Promitotisk virkning av Oenothera Biennis på senescent menneskelige hudfibroblaster del 2
Jul 04, 2023
3. Diskusjon
I denne studien undersøkte vi effekten av et hydrofilt Oenothera biennis-celleekstrakt (ObHEx) på cellulær senescens, siden det viste hudantialdringsegenskaper når det ble testet i in vitro og ex vivo-modeller [18]. Vi brukte en lignende senescent modell av NHDF utsatt for SIPS for behandling med H2O2 [21,22].
Glykosid av cistanche kan også øke aktiviteten til SOD i hjerte- og levervev, og redusere innholdet av lipofuscin og MDA i hvert vev betydelig, effektivt rense ulike reaktive oksygenradikaler (OH-, H₂O₂, etc.) og beskytte mot DNA-skader forårsaket av OH-radikaler. Cistanche-fenyletanoidglykosider har en robust renseevne for frie radikaler, en høyere reduserende evne enn vitamin C, forbedrer aktiviteten til SOD i sædsuspensjon, reduserer innholdet av MDA og har en viss beskyttende effekt på sædmembranfunksjonen. Cistanche-polysakkarider kan øke aktiviteten til SOD og GSH-Px i erytrocytter og lungevev hos eksperimentelt senescent mus forårsaket av D-galaktose, samt redusere innholdet av MDA og kollagen i lunge og plasma, og øke innholdet av elastin, har en god rensende effekt på DPPH, forlenger hypoksitiden hos eldre mus, forbedrer aktiviteten til SOD i serum og forsinker den fysiologiske degenerasjonen av lunge hos eksperimentelt eldre mus. Med cellulær morfologisk degenerasjon har eksperimenter vist at Cistanche har den gode antioksidantevnen og har potensial til å være et medikament for å forebygge og behandle aldringssykdommer. Samtidig har echinacoside i Cistanche en betydelig evne til å rense DPPH frie radikaler og evnen til å rense reaktive oksygenarter og forhindre frie radikaler.
indusert kollagennedbrytning, og har også en god reparasjonseffekt på anionskader av tymin frie radikaler.
Klikk på Hvor kan jeg kjøpe Cistanche
【For mer informasjon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】
For å forstå virkningsmekanismen til ObHEx på senescent humane dermale fibroblaster, ved å avsløre de biologiske banene endret av ekstraktet, utførte vi en datauavhengig massespektrometri ultra-dyp proteomisk tilnærming. Det tillot oss å oppnå den mest komplette proteomanalysen av senescensceller til dags dato og, for første gang, samtidig kvantifisering av en rekke senescensmarkører.
Først av alt, for å vurdere senescensinduksjonen ved H2O2-behandling på NHFD-celler, kvantifiserte vi de kjente senescensmarkørene. Våre proteomikkdata bekreftet senescensinduksjon ved oksidativt stress: faktisk observerte vi endrede nivåer av allerede kjente senescensmarkører relatert til det økte lysosomale innholdet (GLB1 og FUCA1), DNA-skade (ATR, ATM, MACROH2A1 og MACRO2A2) og G2-fasecellesyklus arrestasjon (CDK1NA og MKI67). Videre peker anrikningsanalysen av de mest nedregulerte proteinene i H2O2-behandlede versus kontrollceller mot mitose, noe som gjenspeiler den senescent spredningsstansen.
