Flyktige bestanddeler av Cistanche Tubulosa og deres antioksidanter og antimikrobielle potensialer

Kontakt: Tinatina.xiang@wecistanche.com

Arafa Musa 1.2*, Khaled F.El-Massry3.4, Ahmed H.ElL-Ghorab34, Amr

Farouk◎4,Hazim M.Ali3, Mohamed A Abdelgawad⑤5.6,

Ibrahim A.Naguib◎7 og Ehab M. Mostafa◎1,2

Institutt for farmakognosi, College of Pharmacy, Jouf University, Sakaka, Aljouf72341, Saudi-arabisk

Institutt for farmakognosi, Det farmasøytiske fakultet, Al-Azhar University, Kairo, 1137I, Egypt Chemistry Department, College of Science, Jouf University, Sakaka, Aljouf 72341, Saudi-Arabia 'Smak- og aromaavdeling, National Research Center, Dokki, Giza, Egypt

Institutt for farmasøytisk kjemi, College of Pharmacy, Jouf University, Sakaka, Aljouf 72341, Saudi-Arabia

Institutt for farmasøytisk organisk kjemi, Det farmasøytiske fakultet, Beni-Suef University, Beni-Surf 62514, Egypt

'Department of Pharmaceutical Chemistry, College of Pharmacy, Taif University, POBox 11099, Taif 21944, Saudi-Arabia

(Mottatt 2. november 2020; Revidert 13. desember 2020; Godtatt 19. desember 2020)

Abstrakt: De hydrodestillerte flyktige bestanddelene avCistanche tubulosa(ofte kjent som Desert Ginseng) har blitt kjemisk og biologisk undersøkt. Basert på retensjonstidene og massefragmenteringen av det oppnådde GC-MS-kromatogrammet, er 106 individuelle komponenter som representerer ≈ 99,29 prosent av de totale flyktige bestanddelene identifisert. Hovedforbindelsene (66,57 prosent av den totale sammensetningen) ble identifisert som heksanal (15,98 prosent), trans-sabinylacetat (12,22 prosent), alloaromadendren (9,30 prosent), nonansyre (6,66 prosent).3Z-hekseny-2-metyl butanoat (6,09 prosent), valeranon (5,25 prosent), (E,E)- -Farnesen (3,18 prosent), -pinen (3,06 prosent), linalool isovalerat (3,03 prosent) og -humulen (1,8 prosent). Estimat avantioksidant aktivitetav EO viste lovende effekt ved 80 ug/ml konsentrasjon, den utøvde 62,40, 863,29 og 62,72 prosent hemming sammenlignet med TBHO som viste 78,62. 77,56 og 79,23 prosent hemming ved bruk av henholdsvis DPPH, ABTS og -karoten/linolsyre. Deantioksidant aktivitetble uttalt ved 80 ug/mL enn andre konsentrasjoner. De flyktige komponentene viste hemmende aktivitet mot gram-positive bakterier fra 2,23 mg/1{{10}}0 ml (for Staphylococcus aureus) og 15,68 mg/100 ml (for Bacillus cereus) sammenlignet med ciprofloksacin som viste hemmende aktivitet på henholdsvis 0,185 og 0,182 mg/100 ml. Dessuten varierer MIC for flyktige stoffer mot gramnegative bakterier fra 18,35 (Escherichia coli) til 31,61 mg/100 ml (Klebsiella pneumoni) sammenlignet med ciprofloksacin med henholdsvis 0,184 til 0,188 mg/ml. I tillegg var den soppdrepende aktiviteten mot candida Albicans ganske lovende (4,36 mg/ml).

