Herba Cistanche-ekstrakt forbedrer mitokondriell ATP-generering i rottehjerter og H9c2-celler
Mar 04, 2022
Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com
Hoi Yan Leung og Kam Ming Ko
For å sitere denne artikkelen: Hoi Yan Leung & Kam Ming Ko (2008) Herba Cistanche Extract Enhances Mitochondrial ATP Generation in Rat Hearts and H9c2 Cells, Pharmaceutical Biology, 46:6, 418-424, DOI: 10.1080/1388025080
Abstrakt
For å undersøke det farmakologiske grunnlaget for den "Yang-forfriskende" virkningen av Herbal Cistanche [den tørkede hele planten til Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae)], i kinesisk medisin, var effekten av metanolekstraktet av Herba Cistanche på mitokondriell ATP-genereringskapasitet. undersøkt ved bruk av en ex vivo rottehjertemodell og en in situ H9c2-celleanalyse. Behandling med Herba Cistanche-ekstrakt økte den myokardiale mitokondrielle ATP-genereringskapasiteten på en doseavhengig måte hos rotter, vurdert ved in vitro-måling. Stimuleringen av ATP-genereringskapasitet var assosiert med en parallell forbedring i mitokondriell elektrontransport støttet av pyruvat, men ikke succinat. Herba Cistanche-behandling økte også myokardiets mitokondriekompleks I- og kompleks III-aktivitet, og graden av stimulering på kompleks I-aktivitet var større. Herba Cistanche-behandling ga en dose- og tidsavhengig økning i mitokondriell ATP-genereringskapasitet i H9c2-celler. Resultatene indikerer at Herba Cistanche-behandling kan øke mitokondriell ATP-generering i rottehjerter ex vivo og H9c2-celler in situ, muligens gjennom å øke oksidativ fosforylering.
Nøkkelord:ATP, Cistanche deserticola, H9c2-celler, hjerte, mitokondrier.
Introduksjon
"Yang invigoration," som legemliggjør den generaliserte forbedringen av kroppsfunksjonen i kinesisk medisin, innebærer bruk av energi til å drive ulike biokjemiske prosesser. I denne forbindelse genereres ATP, som er den universelle valutaen for energi for å stimulere cellulær funksjon, hovedsakelig gjennom oksidativ fosforylering i mitokondrier. Vi har postulert at "Yang forfriskende" urter har evnen til å øke mitokondriell ATP generasjonskapasitet (Ko et al., 2004). Dette støttes av vårt nylige funn om at "Yang-forfriskende" men ikke "Yin-nærende" kinesiske tonifiserende urter kan øke den myokardiale ATP-genereringskapasiteten i musehjerter ex vivo (Ko et al., 2006). Herba Cistanche, den tørkede hele parasittiske planten (unntatt blomsten) av Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae), er klassifisert som en "Yang-forfriskende" tonifiserende urt i tradisjonell kinesisk medisin (Chen, 1998), og den fremstår som den mest populære ingrediens i en rekke kinesiske patentformuleringer som brukes til Yang-invigoration. I Kina og Japan er Herba Cistanche mye brukt til behandling av en rekke Yang-mangelsymptomer. Farmakologiske studier indikerte at Herba Cistanche kunne rense frie radikaler (Xiong et al., 1996), produsere beroligende (Lu, 1998), antialdring (Lee et al., 1990), antinociceptive og anti-inflammatoriske effekter (Lin et al., 2002) ), og forbedre immunfunksjonen (Wu et al., 2005). Den viktigste aktive ingrediensen i Herba Cistanche er fenyletanoidglykosider (Ouyang et al., 2003), som har blitt funnet å ha antibakterielle, antistress- og antioksidative egenskaper (Xiong et al., 1998), samt anti-apoptotiske effekter på dyrkede nevroner (Tian & Pu, 2005). I den nåværende studien, for å undersøke det farmakologiske grunnlaget for den Yang-forfriskende virkningen av Herba Cistanche, ble effekten av Herba Cistanche-behandling på ATP-generasjonskapasiteten i mitokondrier isolert fra rottehjerter ex vivo og dyrkede H9c2-kardiomyocytter in situ undersøkt. For å utforske den biokjemiske mekanismen som ligger til grunn for den ATP-generasjonsforbedrende handlingen, ble effekten av Herba Cistanche-behandling på mitokondriell elektrontransport og komplekse I-IV-aktiviteter også undersøkt i rottehjerter.