Ved å sammenligne proteomet til SIPS NHDF-celler behandlet med ObHEx versus ubehandlede, fant vi at behandlingen med ekstraktet var i stand til delvis å gjenopprette nivåene av proteiner og komplekser som spiller avgjørende roller i flere stadier av mitose. ObHEx-inkubasjon økte nivåene av CDK1, et nøkkel mitotisk protein som utløser inntreden i mitose ved å danne et kompleks med cyclin B [34]. Dessuten ble alle fem underenhetene til kondensin I-komplekset oppregulert. Dette komplekset er sammensatt av to strukturelle vedlikehold av kromosomer (SMC) underenheter, SMC2 og SMC4, og tre ikke-SMC underenheter, NCAPD2, NCAPH og NCAPG. I prometafasen er funksjonen til kondensin I-komplekset å fremme typen kondensasjon av kromosomer ved innføring av positive supercoils i DNA på en ATP-avhengig måte [35]. I tillegg til dette oppregulerte ekstraktet KNTC1, NUF2 og TRIP13, som er tre proteiner assosiert med kinetochore, et stort kompleks som under prometafasen kobler sentromert kromatin til mikrotubuli fra motsatte spindelpoler for å favorisere segregeringen av søsterkromatider [ 36,37]. Delvis gjenoppretting av nivåene av MCM-proteiner er også påvist. Disse proteinene er kjernen i replikasjonshelikasekomplekset som avvikler dobbelttrådet DNA for å gi enkelttråder som maler for DNA-polymerase. MCM-komplekset omdannes til en aktiv helikase under S-fasen, men er allerede lastet på kromatin under telofasen [38,39]. Ekstraktet økte også nivåene av IQGAP3, PBK og DHFR. Den første, IQGAP3, er en viktig regulator av mitotisk progresjon fordi den fremmer cdk7-aktivitet, avgjørende for Cdc2-aktivering [40,41]; PBK er en kinase aktiv bare i mitose; når det er fosforylert, interagerer det med p53, destabiliserer det og svekker DNA-skadeveien [42]; og DHFR er et nøkkelenzym i DNA-biosyntese hvis nivåer er markert svekket i senescent humane fibroblaster [43].
Bio-ortogonale analyser viste også evnen til ObHEx til delvis å reversere senescens-kjennetegn, nemlig lysosomal aktivitet og cellesyklusstans. Faktisk, for å verifisere om gjenoppretting av mitotisk proteinuttrykk av ObHEx oversettes til reaktivering av cellesyklusen, utførte vi FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting) eksperimenter på SIPS NHDF-celler behandlet eller ikke med ekstraktet. De viste at ObHEx var i stand til å redusere andelen av celler som ble blokkert i G2-fasen og å fremme deres gjeninntreden i cellesyklusen til senescerende celler.
4. Materialer og metoder
4.1. Cellekultur
Normale humane hudfibroblaster (NHDF; Promocell) ble dyrket i Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; Gibco) supplert med 10 prosent føtalt bovint serum (FBS; Gibco) og 500 U/ml penicillin-streptomycin (Gibco) i 95 prosent luft , 5 prosent CO2 og en fuktet atmosfære ved 37 ◦C.
4.2. Induksjon av stress-indusert prematur senescens (SIPS)
Totalt 10 1200 000 NHDF-celler ble sådd inn i hver av 60 mm cellekulturskålene, én dag før inkubering med 100 µM H2O2 ved 37 ◦C i 2 timer [21,22]. Deretter ble H2O2 vasket med fosfatbufret saltvann (PBS; Gibco) for å avslutte behandlingen og cellene ble dyrket i et normalt medium i 4 dager. For de ikke-aldrende cellene, brukt som kontroll, ble 2240 000 NHDF-celler sådd inn i hver av 60 mm cellekulturskålene. Eksperimentet ble utført i 5 biologiske replikater.
4.3. Oenothera Biennis Hydrophilic Extract (ObHEx) Preparat
Ekstraktet ble fremstilt i laboratoriene til Arterra Bioscience SpA [18]. Cellekulturene ble oppnådd fra bladene til Oenothera biennis-planter (levert av GEEL Floricultura ss) ved å indusere spredning av meristematiske celler på faste agarplater inntil de oppnådde hard hud. Cellene ble overført til det flytende vekstmediet (Gamborg B5, supplert med 2,4 diklorfenoksyeddiksyre (1 mg/L), adenin (1 mg/L) og kinetin (0.01 mg/L) )) og dyrket som suspensjonskulturer under orbital risting. Så snart kulturer på ca. 150 g/l ble oppnådd, ble cellene samlet og lysert i PBS ved pH 7,4 for å fremstille et vannløselig ekstrakt. Etter lyofilisering ble det oppnådde pulveret oppløst i vann eller cellekulturmedier i passende konsentrasjoner for testing.