Nøkkelord: Cistanche tubulosa; flyktige bestanddeler; antioksidant; antimikrobielle; Orobanchaceae.,

1. Introduksjon

Cistanche tubulosa, familien Orobanchaceae, er en flerårig parasittisk plante, som vokser i tørre områder i Asia og Afrika, den er påvist i Kina, India, Japan, Saudi-Arabia (Sakaka-ørkenen, Aljouf, KSA)[1]. Den har forskjellige vanlige navn i kinesisk medisin som Desert Hyacinth, Desert ginseng og Rou Cong Rong, stilken er saftig og kjøttfull med høyt vanninnhold [1-6]. Cistanche er kjent med flyktige og ikke-flyktige bestanddeler som kan inkludere lignaner, fenyletanoidglykosider, oligo- og polysakkarider, alkaloider og iridoider. På grunn av det store mangfoldet av fytokjemisk innhold og biologiske aktiviteter, har Cistanche fått en høy medisinsk verdi i kinesisk folkemedisin og tradisjonelle medisiner. Følgelig har det blitt brukt som et afrodisiakum i tilfelle impotens og infertilitet, avføringsmiddel ved senil forstoppelse, og funnet å ha nevrobeskyttende effekter, spesielt i tilfelle av Alzheimers. Parkinsons og depresjon, anti-aldring, anti-neoplastisk, antiblodplateaggregering, antifungal og antibakteriell, hepatobeskyttende, immunstimulerende,antioksidant, nyrestøtte og antitumor ved kolorektalt esophageal karsinom [1, 7-13]. Det brukes også i behandling av psykroalgi i knær og rygg, forbedring av immunitet og kognitive aktiviteter og som et antidepressivum [14-17]. Det har vist seg å ha en hypokolesterolemisk effekt som rapportert av Shimoda et al [18]. Litteraturundersøkelsen erklærte sikker bruk av Cistanche som en ikke-giftig plante på lang sikt [19]. Selv om C.tubulosa var kjent for de høye medisinske verdiene, spesielt i tradisjonell kinesisk medisin, har de flyktige bestanddelene knapt blitt studert, og deres kjemiske sammensetninger har ikke blitt fullstendig karakterisert. Den forrige undersøkelsen avdekket karakteriseringen av 38 komponenter fra C. salsa essensiell olje, 25 forbindelser fra C. deserticola olje, med de tre hovedkomponentene kjent som metyl 14-metylpentadekanoat (13,60 prosent) etylpalmitat (12,40 prosent ), og 2,5,6-trimetyloletan (7,61 prosent). Undersøkelsen avdekket også identifisering av 21 forbindelser kun fra den flyktige oljen C, tubulosa [1,20-22]. Videre er den biologiske aktiviteten til de flyktige bestanddelene ikke fullstendig undersøkt. Derfor er vårt mål å identifisere den kjemiske sammensetningen av de flyktige komponentene i C.tubulosa-blomster og anslå deresantioksidantogantimikrobiellaktiviteter.

2. Materialer og metoder

2.1. Plantemateriale

Cistanche tubulosa(Schenk) Krok. f.(Orobanchaceae) ble samlet i mars 2019 fra Sakaka-ørkenen, Aljouf, KSA. Identifikasjon av planten ble gjort av Mr. Hamdan Al-Hassan, M.Sc. (Camel and Range Research Center), Aljouf, KSA. Et kupongprøve (59-CPJU) ble arkivert i herbariet til Pharmacognosy Department, Pharmacy College, Jouf University.

2.2. Utvinning av flyktige bestanddeler

Blomstene til C.tubulosa ble samlet inn 2. mars 019, forsiktig vasket med rennende vann, og de flyktige bestanddelene ble ekstrahert ved standard hydrodestillasjonsmetode med Clevenger-apparat. 500 g friske blomster ble kuttet i små stykker og utsatt for hydrodestillasjon i 5 timer inntil det ikke ble produsert mer utbytte. destillatene ble separert fra den vandige fasen med en 500 ml volum skilletrakt. NaCl ble brukt til å fjerne resten av de flyktige komponentene fra det vandige laget ved hjelp av utsaltingsmekanismen. Den vandige fasen ble ristet flere ganger med CHC for å oppnå alle destillater. De kombinerte ekstraktene ble deretter filtrert gjennom et Whatman-filterpapir (nr. 40) etter å ha blitt ført over vannfritt Na2SO for dehydrering. Produktet ble beregnet som 0,36 prosent totale flyktige stoffer. De oppnådde bestanddelene var blekgul væske med en behagelig lukt. Den ble pakket i en tørr ren og tett lukket ugjennomsiktig flaske og holdt mørkt ved 4 grader for analyse.

