Cistanche Tubulosa induserer reaktiv oksygen artsmediert apoptose av primære og metastatiske humane tykktarmskreftceller

ABSTRAKT

Tykktarmskreft er den tredje vanligste kreftformen på verdensbasis. Konvensjonelle terapier har vist moderat effekt med alvorlige bivirkninger, derfor er det et presserende behov for sikrere alternativer. I denne studien ble Cistanche tubulosa, det lokale navnet Thanoon, ansett som en potensiell fytoterapeutisk strategi på grunn av dets kjente høye terapeutiske potensial i tradisjonell medisin og store overflod i Midtøsten-regionen. Bioaktive forbindelser ble ekstrahert fra pulverisert Cistanche tubulosa og testet for deres antikreftegenskaper mot fire tykktarmskreftcellelinjer inkludert to avledet fra den primære svulsten (CaCo2 og HCT116) og to avledet fra det metastatiske stedet (LoVo og SW620).

Effekten av Cistanche tubulosa på induksjon av apoptose og cellulær redokshomeostase ble også undersøkt. Cistanche tubulosa viste en konsentrasjon og tidsavhengig hemming av proliferasjon av alle testede kreftcellelinjer med mer enn 60 prosent etter 72 timers behandling med 1 mg/ml råekstrakt. Inhibering av proliferasjon var preget av induksjon av apoptose, intracellulær reaktiv oksygenproduksjon og mitokondrielle superoksider. Disse dataene tyder på at Cistanche tubulosa er en lovende kandidat for additiv anti-tykktarmskreftbehandling. Dette er den første studien som viser antikreftbioaktiviteten til Cistanche tubulosa mot tykktarmskreftceller.

Klikk medisinsk terapi av cistanche planteekstraktprodukt

Forkortelser:

7-AAD, 7-Amino-Actinomycin D; CTE, Cistanche tubulosa-ekstrakt; EMEM, Eagle's Minimum Essential Medium; FBS, føtalt bovint serum; DCF, 2,7-diklorfluorescein; DCFH-DA, 2,7-diklordihydrofluoresceindiacetat; DMEM, Dulbecco's Modified Eagle's Medium; DMSO, dimetylsulfoksid; MTT, 3-[4,5-dimetyltiazol-2-yl]-2,5-difenyltetrazolium; PE, phycoerytrin; RFU, relative fluorescensenheter; ROS, reaktive oksygenarter

INTRODUKSJON

Kolorektal kreft er en av de vanligste kreftformene på verdensbasis (Brenner et al., 2014), og forekomsten øker stadig med anslagsvis 2,4 millioner tilfeller i 2035, på grunn av moderne kosthold og livsstil, sammen med redusert fysisk aktivitet. Nåværende innsats er ikke tilstrekkelig for å bekjempe den nåværende epidemien av tykktarmskreft, og derfor er nye tilnærminger nødvendig for effektiv forebygging og behandling, inkludert endringer i livsstil i kombinasjon med sikrere alternative intervensjoner som fytoterapeutika (Weidner et al., 2015). Fytoterapi, bruken av medisinplanter for å behandle sykdommer, har vært en uunngåelig del av gammel menneskelig historie. Medisinplanter har lenge vært brukt som alternative behandlingskilder for kreft, og representerer mer enn seksti prosent av kreftmidler som brukes i konvensjonell medisin (Balunas og Kinghorn, 2005; Saibu et al., 2015). Noen av de mest kjente eksemplene inkluderer ekstrakter fra Catharanthus roseus G. Don. (Apocynaceae), Taxus baccata L. (Taxaceae) og Camptotheca acuminate Decne (Nyssaceae) (Cragg og Newman, 2005; da Rocha et al., 2001). Flere urteekstrakter og fytokjemikalier ble vist å utøve antitumoreffekter i tykktarmskreft tilskrevet induksjon av reaktive oksygenarter (ROS) produksjon og assosiert apoptose av kreftceller som i tilfellet med ekstrakter fra Melissa officinalis (Weidner et al., 2015).