4.4. Oenothera Biennis Hydrophilic Extract (ObHEx) Behandling
NHDF-celler ble inkubert i 24 timer med 0.01 prosent (p/v) ObHEx i et komplett medium. Deretter ble cellene vasket tre ganger med PBS og behandlet i ytterligere 24 timer med 0,01 prosent (p/v) ObHEx i et serumfritt medium. De ble deretter løsnet ved trypsinisering, sentrifugert ved 500 g i 10 minutter ved 4 ◦C og vasket to ganger med PBS. Ubehandlede kontrollceller gjennomgikk de samme inkubasjonene uten ObHEx.
4.5. Prøveforberedelse for proteomisk analyse
Pellets ble resuspendert i 60µL Radioimmunoprecipitation assay (RIPA) buffer og lysert ved sonikering. Den cellulære lysatproteinkonsentrasjonen ble kvantifisert ved å bruke et DC™ Protein Assay Kit (Biorad; #5000112). S-TrapTM mikrospinnkolonne (Protifi, Huntington, CA, USA) fordøyelse ble utført på 50 µg cellelysater i henhold til produsentens instruksjoner. Kort fortalt ble prøvene redusert med 20 mM tris({5}} karboksyetyl)fosfin (TCEP) og alkylert med 50 mM tioacetamid (CAA) i 15 minutter ved romtemperatur. Vandig fosforsyre ble deretter tilsatt til en sluttkonsentrasjon på 2,5 prosent etterfulgt av tilsetning av en S-Trap bindingsbuffer (90 prosent vandig metanol, 100 mM TEAB, pH 7,1). Blandingene ble deretter lastet på S-Trap-kolonner. Fem ekstra vasketrinn ble utført for grundig SDS-eliminering. Deretter ble de cellulære lysatene fordøyd med 2,5 µg trypsin (Promega) ved 47 ◦C i 1 time. Etter eluering ble peptidene vakuumtørket, resuspendert i 2 prosent ACN, 0,1 prosent FA og kvantifisert med Nanodrop.
4.6. nanoLC-MS/MS Proteinidentifikasjon og kvantifisering
Totalt 400 ng av hver prøve ble injisert på et nanoplate (Bruker Daltonics, Bremen, Tyskland) høyytelses væskekromatografi (HPLC) system koblet til en timsTOF Pro (Bruker Daltonics, Bremen) , Tyskland) massespektrometer. HPLC-separasjon (løsningsmiddel A: {{30}},1 prosent maursyre i vann; løsningsmiddel B: 0,1 prosent maursyre i acetonitril) ble utført ved 250 l/min ved bruk av en pakket emitterkolonne (C18, 25 cm × 75 µm 1,6 µm) (Ion Optics, Fitzroy, Australia) ved bruk av gradienteluering (2 til 13 prosent løsemiddel B i løpet av 41 minutter; 13 til 20 prosent i løpet av 23 minutter; 20 prosent til 30 prosent i løpet av 5 minutter; 30 prosent til 85 prosent i 5 minutter, og til slutt 85 prosent i 5 minutter for å vaske kolonnen). Massespektrometriske data ble innhentet ved bruk av data-uavhengig analyse parallell akkumulering seriell fragmentering (diaPASEF) anskaffelsesmetoden. Bleieinnstillingene var: masseområde fra 400 til 1200 Da, mobilitetsområde fra 0,60 til 1.43 1/k0, antall mobilitetsvindu på 1, syklustidsestimat på 1,79 s, massetrinn per syklus på 32.