Cistanche deserticola ekstrakt
Materialer og metoder
Kjemikalier, cellekultur og urtematerialer ATP, ADP og 3-[4,5-dimetyltiozol-2-yl]-2,5-difenyltetrazoliumbromid ( MTT) ble kjøpt fra Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Luciferaseløsning (ATPlite) ble oppnådd fra PerkinElmer (Boston, MA, USA). Dulbeccos modifiserte Eagles medium (DMEM) og føtalt bovint serum (FBS) ble kjøpt fra GIBCO BRL Life Technologies (Grand Island, NY, USA). H9c2-cellelinje ble kjøpt fra ATTC (Rockville, MD, USA). Herba Cistanche ble levert av en lokal urteforhandler (Lee Hoong Kee). Urten ble autentisert av leverandøren, og et kupongprøve (HKUSTY00301) ble deponert i Institutt for biokjemi, Hong Kong University of Science & Technology (HKUST).
Urteutvinning
Herba Cistanche (100 g) ble kuttet i små biter og deretter ekstrahert ved oppvarming under tilbakeløp i 300 ml metanol
ved 65◦C i 2 timer. Prosedyren ble gjentatt to ganger. Det sammenslåtte ekstraktet ble tørket ved å fordampe løsningsmidlet under redusert trykk, og metanolekstraktet av Herba Cistanche ble oppnådd i et utbytte på 39 % (vekt/vekt). Kjemisk analyse indikerte at metanolekstraktet av Herba Cistanche inneholdt totalt saponiner, totalt antall flavonoider, totalt lignaner og polysakkarider i konsentrasjoner på 1,62 prosent (vekt/vekt), 0.08 prosent, 0,15 henholdsvis 75,6 prosent.
Dyrepleie
Voksne Sprague-Dawley hannrotter (8–10 uker; 250–300 g) ble holdt under en 12- timers mørk/lys syklus i et luft/fuktighetskontrollert rom ved omtrent 22◦C og tillot mat og vann ad libitum i Dyreomsorgen
på HKUST. Eksperimentelle protokoller ble godkjent av Forskningspraksisutvalget ved HKUST.
Medikamentell behandling
Dyrene ble tilfeldig delt inn i grupper, med fem til seks dyr i hver. I behandlingsgruppene ble rotter administrert intragastrisk med metanolekstraktet av Herba Cistanche (oppløst/suspendert i vann) i økende daglige doser ({{0}},031–0,5 g/kg) i 3 dager. Kontrolldyr fikk kun vann. 24 timer etter siste dosering ble hjertet hentet fra fenobarbital-bedøvede dyr og utsatt for biokjemisk analyse.
Klargjøring av mitokondriefraksjoner og måling av ATP-generasjonskapasitet (ATP-GC) ex vivo
Hjerte venstre ventrikkelvevsprøver ble skåret ut og skylt med iskald isotonisk buffer (0,32 M sukrose, 1 mM EDTA, 50 mM Tris/HCl, pH 7,4). Hjerte-mitokondriefraksjoner ble fremstilt ved differensiell sentrifugering i isotonisk buffer ved 4◦C. Et 10 prosent (w/v) hjertehomogenat ble fremstilt ved å homogenisere det hakkede ventrikkelvevet med en teflon-glasshomogenisator ved 4000 rpm for 20–30 komplette slag. Homogenatet ble sentrifugert ved 600 g i 10 minutter for å fjerne kjerner og celleavfall. Supernatanten ble deretter sentrifugert ved 8000 g i 30 minutter for å sedimentere mitokondriene (Evan, 1992). Pelletene ble resuspendert i 1 ml av den isotoniske bufferen og rekonstituerte mitokondriefraksjonene. Mitokondriell ATP-GC til ubehandlede dyr ble målt ved metoden til Leung et al. (2005).