Blant fytoterapeutiske kandidater har Cistanche tubulosa, en Orobanchaceae parasittisk ørkenplante (Jiang et al., 2009) som er vidt distribuert i tørre og halvtørre områder i Afrika, Asia og Middelhavsregionen, vist seg å ha verdifulle medisinske egenskaper. Cistanche tubulosa har blitt mye brukt i tradisjonell medisin og antydes å ha helbredende effekter ved nyremangel, sykelig leukoré, metroragi, kvinnelig infertilitet og senil forstoppelse (Jiang et al., 2009). I tillegg til tradisjonelle medisinske bruksområder, viktige medisinske egenskapene til Cistanche Tubulosa har blitt intensivt studert i løpet av det siste tiåret, inkludert vasorelakserende (Yoshikawa et al., 2006), hepatobeskyttende (Morikawa et al, 2010), antihyperglykemiske og hypolipidemiske effekter (Xiong et al., 2013). Cistanche Tubulosa ble også foreslått som en potent forsterker av immunsystemet, en promoter for beindannelse og et middel mot aldring og tretthet (Xu et al., 2014). Videre har Cistanche tubulosa-ekstraktet vist seg å blokkere amyloidavsetning i Alzheimers sykdomsmodell (Wu et al., 2015). Til tross for dens ulike terapeutiske bruksområder, er effekten av Cistanche Tubulosa som et potensielt kreftmiddel ikke studert ennå.

I dette arbeidet har vi undersøkt antikrefteffekten av Cistanche Tubulosa på to primære og to metastatiske tykktarmskreftcellelinjer og de potensielle mekanismene som ligger til grunn for denne effekten.

MATERIALER OG METODER

Innsamling og tilberedning av planteekstrakt, prøvene av Cistanche tubulosa ble samlet inn fra et ørkenområde i Qatar i 2014 og plantens autentisitet ble bekreftet av en herbolog. Bilagsprøver arkiveres i Toksikologi- og flerbruksavdelingen ved ADLQ. De soltørkede planteprøvene ble malt med Retsch Knife Mill Grindomix GM300 til fint pulver. Tjue gram pulver ble ekstrahert med 200 ml ultrarent vann over natten ved 37 grader på en roterende rister ved 200 rpm. De urene Cistanche tubulosa-ekstraktene (CTE) ble sentrifugert i 30 minutter ved 8000 rpm for å pelletere uløselige forbindelser, supernatanten ble samlet opp og frysetørket ved bruk av Labconco Freezone 6 plus frysetørker. Det tørkede ekstraktet ble rekonstituert i Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM, SIGMA, Tyskland) til en konsentrasjon på 20 mg/ml og sterilfiltrert gjennom et 0,2- mikron membranfilter.

Cellelinjer og cellevedlikehold

Humane tykktarmskarsinomcellelinjer CaCo2, SW620 og LoVo ble hentet fra Cell Lines Service (CLS, Eppelheim, Tyskland) mens HCT 116-cellelinjen var en snill gave fra Biological and Environmental Sciences, Department ved Qatar University. CaCo2 og HCT11 ble avledet fra det primære stedet for kolonkarsinom, mens SW620 og LoVo ble avledet fra det metastatiske stedet. SW620-, HCT116- og LoVo-celler ble dyrket og opprettholdt i DME-medium mens CaCo2-celler ble opprettholdt i Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM, SIGMA, Tyskland). Cellene ble dyrket som monolag dyrket ved 37 grader i respektive medium supplert med 10 prosent føtalt bovint serum (FBS, SIGMA, Tyskland) og 1 prosent Penicillin/Streptomycin (SIGMA, Tyskland) i en fuktet atmosfære inneholdende 5 prosent karbondioksid.