2.3. Gasskromatografi og gasskromatografi-massespektrometri (GC-MS)

Modellen 6890 av en Agilent gasskromatograf levert med en 120 m × 0,25 mm id(df=0.25 um) sementert fase HP-5MS fast silikakapillærkolonne (Agilent, Folsom , CA) og flammeioniseringsdetektor (FID) ble brukt for analyse av flyktige ekstrakter. Temperaturen i ovnen ble justert fra 60 til 240 grader C ved 3 grader C/min. og holdt i 50 minutter. Bærergassen med lineært helium-tilførselsforhold var 20 cm/sek. Temperaturen på injektoren og detektoren var 250 grader.

De flyktige komponentene ble analysert av Agilent Technologies modell 7890B GC koblet til Agilent 7000D GC/TQ massedetektor (GC/MS) og Agilent 7693A autosampler. Ionisering ved 70 eV, HP-5MS kolonne (120m x0,25 mm id). Hele prosessen ble utført ved 30 cm/s konstante hastigheter av mobilfasen (He) og konstant temperatur ved 250 grader C for både injektor og detektor. Ovnstemperaturen ble programmert fra 60 til 240 grader ved 3 grader/min og holdt i 50 minutter.

Samtidig injeksjon av prøven med en løsning av homologe n-hydrokarboner (Cg-C26)-serien under de samme forholdene ble utført for å bestemme Kovats-indeksverdier. Identifikasjon av de isolerte flyktige stoffene ble gjort ved å matche med NISTmass-spektrale bibliotekdata, sammenligning av Kovats-indekser med autentiske komponenter og med publiserte data. Kvantitativ bestemmelse ble utført i henhold til topparealintegrasjon.

2.4.Antioksidantaktivitet

2.4.1. DPPH Radical Scavenging Assay

Potensialetantioksidant aktivitetav de oppnådde flyktige bestanddelene ble evaluert ved standard DPPH-metoden, tert-butylhydrokinon (TBHQ) ble brukt som et standard antioksidantmedikament. Målingen av absorpsjon ble utført ved λmax 517 nm på UV-spektrofotometer (HP 8452, UV-VIS), alle tester ble utført i triplikater og gjennomsnittet av resultatene ble beregnet [23, 24].

2.4.2. -Karotenblekingsanalyse

Standard-karoten/linolsyremetoden ble brukt for å bestemme antioksidantaktiviteten til C. tubulosa flyktige bestanddeler som tidligere beskrevet, i forhold til standard antioksidanten tert-butylhydrokinon (TBHQ). Alle testene ble målt i triplikater ved λmax470 nm over 60 minutter med start fra O-minuttet, og gjennomsnittet av resultatene ble beregnet [23,24].

2.4.3.ABTS Free Radical Assay

ABTS [2,2'-azino-bis(3-etylbenzotiazolin-6-sulfonsyre) ble brukt for antioksidantbestemmelse av C. tubulosa flyktige bestanddeler som beskrevet i litteraturen [25], i sammenligning. til standard antioksidanten tert-butylhydrokinon (TBHQ). Alle testene ble målt i triplikater ved λax734 nm over 60 minutter fra 0 minutter, og gjennomsnittet av resultatene ble beregnet [26]. Følgende ligning ble brukt for å beregne frie radikalers fjernende effekt i alle metoder prosent hemming=A (kontroll)-A (test eller standard)/ A (kontroll)× 100, hvor, A=Absorbans

