Thioredoxin 1 (Trx1) er assosiert med dårlig prognose ved klarcellet nyrecellekarsinom (ccRCC): Et eksempel på den avgjørende rollen til redokssignalering i CcRCC

For mer info. Vær så snill og kontakttina.xiang@wecistanche.com

Abstrakt

HensiktTioredoksiner er viktige regulatoriske proteiner for oksidativ signalering. Trx1 er den mest fremtredendetioredoksinog derfor forsøkte den nåværende studien å evaluere den prognostiske rollen til Trx1 i ccRCC.

Metoderog pasienter En vevsmikroarray-studie (TMA) ble utført for å evaluere assosiasjonen til Trx1 med klinikopatologiske egenskaper og overlevelsesresultater. Data fraKreftGenome Atlas (TCGA) ble evaluert for assosiasjonen av egenskaper i Trx1-genet med klinikopatologiske egenskaper og overlevelsesresultater.

ResultaterI TMA hadde pasienter med ccRCC som hadde høye Trx1-nivåer lavere T-stadier (s<0.001), less="" often="" distant="" metastases(p="0.018),lower" nuclear=""><0.001),and less="" often="" tumor="" necrosis="" (p="0.037)or" sarcomatoid="" features="" (p="0.008).Patients" with="" a="" combined="" score="" of="" ≥10="" had="" better="" dss="" than="" patients="" with="" a="" low="" combined="" score=""><10 (hr="" 95%="" ci="" 0.62(0.39-0.98)).="" interestingly,="" the="" survival="" outcome="" is="" compartment-specific:="" ccrcc="" patients="" whose="" tumors="" had="" exclusively="" trx1="" expression="" in="" the="" cytoplasm="" had="" the="" worst="" survival="" outcome(hr="" 3.1;95%="" ci="" 1.2-8.0).="" genomic="" data="" from="" the="" tcga="" demonstrated="" that="" patients="" with="" ccrccs="" that="" had="" trx1="" losses="" had="" more="" advanced="" clinicopathological="" features="" and="" worse="" survival="" outcomes="" in="" disease-specific=""><0.001), overall(p="0.001)," and="" progression-free="" survival="" (p="0.001)when" compared="" to="" patients="" with="" ccrccs="" without="" copy="" number="" variations(cnv)="" or="">

KonklusjonDen nåværende studien antyder en mulig rolle for Trx1 i tumorbiologien til ccRCC, og derfor anbefaler den nåværende studien på det sterkeste dyptgående undersøkelser av redokssignalveier i ccRCC.

NøkkelordTioredoksin. Oksidativ signalering. Reaktive oksygenarter. Nyrekreft. Målrettede terapier

Klikk for å lære mer om cistanche-effekter

Introduksjon

Oksidativt stress har vært assosiert med karsinogenese i mange tiår. En ubalanse av prooksidanter og antioksidanter har blitt tilskrevet desoksyribonukleinsyre (DNA) skade og svikt i sentrale cellulære prosesser, inkludert metabolske dereguleringer, cellulære membranskader og svikt i DNA-transkripsjon og mRNA-translasjon [1]. Detioredoksinfamilie har tidligere blitt ansett som en viktig regulator av oksidativ likevekt i celler. Tioredoksiner er sterkt bevart gjennom nesten alle cellearter. De omfatter tre grupper av proteiner: de navngivende tioredoksinene (Trxs), glutaredoksiner (Grxs) og peroksiredoksiner (Prxs) (gjennomgått i [1]).

En overveldende mengde vitenskapelig litteratur har gitt bevis for at tioredoksiner ikke er voktere av en oksidativ likevekt, men bedre karakterisert som regulatorer av oksidativ signalering (gjennomgått i [1,2]). I denne formen har medlemmer av tioredoksinfamilien funksjoner som sensorer, transdusere og effektorer av cellulære funksjoner [3]. Biologiske prosesser som aktivering og kompartmentstabilisering av proteiner kan ikke forklares uten å ta hensyn til elektrostatiske egenskaper[4]. Faktisk har det blitt demonstrert at negative elektriske felt som når inn i løsningsmidlet utenfor de aktive sidene av tioredoksiner, bestemmer komplementært elektrostatisk og geometri. substratspesifikasjon av tioredoksiner og sannsynligvis andre proteiner [4].