Cellelevedyktighetsanalyse

{{0}}[4,5-dimetyltiazol-2-yl]-2,5-difenyltetrazolium (MTT)-analysen ble brukt til å evaluere den cytotoksiske aktiviteten til CTE på samme måte som beskrevet tidligere (Jaganjac et al., 2010). Seedingstettheten til CaCo2-, HCT116-, SW62-0- og LoVo-celler dyrket i 96-brønnplater var 104 celler per brønn. Celler ble sådd ut i respektive medium supplert med 10 prosent FBS 24 timer før behandling. Etter 24 timer ble mediet fjernet og cellene ble behandlet med 0, 0,25, 0,5, 1 og 2 mg/ml CTE i 24, 48 og 72 timer ved 37 grader i en fuktet atmosfære inneholdende 5 prosent CO2. Etter CTE-behandling ble mediet fjernet og 40 µL MTT-løsning (0,5 mg/ml) ble tilsatt til hver brønn.

Etter 3 timers inkubering ble MTT-løsningen fjernet, formazanproduktet oppløst i dimetylsulfoksid (DMSO, SIGMA, Tyskland), og absorbansen ble målt ved 590 nm med en mikroplateleser (Infinite 200 PRO NanoQuant, Tecan Trading AG, Sveits) .

Apoptoseanalyse

Apoptose i CaCo2-, HCT116-, SW62-0- og LoVo-celler ble oppdaget ved bruk av PE Annexin V Apoptosis Detection Kit I med 7-Amino-Actinomycin D (7-AAD) som et viktig fargestoff (Becton) Dickinson International, Belgia) i henhold til produsentens instruksjoner. Kort fortalt ble celler sådd i 24-brønnplater med en tetthet på 5×104 celler/brønn i et respektive medium supplert med 10 prosent FBS i 24 timer før tilsetning av CTE (0, 0,5) eller 1 mg/ml). Etter 24 CTE-inkubering ble cellene høstet, vasket to ganger med kald fosfatbufret saltvann og farget med Phycoerythrin (PE) Annexin V og 7-AAD i 15 minutter ved romtemperatur i mørket. Fargede celler ble analysert innen 1 time ved flowcytometri ved bruk av FACS. Aria III flowcytometer og FACSDiva-programvare (Becton Dickinson) med lav strømningshastighet med minimum 104 celler. Behandling av celler i 4 timer med 6 µM camptothecin (SIGMA) ble brukt som en positiv kontroll for analysen.

Intracellulær ROS-produksjon

Intracellulær ROS-produksjon ble undersøkt ved bruk av 2,7- diklordihydrofluoresceindiacetat (DCFH-DA, SIGMA, Tyskland). DCFH-DA er en ikke-fluorescerende sonde, som oksideres med intracellulær ROS til den fluorescerende forbindelsen 2,7- diklorfluorescein (DCF) (Poljak-Blazi et al., 2011). DCFHDA-analysen ble utført på samme måte som vi har beskrevet tidligere (Cindric et al, 2013; Poljak-Blazi et al., 2011). Kort fortalt var såtettheten til CaCo2-, HCT116-, SW620- og LoVo-celler dyrket i 96-brønns sorte plater 104 celler per brønn. Celler ble sådd ut i respektive medium supplert med 10 prosent FBS i 24 timer.

Før behandling ble cellene inkubert med 10 µM DCFH-DA ved 37 grader i 30 minutter i 5 prosent CO2 / 95 prosent luft. Cellene ble deretter vasket ogbehandlet med {{0}}, 0,5 og 1 mg/mL CTE i mediet uten fenolrødt. Den intracellulære ROS-dannelsen ble overvåket kontinuerlig gjennom 25 timer ved 37 grader og 5 prosent CO2 ved bruk av en mikroplateleser med toppfluorescens og gasskontrollmodul (Infinite 200 PRO, Tecan Trading AG, Sveits). Fluorescensintensiteten ble målt med en eksitasjonsbølgelengde på 500 nm og emisjonsdeteksjon ved 529 nm. De vilkårlige enhetene, relative fluorescensenheter (RFU), var basert direkte på fluorescensintensitet