Måling av mitokondriell elektrontransport
Målingen av elektrontransport i isolerte mitokondrier, som er basert på reduksjon av MTT, ble utført som beskrevet av Cohen et al. (1997). Mitokondrier ble fremstilt ved en proteinkonsentrasjon på 1 mg/ml med en inkubasjonsbuffer (250 mM sukrose, 50 mM HEPES, 10 mM KH2PO4, 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7,4) . En alikvot (40 µL) av mitokondriene ble blandet med 100 µL hver av 15 mM pyruvat eller 0,5 mM succinat og 0,42 mg/ml MTT. Reaksjonsblandingen ble inkubert ved 37◦C i 10 minutter med forsiktig risting. Etter inkubasjonen ble reaksjonsblandingen avsluttet ved tilsetning av 100 ul lyseringsbuffer (10 prosent, vekt/volum, natriumdodecylsulfat og 45 prosent dimetylformamid, justert til pH 4,7 med iseddik). Etter å ha stått i 5 minutter, ble absorbansavlesninger av reaksjonsblandingen tatt med en mikrotiterplateleser (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) og rapportert som forskjellen mellom 570 nm og 630 nm. Data ble uttrykt som en prosentandel av gjennomsnittsverdien for kontrollgruppen (dvs. Herba Cistanche-ubehandlet).
Cellekultur
H9c2-celler, en permanent cellelinje avledet fra hjertemyoblaster (Hescheler et al., 1991), ble dyrket som monolag i DMEM supplert med 10 prosent (v/v) FBS. Mediet inneholdt glukose (4,5 g/l) og glutamin (4,5 mM), supplert med NaHC03 (17 mM), penicillin (100 IE/ml) og streptomycin (100 µg/ml). Alle cellene ble dyrket under en atmosfære på 5 prosent (v/v) CO2 i luft ved 37◦C. Mediet ble erstattet med ferskt medium hver 2. eller 3. dag. En stamcelle ble dyrket i en 75 cm2 kulturkolbe og delt før konfluens ved et subkultiveringsforhold på 1:10. For ATP-GC-analyse ble H9c2-celler sådd med en tetthet på 2.5 104 celler/brønn i en 24-brønnplate. Etter cellefestingen ble Herba Cistanche-ekstrakt (oppløst i fosfatbufret saltvann; PBS) påført i mediet, og cellene ble inkubert i økende perioder (2–16 timer). Kontrollceller (ubehandlet) ble kun gitt PBS.
Måling av ATP-GC in situ
Etter de angitte periodene med inkubasjon med Herba Cistanche-ekstrakt ved økende konsentrasjoner (5{{10}}–300 µg/mL), ble ATP-GC-analysen utført. Mediet ble aspirert og cellene ble behandlet med digitonin (50 µg/ml) i en inkubasjonsbuffer (120 mM KCl, 5 mM KH2PO4, 2 mM EGTA, 10 mM HEPES, 0,1 mM MgCl2, 0,5 prosent BSA, pH 7,4) for 7,4 min ved 37◦C. Etter aspirering av digitonin, ble glutamat (5 mM), malat (5 mM) og ADP (60 µM) tilsatt til cellene for mitokondriell ATP-generering, som ble overvåket med økende tidsintervaller fra 0 til 15 minutter. Reaksjonen ble avsluttet ved tilsetning av 60 µL perklorsyre (30 prosent, vekt/volum), og reaksjonsblandingene ble deretter sentrifugert ved 600 g i 10 minutter ved 4◦C. En alikvot (120 µL) av supernatanten ble blandet med 90 µL 1,4 M KHC03 for nøytralisering. Blandingene ble sentrifugert igjen ved 600 g ved 4◦C, og supernatantene ble målt for ATP-innhold som beskrevet tidligere. ATP-GC for de ubehandlede cellene ble estimert ved å beregne arealet under kurven til grafen (AUC1) ved å plotte ATP generert (nmol/mg protein) mot tid (0–15 min) og uttrykt i vilkårlige enheter. For Herba Cistanche-behandlede celler ble AUC1-verdier med økende inkubasjonstider (3, 5, 7, 10 og 15 minutter) normalisert til en respektive gjennomsnittlig kontrollverdi fra ubehandlede prøver og uttrykt som prosentvis kontroll. Deretter ble arealet under kurven (AUC2) til grafen som plottet prosentkontrollverdier mot inkubasjonstid (3–15 min) beregnet og uttrykt i vilkårlige enheter. Data fra Herba Cistanche-behandlede grupper ble uttrykt som en prosentandel av kontrollen fra ligningen:
[AUC2(HerbaCistanche − behandlet)/AUC2(ubehandlet)]×100 prosent .