Trx1 har vært involvert i mange biologiske prosesser som har en nøkkelrolle i tumorgenese av klare cellernyrecellekarsinom (ccRCC). For eksempel kan cytosolisk Trx1 skilles ut og fungere som et kjemokin som kan tiltrekke og aktivere immunceller [1]. Videre kan Trx1 indusere uttrykket av interleukin(IL)IL-1, IL-2, IL-8 og doseavhengig uttrykket av IL-6[1]. Spesielt er IL-6 et viktig regulatorisk protein for tumorgenese i ccRCC [5]. Dessuten viser det makroskopiske synet på ccRCC-svulster vanligvis et blandet bilde av fete, nekrotiske og hemorragiske områder, noe som fremhever at biologiske prosesser som hyperaktive metabolske veier og neovaskularisering er nøkkelkomponenter for utvikling og progresjon av ccRCC. Flere studier har vist at medlemmer avtioredoksinfamilie er viktige regulatoriske komponenter i cellulær metabolisme og også av neovaskularisering []. For eksempel har serumnivåer av Trx1 blitt korrelert med diabetesfølsomhet og med glukosetoleranse. I tillegg er Trx1 i stand til å indusere ekspresjonen av vaskulær endotelfaktor (VEGF)[1]. VEGF-hemming med tyrosinkinasehemmere (TKIs) er en av de viktigste terapeutiske strategiene i medisinsk behandling av metastatiske ccRCCs [6].

Til slutt har det blitt vist at den hypoksi-induserbare faktoren -2 (HIF-2 ) er en viktig tumorprogresjon i ccRCC [7]. Trx1 regulerer HIF-2-nivåer via et jern-responsivt element in vitro [8]. Det har blitt demonstrert at uttømming av Trx1 resulterer i en økning av HIF-2 mRNA-nivåer. Forfatterne har antydet at HIF{10}}-akkumulering krever enten tilstrekkelig jerntilførsel eller mangel på Trx1-reduksjonssystemet. For tiden undersøker kliniske fase II-studier HIF-2-hemming som et av de fremtidige lovende målene i mRCC-behandling. Trx1 ogtioredoksinfamilie kan derfor være involvert i ccRCC-progresjon via en HIF-2 -avhengig mekanisme.

Samlet finnes det plausible bevis for at Trx1 kan indusere patofysiologiske prosesser som styrer tumorprogresjon i ccRCC. På den annen side kan også tapet av Trx1 være i stand til å indusere HIF-2-akkumulering. Lave eller økte nivåer av Trx1 kan påvirke konteksten avhengig av tumorprogresjon i ccRCC. Derfor har den nåværende studien undersøkt assosiasjonen av Trx1-proteinnivåer i en TMA-analyse, og det ble antatt at både lave eller høye nivåer av Trx1 kan være assosiert med klinikopatologiske egenskaper og overlevelsesresultater for pasienter med ccRCC.

Metoder og pasienter

Pasient- og tumorkarakteristikker

To pasientkohorter ble analysert. Den første kohorten inkluderte pasienter som har blitt kirurgisk behandlet ved urologisk avdeling ved Universitetssykehuset i Tübingen/Tyskland og ble analysert i en tissue microarray (TMA)-studie (tilleggstabell 1). Alle inkluderte pasienter hadde patologisk evaluerte T-stadier. Lymfadenektomi ble utført når mistenkte lymfeknuter var synlige i preoperative MR- eller CT-skanninger. Derfor ble T-stadiet klinisk og patologisk evaluert. M-stadiet ble klinisk evaluert med MR- og CT-skanninger. Alle Ml-pasienter ble synkront metastasert, og nefrektomi ble utført i en cytoreduktiv hensikt hos disse pasientene. Den andre kohorten inkluderte pasienter fra TheKreftGenome Atlas-prosjektet (TCGA)(tilførsel. Tabell 1).

Tissue microarray (TMA) analyser

Trx1 er kjent for å være i både kjernen og cytoplasmaet. I begge avdelinger er Trx1 involvert i redoks- og jernreguleringsprosesser (gjennomgått i [1]). Fargingen ble evaluert av en erfaren genitourinary patolog (SR). Intensiteten ble talt på en 0-3-skala (0=negativ,1=svak positiv,2=moderat positiv, 3=sterkt positiv), og prosentandelen positivt farget målceller (område O-100 prosent positiv) farging ved hver intensitet. For bedre å representere de generelle proteinnivåene, kombinerte vi frekvens- og intensitetsmålene til et integrert intensitetsmål ved å bruke følgende formel:((prosent farging ved intensitet 3*3) pluss (prosent farging ved intensitet 2*2) pluss (prosent farging ved intensitet 1*1))/100 som beskrevet tidligere [10].