2.5. Antimikrobiell analyse

2.5.1. Fremstilling av mikrobielle suspensjoner

Ni stammer av patogene mikroorganismer som anses som hovedkilden til flere sykdommer og matforgiftning ble valgt ut forantimikrobiellanalyse inkludert S. aureus, B. cereus E. fecalis og L. monocytogenes ble brukt som G plus ve bakterier, E. coli, P. aeruginosa, K. pneumonia og Salmonella Typhimurium som G-ve bakterier. I tillegg ble C.albicans brukt som en soppstamme. Metoden for kvantitativ minimum hemmende konsentrasjon (MIC) ble brukt forantimikrobiellestimering av de flyktige bestanddelene av C. tubulosa. Bakterie- og soppsuspensjonene ble fremstilt i passende

buljongmedier for hver (Muller Hinton Sabaroud Dekstrose for henholdsvis bakterier og sopp). Inkubering av hver stamme med riktig medium ble utført i 24 timer ved 37 grader C for bakterier og 28 grader for sopp. Etter inkubasjonsperioden og seriefortynningene av de forberedte suspensjonene, ble visse fortynninger valgt i henhold til 0.5 Mc-Farlandscale-standardene for analysen. Standard ciprofloksacin og flukonazol ble fremstilt i 100 ug/ml og brukt som henholdsvis antimikrobielle og antifungale legemidler [28-30].

2.5.2. Minimum hemmende konsentrasjonsmetode (MIC)

En mikrotiter fortynningsplate kvantitativ metode ble brukt, hvor metoden med minimum hemmende konsentrasjon (MIC) ble brukt for vurdering av den antimikrobielle aktiviteten til C. tubulosa flyktige bestanddeler, mot visse mikroorganismer som nevnt. En steril {{0}}mikroplatebrønn ble brukt, hvor 100μL av de respektive mikroorganismene i konsentrasjoner på （0,5 Mc-Farland, ca. 1×108cfu/mL) ble separat blandet med det oppnådde destillatet i forskjellige konsentrasjoner( 100 prosent , etterfulgt av to ganger seriefortynninger). Ciprofloxacin og flukonazol ble brukt som henholdsvis positive antibakterielle og antifungale standarder, mens DMSO ble brukt som negativ kontroll. Mikroplaten med det blandede innholdet i hver brønn ble inkubert i 24 timer ved ≈37 grader C for bakterier og 28 grader for sopp. Platene ble deretter visualisert for eventuell vekstutfelling av de testede organismene. Alle eksperimenter ble utført i triplikater og MIC ble beregnet som den laveste konsentrasjonen som hemmet eller hindret veksten av de testede mikroorganismene [27].

3. Resultater og diskusjon

3.1.Analyse av flyktige bestanddeler

I vår studie ga hydrodestillasjon av C. tubulosa-blomster 0.36 prosent blekgult destillat, med