Målinger av kompleks I–IV og sitratsyntaseaktiviteter
Mitokondriell elektrontransportkjede (ETC) kompleks I–III aktiviteter ble målt ved spektrofotometriske metoder ved bruk av kompleksspesifikke substrater (NADH for kompleks I, succinat for kompleks II og decylubiquinol for kompleks III) som beskrevet (Grad & Lemire, 2004; Hsu et al. al., 2005; Mark et al., 2001). Kompleks IV-aktivitet ble målt ved å bruke et cytokrom c-oksidase-analysesett fra Sigma. Mitokondriell sitratsyntaseaktivitet ble målt ved metoden til Srere (1969).
Proteinanalyse
Proteinkonsentrasjoner av mitokondrielle fraksjoner og cellelysater ble bestemt ved bruk av et BioRad-proteinanalysesett ved bruk av bovint serumalbumin som standard ({{0}},038–0,600 mg/ml).
Statistisk analyse
Alle data ble uttrykt som gjennomsnittlig standardfeil for gjennomsnittet (SEM). De ble analysert ved enveis variansanalyse (ANOVA). Post hoc flere sammenligninger ble gjort med LSD. P-verdier<0.05 were="" regarded="" as="" statistically="">
Resultater
Effekter av Herba Cistanche-behandling på myokardial mitokondriell ATP-GC hos rotter
Som vist i figur 1, økte behandling med Herba Cistanche-ekstrakt i doser opp til 0,5 g/kg myokardial mitokondriell ATP-GC på en doseavhengig måte hos rotter, med graden av stimulering på 89 prosent. i en dose på 0,5 g/kg.
Effekter av Herba Cistanche-behandling på mitokondriell elektrontransport i rottehjerter
Omfanget av elektrontransport i isolerte mitokondrier ble målt ved å overvåke reduksjonen av MTT. Substratet som ble brukt for analysen var enten pyruvat eller succinat. Som vist i figur 2a, økte Herba Cistanche-behandling doseavhengig graden av mitokondriell elektrontransport støttet av pyruvat i rottehjerter, med den optimale stimuleringen observerbar ved doser på 0,5 g/kg. Imidlertid ble ingen signifikante endringer i omfanget av mitokondriell elektrontransport støttet av succinat påvist i Herba Cistanche-behandlede rottehjerter (fig. 2b).
Effekter av Herba Cistanche-behandling på mitokondrielle respiratoriske komplekse aktiviteter i rottehjerter
Som vist i figur 3, økte Herba Cistanche-behandling ved den optimale dosen på 0,5 g/kg signifikant kompleks I (34 prosent) og kompleks III (22 prosent) aktivitetene i rottehjerter. Aktiviteten til citratsyntase, et nøkkelenzym for trikarboksylsyresyklusen, ble ikke påvirket av Herba Cistanche-behandling (fig. 3). Western blot-analyse indikerte at proteinnivåer av kompleks I og III ikke ble påvirket av Herba Cistanche-behandling (data ikke vist).