Trx1-proteindata ble korrelert med sykdomsspesifikk overlevelse (DSS), klinikopatologiske trekk og uttrykk for markørproteiner av veier som er relevante for RCC-biologi. Median oppfølging var 90,4 måneder (tilleggstabell 1). Beskrivende statistikk inkluderte kontinuerlige variabler som vises som gjennomsnitt ± standardavvik (SD) eller interkvartile områder (IQR), mens kategoriske data vises som absolutte tall og tilsvarende frekvenser. Kategoriske variabler ble sammenlignet med chi-kvadraten eller Fishers eksakte test etter behov. Enten Students t-test korrigert med Levans test for ekvivalens eller Mann-Whitney U-testen ble brukt for sammenligning av kontinuerlige variabler. Avskjæringsverdier ble beregnet med rekursive partisjonstre-analyser ved bruk av rpart-funksjonen til R. Overlevelsesfunksjoner ble estimert med Kaplan-Meier-metoden og assosiasjoner til overlevelsestider ble vurdert med uni- og multivariable Cox proporsjonal hazard (PH) regresjonsanalyser. Alle statistiske tester var tosidige og statistisk signifikans ble definert asp<0.05. all="" data="" were="" analyzed="" with="" the="" statistical="" package="" for="" social="" sciences="" software,="" version="" 24.0="" (spss="" inc.,="" chicago,="" il)="" and="" r="" version="" rx64="" 3.5.0(www-project.="" org),="" including="" additional="" packages="" coin,="" survival,="" and="">

Analyse av genetiske endringer i TCGA Assosiasjoner mellom klinikopatologiske variabler og kopiantallvariasjoner (CNV) eller somatiske mutasjoner ble undersøkt ved å bruke Fishers eksakte test, Cochran-Armitage trendtest eller Mann-Whitney U test etter behov. Uni- og multivariabel Cox PH-regresjon ble brukt for assosiasjonsanalyser mellom CNV eller somatiske mutasjoner og total overlevelse (OS), sykdomsspesifikk overlevelse (DSS) og progresjonsfritt intervall (PFD). Overlevelsesdata ble innhentet fra Liu et al. [12]. Begrensede kubiske splines ble brukt til å modellere forholdet mellom Trx1 RNA-nivåer og overlevelsesendepunktene OS, DSS og PFI (Figur S4).

Resultater

Resultater av vevsmikroarrayanalysen.

Strømmen som ble analysert i TMA-kohorten besto av 248 pasienter (171 menn og 77 kvinner) med en medianalder på 65 år (IQR 56.0-71.4) og en median oppfølgingstid på 88,5 måneder (QR 2 0.3-152.0 måneder). Syttito pasienter hadde dødd på grunn av ccRCC på analysetidspunktet. Pasient- og tumorkarakteristikker for hele TMA-kohorten er vist i tilleggstabell 1, og karakteristikkene til TCGA-kohorten er vist i tilleggstabell 2. Det var en trend at ethvert Trx1 vs.no Trx1-uttrykk var assosiert med dårligere overlevelsesutfall HR:2.0295 prosent KI 0.81-5.02;p=0.129. Sammenligningen av assosiasjoner til forskjellige rom med DSS er vist i fig.1. Svulster fra pasienter som hadde et eksklusivt uttrykk for Trx1 i cytoplasmaet hadde det verste overlevelsesresultatet (HR,95 prosent konfidensintervall(CI):3.13(1.21-8.04)), Tabell 1). Ethvert uttrykk for Trx1 ble vurdert i de forskjellige cellulære rommene i denne analysen.

