regulerer transkripsjonsresponsen på glukose og utviklingssyklusen via Tap42- Sit4-Rrd1/2-banen i Saccharomyces cerevisiae. BMC Biol. 2021.

35. Van Dijken JP, et al. En interlaboratorisk sammenligning av fysiologiske og genetiske egenskaper til fire Saccharomyces cerevisiae-stammer. Enzyme Microb Technol. 2000.

36. Mülleder M, et al. En prototrofisk delesjonsmutantsamling for gjærmetabolomikk og systembiologi. Nat Biotechnol. 2012.

37. Alvers AL, et al. Autofagi er nødvendig for å forlenge gjærens kronologiske levetid med rapamycin. Autofagi. 2009.

38. Zhang JH, Chung TDY, Oldenburg KR. En enkel statistisk parameter for bruk i evaluering og validering av screeninganalyser med høy gjennomstrømning. J Biomol Screen. 1999.

39. Riquelme PT, Wernette Hammond ME, Kneer NM, Lardy HA. Regulering av karbohydratmetabolismen med 2,5-anhydro-D-mannitol. Proc Natl Acad Sci US A. 1983.

40. Riquelme PT, Wernette-Hammond ME, Kneer NM, Lardy HA. Virkningsmekanisme for 2,5-anhydro-D-mannitol i hepatocytter. Effekter av fosforylerte metabolitter på enzymer av karbohydratmetabolisme. J. Biol. Chem. (1984).

41. Riquelme PT, Kneer NM, Wernette-Hammond ME, Lardy HA. Hemming av 2,5-anhydromannitol av glykolyse i isolerte rottehepatocytter og Ehrlich ascitesceller. Proc Natl Acad Sci US A.

42. Hardie DG. AMP-aktiverte/SNF1-proteinkinaser: bevarte voktere av cellulær energi. Nat Rev Mol Cell Biol. 2007.

43. Burkewitz K, Zhang Y, Mair WB. AMPK i forbindelsen mellom energi og aldring. Cell Metab. 2014.

44. McCartney RR, Chandrashekarappa DG, Zhang BB, Schmidt MC. Genetisk analyse av resistens og følsomhet for 2-deoksyglukose i Saccharomyces cerevisiae. Genetikk. 2014.

45. Burtner CR, Murakami CJ, Kennedy BK, Kaeberlein M. En molekylær mekanisme for kronologisk aldring i gjær. Cellesyklus. 2009.

46. ​​Lin SC, Hardie DG. AMPK: føler glukose så vel som cellulær energistatus. Cell Metab. 2018.

47. González A, Hall MN, Lin SC, Hardie DG. AMPK og TOR: yin og yang for cellulær næringsføling og vekstkontroll. Cell Metab. 2020.

48. Orozco JM, et al. Dihydroksyacetonfosfat signaliserer glukosetilgjengelighet til mTORC1. Nat Metab. 2020.

49. Aguiar-Oliveira MH, Bartke A. Veksthormonmangel: helse og lang levetid. Endocr Rev. 2019.

50. Orlandi I, Alberghina L, Vai M. Nikotinamid, nikotinamidribosid og nikotinsyre – nye roller i replikativ og kronologisk aldring i gjær. Biomolekyler. 2020.

51. Covarrubias AJ, Perrone R, Grozio A, Verdin E. NAD pluss metabolisme og dets roller i cellulære prosesser under aldring. Nat Rev Mol Cell Biol. 2021.

52. Spinelli JB, Haigis MC. De mangefasetterte bidragene fra mitokondrier til cellulær metabolisme. Nat Cell Biol. 2018.

53. Berry BJ, Kaeberlein M. Et energiperspektiv på gerovitenskap: mitokondriell protonmotorisk kraft og aldring. Gero-vitenskap. 2021.

54. Sun N, Youle RJ, Finkel T. Den mitokondrielle grunnlaget for aldring. Mol Cell. 2016.

55. Kauppila TES, Kauppila JHK, Larsson NG. Pattedyrs mitokondrier og aldring: en oppdatering. Cell Metab. 2017.

56. Bratic A, Larsson NG. Rollen til mitokondrier i aldring. J Clin Investig. 2013.

57. Chen WL, et al. Forbedret fruktoseutnyttelse mediert av SLC2A5 er et unikt metabolsk trekk ved akutt myeloid leukemi med terapeutisk potensial. Kreftcelle. 2016.

58. Jing JL, Ning TCY, Natali F, Eisenhaber F, Alfatah M. Jerntilskudd forsinker aldring og forlenger cellulær levetid gjennom potensering av mitokondriell funksjon. Cells 11, (2022).

Utgivers notatSpringer Nature forblir nøytral med hensyn til jurisdiksjonskrav i publiserte kart og institusjonelle tilknytninger.

【For mer informasjon: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】