Generering av mitokondriell superoksid

CTEs evne til å indusere superoksidgenerering av mitokondrier ble estimert ved bruk av en cellegjennomtrengelig, mitokondriemålrettet MitoSOX Red-probe (Life Technologies) og Hoechst 33342 for kjernefysisk farging (Life Technologies). CaCo2-, HCT116-, SW620- og LoVo-celler ble sådd i 96-brønnplater med en tetthet på 104 celler per brønn i et respektive medium supplert med 10 prosent FBS i 24 timer . Cellene ble deretter lastet med 4 µM MitoSOX og 2 µM Hoechst 33342 i 20 minutter, overflødig farge ble vasket og brønnene behandlet med 0, 0,5 og 1 mg/ml CTE i 24 timer ved 37 grader og 5 prosent CO2. Fluorescensintensiteten ble målt med en eksitasjonsbølgelengde på 510 nm og emisjonsdeteksjon ved 580 nm for MitoSOX og en eksitasjonsbølgelengde på 350 nm og emisjonsdeteksjon ved 461 nm for Hoechst 33342 ved bruk av en mikroplate-leser 20Inn fluorescence 20. AG, Sveits)

Statistisk analyse

Beskrivende statistikk ble vist som gjennomsnittet pluss /− SD. Betydningen av forskjeller mellom grupper ble vurdert ved hjelp av Student t-test og Chi-square test. Når mer enn to grupper ble sammenlignet, brukte vi ensidig ANOVA med passende post hoc-testing. SPSS 11.01 for Mircosoft Windows ble brukt. Forskjeller med P mindre enn 0,05 ble ansett som statistisk signifikante.

RESULTATER

Effekten av CTE på spredning av humane tykktarmskreftcellelinjer er vist i figur 1. Alle CTE-konsentrasjoner som ble testet viste en sterk hemmende effekt på CaCo2-cellelinjen på en konsentrasjons- og tidsavhengig måte (figur 1A). Syttito timers CTE-behandling hemmet veksten av CaCo2-celler med mer enn 60 prosent sammenlignet med kontrollen (p < 0.05 for alle konsentrasjoner). Den betydelige innvirkningen av CTE-behandling på HCT116-cellevekst ble også oppdaget ved alle tider ved de to høyeste konsentrasjonene (1 mg/ml og 2 mg/ml), og nådde mer enn 70 prosent reduksjon ved en sistnevnte konsentrasjon (Figur 1B, s. < 0,05).

Selv om de to lavere CTE-konsentrasjonene ({{0}}.25 og 0.5 mg/ml) signifikant reduserte HCT116-veksten av celler etter 24 timer (p<0.05), 72="" they="" had="" no="" significant="" effect="" following="" hours="" of="" treatment="" compared="" to="" the="" control="" p="">{{0}}.{{10}}5). Tids- og konsentrasjonsavhengig hemming av proliferasjon med CTE ble ytterligere bekreftet i LoVo-celler med mer enn 60 prosent ved høyeste konsentrasjon (p < 0.05) (Figur 1C) , og alle de fire CTE-konsentrasjonene som ble testet reduserte veksten av SW620-celler etter 48 timer (Figur 1D, p < 0.05 for alle). Etter 72 timers behandling ble den samme effekten observert kun for de to høyeste konsentrasjonene (p < 0,05) mens 0,25 og 0,5 mg/ml konsentrasjoner ikke viste noen signifikant effekt sammenlignet med kontrollen (p > 0,05). Virkningen av 0,5 og 1 mg/ml CTE-behandling på induksjon av apoptose ble ytterligere testet i alle fire cellelinjene (figur 2). Et økt antall celler i tidlig apoptose ble oppdaget i HCT116 og LoVo etter 24 timers behandling med 0,5 mg/ml (p<0.05, Figure 2B and 2C) and in all cell lines at 1 mg/mL (p<0.05). A significant increase in necrotic or late apoptotic cell number was further observed in CaCo2 and SW620 cell lines (p<0.05, Figure 2A and 2D).