Next, the combined frequencies and intensities were investigated to better account for the protein levels as described above. For this purpose, we calculated a cutoff value of≥10 using recursive partitioning. Patients with a combined score of>10 hadde bedre DSS enn pasienter med lav kombinert score på<10(hr,95% ci0.62(0.39-0.98).="" in="" line="" with="" this="" result,="" tumors="" of="" patients="" with="" a="" high="" combined="" score="" demonstrated="" more="" often="" less="" advanced="" tumor="" features(table2).in="" multivariable="" analysis,="" high="" combined="" cytoplasmic="" trx1="" expression="" lost="" its="" significance="" for="" its="" association="" with="" survival="" outcome="" when="" adjusted="" for="" the="" prognostic="" groups="" of="" the="" ssign(stage,="" size,="" grade,="" and="" necrosis)score.="" the="" multivariable="" analysis="" is="" demonstrated="" in="" table="" lb="" for="" trx1="" continuous="" expression.="" the="" investigation="" for="" categorized="" trx1="" showed="" similarly="" non-significant="">

Resultater av TCGA-analysen

Undersøkelsen av CNV av Trx1-genet i TCGA-dataene avslørte at diploid- og gain-genomvariasjoner i Trx1-genet var signifikant assosiert med mindre avanserte tumorstadier og klinikopatologiske trekk, mens tap oftere ble observert i høyere tumorstadier og var assosiert med avanserte tumorer. klinikopatologiske trekk (fig. 2A). Følgelig var tap assosiert med dårlige generelle, sykdomsspesifikke og progresjonsfrie intervaller (fig.2B).

Deretter ble genekspresjonsnivåene analysert i RNA-sekvensdataene. Det var ingen signifikant assosiasjon av Trx1-mRNA-nivåer med klinikopatologiske trekk (Fig.3A), og det var heller ingen kontinuerlig assosiasjon av mRNA-nivåer med overlevelsesutfall (Fig.3B). Somatiske mutasjoner av Trx1 var bare til stede hos to pasienter.

Diskusjon

Den nåværende studien hadde som mål å utforske den mulige rollen til det mest fremtredende medlemmet av tioredoksinfamilien, Trx1, i tumorbiologien til ccRCC. Vi demonstrerer at det er en kompartmentspesifikk assosiasjon av Trx1-uttrykk med overlevelsesresultat i ccRCC. mengden Trx1-proteinnivåer var korrelert med klinikopatologiske trekk: lavere Trx1-proteinnivåer var assosiert med avanserte klinikopatologiske trekk. Videre var det en korrelasjon av CNV(tap) med avanserte tumorstadier, mens det ikke var noen klar korrelasjon for Trx1 mRNA-nivåer med verken klinikopatologiske trekk eller overlevelsesutfall.

Redokssignalering er en kompartmentspesifikk biologisk prosess. Noen av tioredoksinene er kompartmentspesifikke proteiner og andre er i stand til å skytte mellom cellulære rom [1]. Den nåværende studien viser at ekspresjon av Trx1 i cytoplasmaet er assosiert med dårlig prognose i ccRCC, men på den annen side var høyere nivåer av Trx1 assosiert med mindre avanserte klinikopatologiske egenskaper. Dette funnet understreker tidligere publiserte rapporter fra noen av våre gruppemedlemmer. Berndt et al. viste at Trx1 undertrykker oversettelsen av HIF-2 og HIF-2 er en stor tumorfremganger i ccRCC[7,8]. Dette kan være mer uttalt hvis HIF-2 er lokalisert i cytoplasmaet[13]. Disse prekliniske dataene har blitt understreket i kliniske studier som undersøkte småmolekylære midler som hemmer HIF-2 hos pasienter med metastatisk ccRCC[14]. Første data fra kliniske fase I- og lI-studier har vist at disse midlene er aktive hos pasienter med ccRCC[15]. I sammenheng med funnene i den nåværende studien, kan de mindre avanserte klinisk-patologiske egenskapene i svulster med høyere Trx1-ekspresjon være en effekt av Trx1 på HIF-2-uttrykk. ccRCC-er har spesifikk tumorbiologi. Under fysiologiske forhold med tilstrekkelig oksygentilførsel, brytes HIF-2 konstant ned via en prosess som er orkestrert av von Hippel Lindau-proteinet (pVHL). I omtrent 90 prosent av ccRCC er imidlertid pVHL inaktivert og dermed overuttrykkes HIF-2 selv under normoksiske forhold[16]. Den spesielle redoksreguleringen via Trx1 i celler med inaktiv eller manglende pVHL er ennå ikke bestemt. Disse undersøkelsene må spesielt ta hensyn til de avdelingsspesifikke forskjellene.