en aromatisk duftende lukt og 106 flyktige komponenter (tabell 1) som representerer 99,29 prosent av innholdet av flyktige stoffer. Disse komponentene ble kategorisert som 5 monoterpener, 15 seskviterpener, 62 lette oksygenerte forbindelser som representerer den største gruppeforbindelsene, og 24 tunge oksygenerte forbindelser. Hovedkomponentene i de flyktige komponentene ble identifisert som heksanal (15,98 prosent), trans-sabinylacetat (12,22 prosent), alloaromadendren (9,30 prosent), nonansyre (6,66 prosent), 3Z-heksenyl-2-metylbutanoat (6,09). prosent ), valeranon(5,25 prosent ),(E,E)- -Farnesen(3,18 prosent o), -pinen(3,06 prosent),linaloolisovalerat(3,03 prosent), -humulen(1,8 prosent),Jasminol(1,58) prosent ),4-hydroksybenzaldehyd (1,56 prosent ), Geosmin (1,44 prosent ), 3Z-heksenylisobutanoat (1,39 prosent ) og geranylaceton (1,38 prosent ). Men resultater fra tidligere litteraturstudier, som ble publisert av Jiang og Tus 2009 ble bare 21 flyktige komponenter identifisert i den essensielle oljen til C. tubulosa, 38 komponenter ble også karakterisert fra C. salsa essensiell olje, mens 25 forbindelser ble identifisert fra oljen til C. deserticola, med tre hovedkomponenter (metyl { {52}}metylpentadekanoat;13,60 prosent, etylpalmitat;12,40 prosent, og 2,5,6-trimetylolet ane;7,61 prosent )[22,28]. Identifikasjon av de isolerte flyktige stoffene ble gjort tentativt ved å matche med NIST-massespektrale bibliotekdata, ytterligere bekreftet ved sammenligning av Kovats-indekser med de for autentiske komponenter så vel som med de publiserte dataene [29-31]. Det ble funnet at den beregnede KI for identifiserte forbindelser faller i KI-området til de som er publisert i litteraturen. For eksempel beregnet og publisert KI for trans Sabinyl acetate (1287& 1273-1289),aromadendrene (1444& 1430-1450),valeranone(1678,1668-1679),allo-aromadendrene(1459& {{74) }}), -Farnesen(1508& 1505-1520), heksenyl-2-metylbutanoat (1230& 1210-1231), -humulen(1455& 1452-1570), -pinen (971& {{86) }})[32-36].I henhold til de nevnte KI-verdiene var de identifiserte forbindelsene i samsvar med de som er rapportert i litteraturen [37-40].

3.2.Resultater av antioksidantanalyse

DPPH-, ABTS- og -karotenanalyser ble brukt for å undersøke antioksidantaktiviteten til C. tubulosa flyktige bestanddeler, resultatene viste pålitelig antioksidantaktivitet til de testede flyktige stoffene (tabell 2). Den nåværende studien indikerte at renseevnen til C. tubulosa flyktige bestanddeler ved forskjellige konsentrasjoner (ug/mL) varierte fra 26,08 prosent til 62,40 prosent for DPPH-analysen, mens fra 25,71 til 63,29 prosent og 27,31 til 62,72 prosent ved }}）ug/mL for henholdsvis ABTS- og -karoten-testsystemene, sammenlignet med standard TBHQ-antioksidantmedisin, som viste 43,15 til 78,62 prosent, 41,32 til 77,56 prosent og 42,21 til 79,23 prosent ved (20-80)ug /ml for henholdsvis DPPH-, ABTS- og -karotentestsystemene. Den lovende antioksidantaktiviteten kan tilskrives tilstedeværelsen av svært aktive kompleksblandinger i destillatet som alloaromadendren (9,3 prosent), valeranon (5,25 prosent), (E, E)- -Farnesen (3,18 prosent) og -pinen (3,06 prosent ) som skulle ha uttalt innvirkning på antioksidantaktiviteten. I følge litteraturundersøkelsen kan den biologiske målaktiviteten til de flyktige bestanddelene tilskrives den eksisterende blandingen av terpenoid- og fenoliske komponenter, som er kjent for å ha antimikrobielle og antioksidantaktiviteter og kan forsterke eller synergi målaktivitetene [32].

3.3. Resultater av antimikrobiell analyse

MIC (minimum hemmende konsentrasjon)-metoden ble brukt for å teste den antimikrobielle aktiviteten til de flyktige bestanddelene av C. tubulosa mot ni patogene mikroorganismer av animalsk opprinnelse ble undersøkt. Destillatet viste sterk aktivitet mot S. aureus med MIC 2,23 mg/100mL og moderat effekt mot C. Albicans (MIC=4.36 mg/100mL), tabell 3.