Tidsforløp for Herba Cistanche-induserte endringer i mitokondriell ATP-GC i H9c2-celler
Endringer i ATP-GC ble undersøkt i Herba Cistanche-behandlede celler (50 og 150 µg/mL) etter 2 til 16 timers inkubering. Som vist i figur 4, økte behandling med Herba Cistanche ATP-GC på en tidsavhengig og bifasisk måte i H9c2-celler, med maksimal stimulering (henholdsvis 44 prosent og 89 prosent) observerbar etter 8 timers inkubasjon for begge medikamentkonsentrasjonene. ATP-GC returnerte deretter til ubehandlede kontrollverdier når inkubasjonstiden ble forlenget til 16 timer. Tidligere start av stimulering skjedde når cellene ble behandlet med en høyere konsentrasjon (150 µg/mL) av Herba Cistanche-ekstrakt.
Konsentrasjonsavhengighet av Herba
Cistanche-indusert økning i ATP-GC i H9c2-celler
H9c2-celler ble behandlet med økende konsentrasjoner (50-300 µg/mL) av Herba Cistanche-ekstrakt i 4 timer. Figur 5 viser at Herba Cistanche-behandling økte ATP-GC på en konsentrasjonsavhengig måte, med maksimal stimulering (82 prosent) observerbar ved konsentrasjonen på 300 µg/ml.
Cistanche-ekstrakt økning i ATP-produksjon
Diskusjon
Oppreguleringen av cellulære aktiviteter for å forbedre kroppsfunksjonen, slik som muskelsammentrekning og immunresponser av Yang-forsterkning, nødvendiggjør økningen i forbruket av ATP, som igjen støttes av mitokondriell oksidativ fosforylering. I den nåværende studien ble behandling med Herba Cistanche funnet å doseavhengig øke den mitokondrielle ATP-generasjonskapasiteten ex vivo i rottehjerter. Denne observasjonen er i samsvar med vårt tidligere funn om at blant de Yang-forfriskende kinesiske tonifiserende urtene, ga Herba Cistanche-behandling en relativt større grad av stimulering på mitokondriell ATP-generering i musehjerter (Ko et al., 2006). Forbedringen av mitokondriell ATP-generering ble parallelt med økningen i mitokondriell elektrontransport drevet av pyruvat, men ikke succinat, som vurdert ved reduksjonen av MTT. Resultater oppnådd fra kinetisk måling av mitokondrielt kompleks I–IV indikerte at aktivitetene til både kompleks I og III ble økt i Herba Cistanche-behandlede hjerter, med graden av stimulering på kompleks I-aktivitet større enn kompleks III. Siden aktiviteten til sitratsyntase, et nøkkelenzym i trikarboksylsyresyklusen, ikke ble påvirket, kan forbedringen av mitokondriell ATP-genereringskapasitet ved Herba Cistanche-behandling hovedsakelig tilskrives stimulering av komplekse I- og/eller III-aktiviteter. De fleste av hjertets ATP-behov dekkes av mitokondrier, som nesten utelukkende er avhengig av kompleks I (NADH)-koblet oksidasjon av fettsyre og glukose (Stanley et al., 1997; Taegtmeyer, 1998). Kompleks I, som har lavere aktivitet enn andre respiratoriske komplekser, anses som en viktig faktor i reguleringen av oksidativ fosforylering. Dermed kan stimulering eller hemming av kompleks I-aktivitet ha stor innvirkning på hjerteenergien. Selv om Western blot-analyse ikke avslørte noen endringer i proteinnivået til disse to kompleksene (data ikke vist), kan den økte enzymaktiviteten skyldes endringene i proteintiolstatus og/eller lipidmiljø (Davey et al., 1998; Paradies et al., 2004).