Undersøkelsene av genetiske aspekter i TCGA-dataene har vist at det er en klar sammenheng mellom CNV, avanserte klinisk-patologiske egenskaper og dårlige overlevelsesresultater for ccRCC-pasienter. Vi forventet at tap av kopiantall kan være knyttet til lavere RNA-ekspresjon og at lavere RNA-ekspresjon er knyttet til dårlige prognostiske tumoregenskaper og prognose. Imidlertid var vår analyse av RNASeq-dataene fra TCGA ikke i stand til å demonstrere en assosiasjon av RNA-nivåer med dårlige prognostiske klinikopatologiske trekk. Faktisk viste kubiske splineanalyser at de pasientene med ccRCCs med medium RNA-ekspresjon av Trx1-genet hadde det verste overlevelsesresultatet. Selv om CNV-er er kjent i lang tid og den prognostiske betydningen av CNV-er har blitt demonstrert i flere studier i ccRCC, er den biologiske relevansen fortsatt ikke godt karakterisert [17,18]. Vårt funn understreker at CNV-er og RNA-ekspresjon ikke nødvendigvis er koblet sammen, og derfor må det biologiske grunnlaget for assosiasjonen av genomiske CNV-tap av Trx1 og avanserte klinikopatologiske egenskaper være gjenstand for fremtidige ytterligere undersøkelser.

De nåværende funnene har flere begrensninger som må vurderes ved tolkning av disse resultatene. Dette er en retrospektiv studie. Sammensetningen av studien kunne vært mer balansert med tanke på TNM-stadier. I tillegg kunne oppfølgingen vært lengre.

Noen av funnene våre ser ut til å være motstridende, høyere Trx1-nivåer i cytoplasmaet er assosiert med dårligere overlevelsesresultater, mens høyere Trx1-nivåer per se er assosiert med mindre avanserte klinisk-patologiske egenskaper. Redoks-signalering er en prosess som er kompartment- og kontekstspesifikk som andre biologiske prosesser, f.eks. den tumor-undertrykkende rollen til p53 eller transkripsjonsreguleringen av NFkB. Vi har tolket våre nåværende resultater i tråd med denne biologiske kunnskapen. Disse prima vista motstridende resultatene gir rom for ytterligere undersøkelser, spesielt den regulerende rollen til Trx1 på HIF-2 er et attraktivt mål med hensyn til de nåværende fase II kliniske studiene som undersøker HIF-2en hemming som et terapeutisk middel konsept i ccRCC og andre krefttyper. Vår gruppe har stor interesse for dette feltet og ytterligere undersøkelser pågår for tiden.

Oppsummert antyder den nåværende studien at Trx1 har en rolle i tumorbiologien til ccRCC. Mulige forklaringer på en viktig rolle for redokssignalering av ccRCC er regulering av immunrespons, reguleringer av metabolske veier og regulering av HIF-2-uttrykk. Derfor anbefaler den nåværende studien på det sterkeste intensiverte undersøkelser av redokssignalveier i ccRCC.