4. Konklusjon

De flyktige komponentene i C. tubulosa eller vanligvis kjent som Desert Ginseng består hovedsakelig av heksanal (15,98 prosent), trans-sabinylacetat (12,22 prosent), allo-aromadendren (9,30 prosent), nonansyre (6,66 prosent), 3Z-heksenyl -2-metylbutanoat (6,09 prosent), valeranon (5,25 prosent), (E, E)- -Farnesen (3,18 prosent), -pinen (3,06 prosent), linalool isovalerat (3,03 prosent) og -humulen (1,8 prosent ), som var karakterisert ved deres retensjonstider og fragmenteringsmønsteret for hver, i GC-MS-kromatogrammet, samt sammenligning med litteraturen. Disse komponentene viste lovende antioksidanteffekter ved konsentrasjoner på 80 ug/ml og relativt like resultater ved bruk av tre metoder for analysen. Den viste også sterke antimikrobielle og antifungale aktiviteter mot S. aureus L. monocytogenes og C. Albicans sammenlignet med ciprofloksacin og flukonazol.

Anerkjennelser

Forfatterne takker dekanatet for vitenskapelig forskning ved Jouf University for å finansiere dette arbeidet gjennom forskningsstipend nr (DSR2020-04-453), og til Taif University Researchers Supporting Project nummer (TURSP-2020/56), Taif University, Taif, Saudi-Arabia.

Interessekonflikt

Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter.

Referanser

[1]Y. Jiang og P.-F.Tu (2009). Analyse av kjemiske bestanddeler i Cistanche-arter, J. Chrom. A.1216(11),1970-1979.

[2]L. Zhiming, L. Huinuan, G. Long, G. Jingwen og T. Chi-Meng (2016). Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): En av de beste farmasøytiske gavene innen tradisjonell kinesisk medisin, Front. Pharmacol.7,41.

[3]C. Gu, X. Yang og L.Huang (2016). Cistanches Herba: en nevrofarmakologisk gjennomgang, Front.Pharmacol. 7.289.

[4]EM Abdallah (2017). Antimikrobiell evaluering av blomstrende stilker av Cistanche violacea, en holoparasitisk plante samlet fra den tørre regionen i Qassim, Saudi-Arabia, Pharma.Biol. Eval.4(6),239-244.

[5]K.Zwe-Ling, J.Athira, K. Fan-Chi, H.Jia-Ling og C. Shu-Chun (2018). Effekt av Cistanche tubulosa-ekstrakter på mannlig reproduksjonsfunksjon hos streptozotocin-nikotinamid-indusert diabetiker rotter, Næringsstoffer 10(10),1562.

[6]W.Lin-lin, D.Hui, Y.He-shui, L.Qing-hai, Z. Li-juan og S. Xin-bo (2015). Cistanches Herba: kjemiske bestanddeler og farmakologiske effekter, Chin. Urt. Med.

7(2),135-142. 

[7]F.Changshuang, L.Jinyu, A. Adila, X.Lijie, Y.Yi, C.Qiuyan, L. Jie, W.Xinhui og L.Jinyao (2019). Cistanche tubulosa fenyletanoidglykosider induserer apoptose i Eca-109-celler via den mitokondrieavhengige veien, Oncol. Lett.17(1),303-313.

[8]Q.Xu, W.Fan, S.-F.Ye, Y.-B.Cong, W.Qin, S.-Y.Chen og J.Cai (2016). Cistanche tubulosa beskytter dopaminerge nevroner gjennom regulering av apoptose og gliacelle-avledet nevrotrofisk faktor: in vivo og in vitro, Front. Aldrende Neurosci. 8.295.

[9]N.Wang, S.Ji, H. Zhang, S.Mei, L. Qiao og X. Jin (2017). Herba Cistanches: anti-aldring, Aging Diseas.8(6), 740.

[10]A. Bougandoura, B.D'Abrosca, S. Ameddah, M. Scognamiglio, R. Mekkiou, A. Fiorentino, S.Benayache og F. Benayache(2016). Kjemiske bestanddeler og in vitro antiinflammatorisk aktivitet av Cistanche violacea Desf.(Orobanchaceae) ekstrakt, Fitoterapia 109,248-253.

[11]Z.Jiang, J. Wang, X. Li og X. Zhang (2016). Echinacoside og Cistanche tubulosa (Schenk)R, lindrer bisfenol A-indusert testikkel- og sædskade hos rotter gjennom gonadakseregulerte steroidogene enzymer, J. Ethnopharmacol.193,321-328.