CTEs evne til å indusere intracellulær ROS-produksjon er vist i figur 3. Tre timer etter CTE-behandling var det en sterk økning i intracellulær ROS-produksjon i alle cellelinjer (p<0.05). The intracellular ROS production increased progressively throughout the 25 hours of treatment in a time and concentration-dependent manner. Furthermore, the staining of cells with a mitochondria-targeted probe revealed a strong impact of CTE on mitochondrial superoxide production in a concentration-dependent manner (Figure 4). The highest increase in superoxide production by mitochondria was observed in HCT116 (69%, Figure 4B) and LoVo cells (82%, Figure 4C) following 24 hours of treatment with 1 mg/mL of CTE.

Figur 1:

Effekt av Cistanche tubulosa på levedyktigheten til tykktarmskreftcellelinjer. Cellelevedyktighet målt ved MTT-analyse av (A) CaCo2-, (B) HCT116-, (C) LoVo- og (D) SW620-celler presenteres som en prosentandel av den ubehandlede tykktarmskreftcellelinjen. Gjennomsnittsverdier (±SD) for 5 replikater av det representative eksperimentet er gitt: (*) signifikans p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

Fig. 2:

Cistanche tubulosa vannekstrakt induserer apoptose i humane tykktarmskreftceller. Annexin-V-FITC flowcytometrianalyser av (A) CaCo2-, (B) HCT116-, (C) LoVo- og (D) SW620-celler presenteres som en prosentandel av den ubehandlede tykktarmskreftcellelinjen. Gjennomsnittsverdier (±SD) for 3 replikater av det representative eksperimentet er gitt: (*) signifikans p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

Fig. 3:

Cistanche tubulosa vannekstrakt induserer intracellulær ROS-produksjon i en tids- og doseavhengig. ROS-produksjon målt ved DCFH-DA-analyse i (A) CaCo2-, (B) HCT116-, (C) LoVo- og (D) SW620-celler presenteres som gjennomsnittlige RFU-verdier (±SD) for de respektive 5-replikater av et representativt eksperiment. (*) Betydning s<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

Fig. 4:

Cistanche tubulosa vannekstrakt induserer mitokondriell superoksidproduksjon i humane tykktarmskreftceller. Fluorescensintensiteten til mitokondriemålrettet MitoSOX Red-probe i A) CaCo2-, (B) HCT116-, (C) LoVo- og (D) SW620-celler presenteres som en prosentandel av ubehandlet kontrollcellelinje for tykktarmskreft. Gjennomsnittsverdier (±SD) for 5 replikater av det representative eksperimentet er gitt: (*) signifikans p<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

DISKUSJON

Selv om tidligere studier har rapportert en rekke medisinske egenskaper til Cistanche tubulosa, er dette den første rapporten om dens anti-proliferative effekt i ondartede celler. Cistanche tubulosa bioaktive forbindelser ekstrahert med vann, et svært polart løsningsmiddel, viste sterk antikreft bioaktivitet. Vi har tidligere sammenlignet effektiviteten til Cistanche tubulosa solubilisert i vannet med andre løsningsmidler som metanol og etylacetat, men vannekstrakter viste de mest lovende antikreftaktivitetene (data ikke vist).

Vi har demonstrert evnen til CTE ved 1 mg/ml og 2 mg/ml til å hemme 60 prosent av veksten av både primære og metastatiske tykktarmskreftcellelinjer, og avslører en potensielt viktig rolle for Cistanche tubulosa som behandling for tykktarmskreft. Sammenlignet med normale celler er kreftceller generelt preget av en forstyrrelse i redokshomeostase, og en vanlig strategi for nåværende antikreftterapier er å øke cellulært oksidativt stress (Yang et al, 2013). Selv om fysiologisk lave nivåer av ROS har en viktig rolle som signalmolekyler, kan overdreven ROS-produksjon bidra til kreftustabilitet og malignitet (Liou og Storz, 2010). Paradoksalt nok gjør denne ubalansen i cellulær redokshomeostase kreftceller mer sårbare for ROS-indusert celledød (Jaganjac et al., 2008; Nogueira og Hay, 2013). Den antiproliferative effekten av CTE rapportert i denne studien kan formidles av ulike ekstra- og intracellulære mekanismer av kjente og ukjente forbindelser i ekstraktet, rettet mot flere veier som spiller viktige roller i apoptose. For å skille mellom ulike moduser for celledød, undersøkte vi den potensielle mekanismen som er ansvarlig for den observerte CTE-induserte cytotoksisiteten