Referanser

1. Hanschmann EM, Godoy JR, Berndt C, Hudemann C, Lillig CH (2013) Tioredoksiner, glutaredoksiner og peroksiredoksiner – molekylære mekanismer og helsemessig betydning: fra kofaktorer til antioksidanter til redokssignalering. Antioxid Redox Signal 19:1539–1605
2. Lillig CH, Holmgren A (2007) Tioredoksin og relaterte molekyler – fra biologi til helse og sykdom. Antioxid Redox Signal 9:25–47
3. Berndt C, Lillig CH, Flohe L (2014) Redoksregulering av glutation trenger enzymer. Front Pharmacol5:168
4. Berndt C, Schwenn JD, Lillig CH (2015) Spesifisiteten til tioredoksiner og glutaredoksiner bestemmes av elektrostatisk og geometrisk komplementaritet. Chem Sci 6:7049-7058
5. Kaminska K, Czarnecka AM, Escudier B, Lian F, Szczylik C (2015) Interleukin-6 som en voksende regulator av nyrecellekreft. Urol Oncol 33:476–485
6. Choueiri TK, Motzer RJ (2017) Systemisk terapi for metastatisk nyrecellekarsinom. N Engl J Med 376:354–366
7. Raval RR, Lau KW, Tran MGB, Sowter HM, Mandriota SJ, Li JL, Pugh CW, Maxwell PH, Harris AL, Ratclife PJ (2005) Kontrasterende egenskaper av hypoksi-induserbar faktor 1 (HIF-1) og HIF-2 i von Hippel-Lindau-assosiert nyrecellekarsinom. Mol Cell Biol 25:5675-5686
8. Berndt C, Hanschmann EM, Urbainsky C, Jordt LM, Müller CS, Bodnar Y, Schipper S, Handorf O, Nowack R, Moulis JM, Schulzke C, Schünemann V, Lillig CH (2020) FeS-cluster coordination of vertebrate thioredoxins regulerer undertrykkelse av hypoksi-indusert faktor 2 gjennom jernregulerende protein 1. bioRxiv:2020.2008.2004.235721
9. Kononen J, Bubendorf L, Kallioniemi A, Barlund M, Schraml P, Leighton S, Torhorst J, Mihatsch MJ, Sauter G, Kallioniemi OP (1998) Vevsmikroarrays for high-throughput molekylær profilering av tumorprøver. Nat Med 4:844–847
10. Seligson DB, Yu H, Tze S, Said J, Pantuck AJ, Cohen P, Lee KW (2013) IGFBP-3 kjernefysisk lokalisering forutsier tilbakefall av prostatakreft hos mennesker. Hormoner Kreft 4:12–23
11. Godoy JR, Funke M, Ackermann W, Haunhorst P, Oesteritz S, Capani F, Elsasser HP, Lillig CH (2011) Redox atlas of the mouse. Immunhistokjemisk påvisning av proteiner fra glutaredoksin-, peroksiredoksin- og tioredoksinfamilien i forskjellige vev i laboratoriemusen. Biochim Biophys Acta 1810:2–92
12. Liu J, Lichtenberg T, Hoadley KA, Poisson LM, Lazar AJ, Cherniack AD, Kovatich AJ, Benz CC, Levine DA, Lee AV, Omberg L, Wolf DM, Shriver CD, Thorsson V, Cancer Genome Atlas Research N, Hu H (2018) En integrert TCGA pan-cancer klinisk dataressurs for å drive høykvalitets analyse av overlevelsesresultater. Cell 173:400–416 (e411)
13. Kroeger N, Seligson DB, Signoretti S, Yu H, Magyar CE, Huang J, Belldegrun AS, Pantuck AJ (2014) Dårlig prognose og avanserte klinikopatologiske trekk ved klarcellet nyrecellekarsinom (ccRCC) er assosiert med den cytoplasmatiske subcellulære lokaliseringen av hypoksi-induserbar faktor-2alfa. Eur J Cancer 50:1531–1540
14. Choueiri TK, Kaelin WG Jr (2020) Målretting mot HIF2-VEGF-aksen i nyrecellekarsinom. Nat Med 26:1519–1530
15. Choueiri TK, Plimack ER, Bauer TM, Merchan JR, Papadopoulos KP, McDermott DF, Michaelson MD, Appleman LJ, Thamake S, Zojwalla NJ, Jonasch E (2020) Fase I/II-studie av oral HIF{{2} }-hemmer MK-6482 hos pasienter med avansert klarcellet nyrecellekarsinom (RCC). J Clin Oncol 38:611–611
16. Nickerson ML, Jaeger E, Shi Y, Durocher JA, Mahurkar S, Zaridze D, Matveev V, Janout V, Kollarova H, Bencko V, Navratilova M, Szeszenia-Dabrowska N, Mates D, Mukeria A, Hol catova I, Schmidt LS, Toro JR, Karami S, Hung R, Gerard GF, Linehan WM, Merino M, Zbar B, Bofetta P, Brennan P, Rothman N, Chow WH, Waldman FM, Moore LE (2008) Forbedret identifikasjon av von Hippel- Lindau-genendringer i klarcellede nyresvulster. Clin Cancer Res 14:4726–4734
17. Thiesen HJ, Steinbeck F, Maruschke M, Koczan D, Ziems B, Hakenberg OW (2017) Stratifisering av klarcellet nyrecellekarsinom (ccRCC) genomer ved gen-rettet kopiantall endring (CNA) analyse. PLoS ONE 12:e0176659
18. Zhao M, Zhao Z (2016) Konkordans av kopiantallstap og nedregulering av tumorsuppressorgener: en pan-kreftstudie. BMC Genomics 17(Suppl 7):532