Herba Cistanche ekstraktkunne produsere den ATP-generasjonsforbedrende effekten i dyrkede H9c2-celler in situ. Den relativt tidlige utbruddet av den stimulerende virkningen produsert av Herba Cistanche-behandling, spesielt ved høye doser, er i samsvar med observasjonen fra ex vivo-studiene som indikerte at syntesen av komplekse I- og III-proteiner er usannsynlig involvert i ATP-genereringen som øker handling. Demonstrasjonen av Herba Cistanche-indusert forbedring i ATP-generering in situ-tilstand støtter oppfatningen om at økningen i mitokondriell ATP-generasjonskapasitet, som vurdert ved ex vivo-måling, bare kan reflektere en parallell effekt produsert av medikamentbehandlingen in vivo-tilstand. Målingen av ATP-generering i isolerte mitokondrier og dyrkede celler ved bruk av malat og glutamat som substrater er et indirekte mål på tilstand 3 mitokondriell respirasjon (Chen et al., 2003). Ved å bruke den samme bioluminescerende ATP-analysen, var hastigheten på mitokondriell ATP-generering i forskjellige vev hos ubehandlede rotter, som rapportert tidligere i laboratoriet vårt (Leung et al., 2005), i god overensstemmelse med de nylig publiserte dataene (Drew & Leeuwenburgh, 2003) ). ATP-genereringskapasiteten ble estimert ved en to-trinns integrasjon av tidsavhengige endringer i ATP-nivå i både ex vivo og in situ analyser. Den observerte medikamentinduserte stimulerende effekten ble derfor forstørret for sammenligningens skyld. Forbedringen av ATP-genereringskapasitet ved Herba Cistanche-behandling i rottehjertemitokondrier ex vivo ble parallelt med stimulering av ATP-generering i H9c2-celler in situ. Gitt tilstedeværelsen av ATP-generasjonsfremmende aktivitet i Yang-forfriskende kinesiske tonifiserende urter, inkludert Herba Cistanche, i musehjerter ex vivo (Ko et al., 2006), tyder resultatene på at målingen av ATP-generasjonskapasitet i H9c2-celler i situ kan brukes som en farmakologisk test for Yang-forfriskende kinesiske tonifiserende urter eller urteformel.
Avslutningsvis kan behandling med Herba Cistanche-ekstrakt forbedre den mitokondrielle ATP-genereringskapasiteten i rottehjerter ex vivo og i H9c2-celler in situ. Funnene støtter vår postulasjon om at det farmakologiske grunnlaget for Yang-invigorasjon innebærer forbedring av kroppsfunksjoner gjennom å stimulere mitokondriell ATP-produksjon.
Herba Cistanche-ekstrakt forbedrer den mitokondrielle ATP-genereringskapasiteten
Referanser
Chen P (1998): Tonic Herbs. Avansert TCM-serien. Beijing, Kina, Science Press, s. 233–320.
Chen Q, Vazquez EJ, Moghaddas S, Hoppel CL, Lesnefsky EJ (2003): Produksjon av reaktive oksygenarter av mitokondrier: sentral rolle for kompleks III. J Biol Chem 278: 36027-36031.
Cohen G, Farooqui R, Kesler N (1997): Parkinsons sykdom: En ny kobling mellom monoaminoksidase og mitokondriell elektronstrøm. Proc Natl Acad Sci USA 94: 4890–4894.
Davey GP, Peuchen S, Clark JB (1998): Energiterskler i hjernemitokondrier. Potensiell involvering i nevrodegenerasjon. J Biol Chem. 273: 12753-12757.
Drew B, Leeuwenburgh C (2003): Metode for måling av ATP-produksjon i isolerte mitokondrier: ATP-produksjon i hjerne- og levermitokondrier hos Fischer-344-rotter med alders- og kalorirestriksjon. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 285: R1259–R1267.
Evan WH (1992): Isolering og karakterisering av membraner og celleorganeller. I: Rickwood D, red. Preparativ sentrifugering: en praktisk tilnærming. New York, Oxford University Press, s. 223–270.
Grad LI, Lemire BD (2004): Mitokondrielle kompleks I-mutasjoner i Caenorhabditis elegans produserer cytokrom c-oksidase-mangel, oksidativt stress og vitamin-responsiv laktacidose. Human Mol Genetics 13: 303–314.
Hescheler J, Meyer R, Plant S, Krautwurst D, Rosenthal W, Schultz G (1991): Morfologisk, biokjemisk og elektrofysiologisk karakterisering av en klonal celle (H9c2) linje fra rottehjerte. Circ Res 69: 1476–1486.