[12]CJ.Wu, MY Chien, NH Lin, YCLin, WYChen, CHChen og JTC Tzen (2019). Echinacoside isolert fra Cistanche tubulosa stimulerer antatt veksthormonsekresjon via aktivering av ghrelinreseptoren, Molecules 24(4),720.

[13]X.Wang og Y. Guo (2017). Rask samtidig bestemmelse av seks effektive komponenter i Cistanche tubulosa ved nær-infrarød spektroskopi, Molecules 22(5), 843.

[14]AEAl-Snafi (2020). Bioaktive metabolitter og farmakologi av Cistanche tubulosa-A review.IOSR J. Pharm.10(1), 37-46.

[15]D. Wang, H. Wang og L. Gu (2017). De antidepressive og kognitive forbedringsaktivitetene til den tradisjonelle kinesiske urten Cistanche, Evid. Basert Complex.Altern. Med.2017,3925903.

[16]AE Al-Snafi(2016).Immunologiske effekter av medisinplanter: En oversikt(del 2), Immun.Endocr. Metab.Agents Med. Chem.16(2), 100-121.

[17]AS Al-Menhali, SA Jameela, AA Latiff, MA Elrayess, M.Alsayrafi og M. Jaganjac(2017). Cistanche tubulosa induserer reaktive oksygenarter-mediert apoptose av primære og metastatiske humane tykktarmskreftceller, J.Applied Pharm.Sci.7(5), 039-045.

[18]H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, SJ Shan og MH Su(2009). De hypokolesterolemiske effektene av Cistanche tubulosa-ekstrakt, en tradisjonell kinesisk råmedisin, hos mus, Amer.J. Chin.Med.37(6),1125-1138.

[19]XY Wang, R. Xu, J.Chen, JY Song, SG Newmaster, JPHan, Z.Zhang og SLChen (2018). Påvisning av Cistanches herba (Rou Cong Rong) legemidler ved bruk av artsspesifikke nukleotidsignaturer, Front. Plant Sci.9,1643.

[20]NSDu, SHQu, XD Re, JT Ni, HOZhang og HJ. Yan (1988). Studie på sammensetningen av den essensielle oljen fra Cistanche salsa G, Youji Huax. 8, 522-525.

[21]C. Formisano, D. Rigano, F. Senatore, M. SJ Simmonds, A.Bisio, M.Bruno og S.Rosselli (2008). Sammensetning av essensielle oljer og fôringshemmende egenskaper til Bellardia trixago(L.) Alle. (sin. Bartsia trixago L.)(Scrophulariaceae), Biochem. System. Ecol.36(5-6), 454-457.

[22]SJ Roudbarak og D. Nori-Shargh(2016). Den flyktige bestanddelsanalysen til Orobanche alba Stephan fra Iran, Current Anal. Chem. 12(5), 496-499.

[23]A.Baran, E. Karaklic, O.Faiz og F.Ozen (2020). Syntese av kalkonholdig sink og koboltmetallftalocyaniner; undersøkelse av deres fotokjemiske, DPPH radikale rensende og metallchelaterende karakterer, Org.Commun..13(2), 65-78.

[24]A. Musa, NS Al-muaikel og MS Abdel-Bakky (2016). Fytokjemiske og farmakologiske evalueringer av etanolisk ekstrakt av Bassia eriophora, Der Pharm Chem.8(12),169-178.

[25]MM Ramadan, MMAli, KZ Ghanem og AH El-Ghorab(2015). Eteriske oljer fra egyptiske aromatiske planter som antioksidanter og nye antikreftmidler i humane kreftcellelinjer, Gras.y Aceites 66(2), e080.

[26]ZQ He, XY Shen, ZYCheng, RL Wang, PX Lai og X. Xing(2020). Kjemisk sammensetning, antibakteriell, antioksidant og cytotoksisk aktivitet av den essensielle oljen til Dianella ensifolig, Rec, Nat. Prod 14(2), 160-165.