Våre data indikerer at CTE øker intracellulær ROS-produksjon og følgelig ROS-indusert celledød. Redox-tilstanden til cellen spiller også en avgjørende rolle i å regulere apoptose, og den mitokondrielle elektrontransportkjeden er et av hovedstedene for cellulær ROS-generering (Trachootham et al., 2008). Videre kan den intracellulære ROS forårsake cellulær apoptose via både mitokondrieavhengige og uavhengige veier (Sinha et al., 2013). Faktisk indikerer dataene våre også at CTE-indusert fosfatidylserin-eksternisering er en vanlig effekt i apoptose, i både primære og metastatiske kreftcellelinjer, noe som antyder at mekanismen for CTE-indusert død er mediert av apoptose i stedet for nekrose. Aktivering av apoptose i kreftceller er en korrigerende strategi og mange kreftmedisiner kan ha apoptotiske effekter i kreftceller.

Forbindelser eller ekstrakter med pro-apoptotiske aktiviteter i kreftceller er derfor potensielt nyttige i kreftmedisinforskning (Wong, 2011). For å bestemme om den CTE-induserte pro-apoptotiske effekten er mediert av mitokondrie-indusert ROS-mekanisme, målte vi superoksidproduksjon ved å bruke en mitokondrie-målrettet fluorescerende sonde i CTE-behandlede celler. Dataene våre viser tydelig at CTE stimulerer mitokondriell superoksidproduksjon, noe som tyder på at Cistanche tubulosa antikreftaktivitet i det minste delvis er mediert gjennom mitokondrieindusert ROS-mekanisme.

KONKLUSJONER

Avslutningsvis tyder våre data på at vannekstraktet fra ørkenplanten Cistanche tubulosa kan representere en lovende kandidat for en tilnærming mot kreft i kombinasjon med andre konvensjonelle terapier for forebygging og behandling av tykktarmskreft. Vi demonstrerer også at toksisiteten til planteekstraktet mot kreftceller medieres av økt intracellulær ROS-produksjon og, i det minste delvis, av mitokondrieavhengig apoptose. Ytterligere studier pågår for å isolere og karakterisere de individuelle biologisk aktive bestanddelene som er ansvarlige for antikreftaktivitet.

Mer forskning er nødvendig for å evaluere den potensielle bruken av dette ekstraktet som et effektivt kjemopreventivt middel og for å forstå virkningsmekanismene på tykktarmskreftceller på molekylært nivå. Ytterligere prekliniske og kliniske studier er også nødvendig for å bekrefte de observerte gunstige helseeffektene av Cistanche tubulosa for kreftforebygging.

TAKK

Økonomisk støtte og sponsing: Denne studien ble støttet av Antidopinglab Qatar.

Interessekonflikt: Forfatterne erklærer ingen interessekonflikt.

REFERANSER

Balunas MJ, Kinghorn, AD. Legemiddelfunn fra medisinske planter. Life Sci. 2005;78:431-41.

Brenner H, Kloor M, Pox CP. Tykktarmskreft. Lancet 2014;383,1490-502.

Cindric M, Cipak A, Zapletal E, Jaganjac M, Milkovic L, Waeg G, Stolc S, Zarkovic N, Suzana Borovic S. Stobadine demper svekkelse av en tarmbarrieremodell forårsaket av 4-hydroksynonenal. Toksikol in vitro. 2013;27:426-32.