Hsu M, Srinivas B, Kumar J, Subramanian R, Andersen J (2005): Glutationutarming som resulterer i selektiv mitokondriell kompleks I-hemming i dopaminerge celler er via en NO-mediert vei som ikke involverer peroksynitritt: Implikasjoner for Parkinsons sykdom. J Neurochem 92: 1091-1103.
Ko KM, Leon TYY, Mak DHF, Chiu PY, Du Y, Poon MKT (2006): En karakteristisk farmakologisk virkning av "Yang-forfriskende" kinesiske tonifiserende urter: Forbedring av myokardial ATP-genereringskapasitet. Phytomedicine 13: 636–642.
Ko KM, Mak DH, Chiu PY, Poon MKT (2004): Farmakologisk grunnlag for 'Yang-invigoration' i kinesisk medisin. Trends Pharmacol Sci 25: 3–6.
Lee CJ, Chuan S, Lee SL (1990): Studie om antialdringseffekten til Cistanche deserticola Ma. Shanghai J Trad Chin Med 11: 22–23.
Lei L, Song ZH, Tu PF, Li YZ, Wu LJ, Chen FK (2001): Metabolsk regulering av fenyletanoidglykosider fra Herba-cistancher i hundenes gastrointestinale. Yao Xue Xue Bao 36: 432–435
Leung HY, Chiu PY, Poon MKT, Ko KM (2005): En Yang-forfriskende kinesisk urteformel forbedrer mitokondriell funksjonsevne og antioksidantkapasitet i forskjellige vev hos hann- og hunnrotter. Rejuven Res 8: 238–247.
Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR (2002): Antinociseptiv og antiinflammatorisk aktivitet forårsaket av Cistanche deserticola hos gnagere. J Ethnopharmacol 83: 177-182.
Lu MC (1998): Studier av den beroligende effekten av Cistanche deserticola. J Ethnopharmacol 59: 161-165.
Mark A, Birch M, Douglass MT (2001): Analyse av mitokondriell respiratorisk kompleksaktivitet i mitokondrier isolert fra menneskelige celler og vev. Meth Cell Biol 65: 97-117.
Ouyang J, Wang X, Zhao B, Yuan X, Wang Y (2003): Effekter av sjeldne jordartselementer på veksten av Cistanche deserticola-celler og produksjonen av fenyletanoidglykosider. J Biotech 102: 129-134.
Paradies G, Petrosillo G, Pistolese M, Di Venosa N, Federici A, Ruggiero FM (2004): Nedgang i mitokondriell kompleks I-aktivitet i iskemisk/reperfusert rottehjerte: Involvering av reaktive oksygenarter og kardiolipin. Circ Res 94: 53–59.
Srere PA (1969): Sitratsyntase. Sitronsyre syklus. Meth Enzymol 13: 3–11.
Stanley WC, Lopaschuk GD, Hall JL, McCormack JG (1997): Regulering av myokardial karbohydratmetabolisme under normale og iskemiske forhold. Potensial for farmakologiske intervensjoner. Cardiovasc Res 33: 243-257.
Taegtmeyer H (1998): Energisubstratmetabolisme som mål for farmakoterapi i iskemisk og reperfusert hjertemuskel. Hjerte Metab 1: 5–9.
Tian XF, Pu XP (2005): Fenyletanoidglykosider fra Cistanches salsa hemmer apoptose indusert av 1-metyl-4- fenylpyridiniumion i nevroner. J Ethnopharmacol 97: 59–63.
Wu XM, Gao XM, Tsim KW, Tu PF (2005): En arabinogalaktan isolert fra stilkene til Cistanche deserticola induserer spredning av dyrkede lymfocytter. Int J Biol Macromol 37: 278–282.
Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S (1998): Hepatobeskyttende aktivitet av fenyletanoider fra Cistanche deserticola. Planta Med 64: 120–125.
Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T (1996): Antioksidative effekter av fenyletanoider fra Cistanche deserticola. Biol Pharm Bull 19: 1580–1585.