[27]A. Hamed, B. Mahmoud, M. Samy, EM Mostafa.A. Wanas. M.Radwan, M. Elsohly og M. Kamel (2019). Fytokjemiske og antimikrobielle studier av Markhamia platycalyx(Baker) Sprague-blader, Trop.J. Pharm. Res.18,2623-263.

[28]MM Ghoneim, A. Musa, AAEl-Hela og KMElokely(2018). Evaluering og forståelse av det molekylære grunnlaget for den antimeticillin-resistente Staphylococcus aureus-aktiviteten til sekundære metabolitter isolert fra Lamium amplexicaule, Pharmacog. Mag. 14(55), S3-S7.

[29]MA Abdelgawad,AMMohamed,A.Musa, EMMostafa og HMAwad (2018). Syntese, kromatografisk separasjon og antimikrobiell utvikling av ny isokinolin-8-ol, J.Pharm. Sci. Res. 10(6),1314-1318.

[30]A. Musa(2019). Kjemiske bestanddeler, antimikrobielle og antiinflammatoriske evalueringer av ulike ekstrakter av suaeda vera gaffel. vokser i Saudi-Arabia, Int.J. Pharm. Res. 11(4),962-967.

[31]RP, Adams(2017).Identifisering av essensielle oljekomponenter ved gasskromatografi/massespektrometri, red. 4.1., Allured publiseringsselskap, Carol Stream.

[32]BFM T, Andrade. LNBarbosa.IS Probst og AFJunior (2014).Antimikrobiell aktivitet av essensielle oljer, J. Essent. Olje Res. 26(1), 34-40.

[33]V, Babushok, P.Linstrom og I. Zenkevich(2011). Retensjonsindekser for ofte rapporterte forbindelser av planteessensielle oljer, J. Phys. og Chem. Ref. Data 40(4), 043101.

[34]J.Alencar, A. Craveiro og FdA Matos(1984). Kovats' indekser som en forhåndsutvalgsrutine i massespektrabiblioteksøk av flyktige stoffer, J. Nat. Prod. 47(5),890-892.

[351M.Y. Tian, ​​XG Zhao, XH Wu, Y.Hong, Q. Chen, XLLiu og Y.Zhou(2020). Kjemisk sammensetning, antibakterielle og cytotoksiske aktiviteter av den essensielle oljen fra Ficus tikoua Bur, Rec.Nat.Prod. 14,219-224.

[36]A. Judzentiene, F. Tomi og J. Casanova(2009). Analyse av essensielle oljer av Artemisia absinthium L. fra Litauen av CC, GC(RI), GC-MS og13C NMR.Nat. Prod. Comm. 4(8),1934578X0900400820.

[37]PH Ribeiro, LM Santos, C.AG.Camara,FSBorn og CWFagg(2016). Sesongmessige kjemiske sammensetninger av essensielle oljer fra to eugenia-arter og deres akaricide egenskaper, Ouim. Nova.39, 38-43.

[38]J.Calva, JMCastillo, N.Bec, J.Ramirez,JMAndrade, C.Larroque og C. Armijos(2019). Kjemisk sammensetning, enantiomer distribusjon og AChE-BChE-aktiviteter av den essensielle oljen til Myrteola phylicoides (Benth)Landrum fra Ecuador, Rec. Nat. Prod. 13,355-362.

[39]EM Mostafa (2020). Utforskning av aurora B og syklinavhengige kinase 4-hemmere isolert fra scorzonera tortuosissima Boiss. og deres dokkingstudier, Pharmacog. Mag.16(96),258-263.

[40]J.Yan, XBLiu, W.-W.Zhu, X.Zhong, Q. Sun og Y.-Z.Liang(2015). Retensjonsindekser for identifikasjon av aromaforbindelser ved GC: Utvikling og anvendelse av en retensjonsindeksdatabase, Chromatographia 78(1-2), 89-108.