Cragg GM, Newman DJ. Planter som kilde til kreftmidler.JEthnopharmacol. 2005;100:72-9.

da Rocha AB, Lopes RM, Schwartsmann G. Naturlige produkter innen kreftbehandling. CurrOpinPharmacol. 2001;1:364-9. Jaganjac M, Matijevic T, Cindric M, Cipak A, Mrakovcic L, Gubisch W, Zarkovic N. Induksjon av CMV-1-promoter ved 4-hydroksy-2- nominell i humane embryonale nyreceller. Acta Biochim Pol. 2010;57:179-83.

Jaganjac M, Poljak-Blazi M, Zarkovic K, Schaur RJ, Zarkovic N. Involveringen av granulocytter i spontan regresjon av Walker 256 karsinom. Kreft Lett. 2008;260:180-6

Jiang Y, Tu PF. Analyse av kjemiske bestanddeler i Cistanche-arter. J Chromatogr A. 2009;1216:1970-9.

Liou GY, Storz P. Reaktive oksygenarter i kreft. Free Radic Res. 2010;44:479-96.

Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Acylerte fenyletanoide aminoglykosider med hepatobeskyttende aktivitet fra ørkenplanten Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem. 2010;18:1882-90.

Nogueira V, Hay N. Molecular pathways: reaktive oksygenarter homeostase i kreftceller og implikasjoner for kreftbehandling. Clin Cancer Res. 2013;19:4309-14.

Poljak-Blazi M, Jaganjac M, Sabol I, Mihaljevic B, Matovina M, Grce M. Effekt av ferri-ioner på dannelse av reaktive oksygenarter, vekst av cellelinjer for livmorhalskreft og E6/E7-onkogenekspresjon. Toxicol Vitro. 2011;25:160-6.

Saibu GM, Katerere DR, Rees DJG, Meyer M. In vitro cytotoksiske og pro-apoptotiske effekter av vannekstrakter av Tulbaghia violacea blader og løker. J Etnopharmacol. 2015;164:203-9.

Sinha K, Das J, Pal PB, Sil PC. Oksidativt stress: de mitokondrieavhengige og mitokondrieuavhengige banene for apoptose. Arch Toxicol.2013; 87:1157-80. Trachootham D, Lu W, Ogasawara MA, Nilsa RD, Huang P. Redox-regulering av celleoverlevelse. Antioksid redokssignal. 2008;10:1343- 74.

Weidner C, Rousseau M, Plauth A, Wowro SJ, Fischer C, Abdel-Aziz H, Sauer S. Melissa officinalis-ekstrakt induserer apoptose og hemmer spredning i tykktarmskreftceller gjennom dannelsen av reaktive oksygenarter. Fytomedisin. 2015;22:262-70.

Wong RS. Apoptose ved kreft: fra patogenese til behandling. J ExpClin Cancer Res. 2011;30:87.

Wu SH, Chou FP, Chyau CC, Chen JH, Tu SF, Lin HH. Anti-krefteffekter av Wasabia japonica-ekstrakt i Hep3B-leverkreftceller via ROS-akkumulering, DNA-skade og p73-mediert apoptose. J Funct Foods. 2015;14:445-55.

Xiong WT, Gu L, Wang C, Sun HX, Liu X. Antihyperglykemiske og hypolipidemiske effekter av Cistanche tubulosa i type 2 diabetiske db/db mus. J Etnopharmacol. 2013;150:935-45.

Xu R, Sun S, Zhu W, Xu C, Liu Y, Shen L, Shi Y, Chen J. Flertrinns infrarøde makrofingeravtrykkfunksjoner av etanolekstrakter fra forskjellige Cistanche-arter i Kina kombinert med HPLC-fingeravtrykk. J Mol Struct. 2014;1069:236-244.

Yang Y, Karakhanova S, Werner J, Bazhin AV. Reaktive oksygenarter i kreftbiologi og antikreftterapi. Curr Med Chem. 2013;20:3677-92.

Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S, Muraoka O. Phenylethanoid aminoglykosider og acylerte oligo-sukker med vasorelakserende aktivitet fra Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem. 2006;14:7468-75.

For more information:1950477648nn@gmail.com