4.7. MS databehandling og bioinformatikkanalyse
Dataanalyse ble utført ved bruk av DIA-NN programvare (versjon 1.8) [44]. Et søk mot den menneskelige UniProtKB/Swiss-Prot Homo sapiens-databasen (utgivelse februar 2021, 20 408 oppføringer) ble utført ved hjelp av en bibliotekfri arbeidsflyt. For dette formålet ble alternativene "FASTA-sammendrag for bibliotekfri søk/bibliotekgenerering" og "Deep learning spectra, RTs og IMs prediction" sjekket for forløperiongenerering. Maksimalt 2 trypsin savnede spaltninger ble tillatt og maksimal variabel modifikasjon ble satt til 5. Karbamidometylering (Cys) ble satt som den faste modifikasjonen, mens protein N-terminal metionineksisjon, metioninoksidasjon og N-terminal acetylering ble satt som variabel modifikasjoner. Peptidlengdeområdet ble satt til 7–30 aminosyrer, forløperladningsområde 2–4, forløper m/z område 300–1800 og fragmention m/z område 200–1800. For å søke etter foreldremassen og fragmentionene ble nøyaktigheten utledet automatisk av DIA-NN og ble satt til rundt 13 ppm for hver analyse. De falske oppdagelsesratene (FDR) ved protein- og peptidnivåene ble satt til 1 prosent. Match mellom løpene var tillatt. For kvantifiseringsstrategien ble Robust LC (høy presisjon) brukt som anbefalt i programvaredokumentasjonen, mens standardinnstillinger ble beholdt for de andre algoritmeparametrene.
Statistisk og bioinformatisk analyse ble utført med Perseus-programvare (versjon 1.6.15) fritt tilgjengelig på nettstedet (åpnet 22. juni 2021) [45] og R/R Studio og RStudio versjon 20 21.09.1 30 (åpnet 12. november 2021). All R statistisk analyse ble utført ved å bruke R stats-pakken. Pg-rapportmatriseutgangen fra DIA-NN ble brukt og intensiteter ble log2 transformert for statistisk analyse. For den statistiske sammenligningen satte vi fire grupper, som hver inneholder 5 biologiske replikater. Vi filtrerte deretter dataene for å beholde bare proteiner med minst 3 gyldige verdier i minst én gruppe. Deretter ble dataene beregnet for å fylle manglende datapunkter ved å lage en gaussisk fordeling av tilfeldige tall med et standardavvik på 33 prosent i forhold til standardavviket til de målte verdiene og en 1,8 standardavvik nedgiring av gjennomsnittet for å simulere fordelingen av lave signalverdier. Elevens t-test ble utført mellom SEN og CTRL FDR < 0,05, S0=0.1 for å bekrefte tilstedeværelsen av markører som er spesifikke for senescens. Deretter, for å undersøke om forskjellen i effektstørrelsen mellom fravær eller tilstedeværelse av behandlingen er den samme for celler der alderdom ble indusert eller ikke, ble interaksjonen mellom begge faktorene (dvs. induksjon og behandling) undersøkt ved bruk av toveis ANOVA i R. Deretter ble p-verdier oppnådd for interaksjonen mellom begge faktorene justert for flere tester ved bruk av Benjamini–Hochberg [46]-metoden for å kontrollere False Discovery Rate (FDR). Til slutt ble Tukey HSD post hoc-analyse utført på proteiner som viste en q-verdi <0,05. Massespektrometri-proteomikkdataene er deponert til ProteomeXchange Consortium via PRIDE [47]-partnerlageret med datasettidentifikatoren PXD034222.
4.8. Senescens-assosiert ß-galaktosidasefarging
Senescensassosiert ß-galaktosidase (SA-ß-gal) aktivitet ble evaluert ved bruk av et cellesignalteknologi-fargesett (#9860). Totalt 1250 000 NHDF-celler/brønn ble sådd inn i en 6-brønnplate én dag før SIPS; mens, som en kontroll, 250 000 celler/brønn. Etter 4 dager i et normalt medium ble cellene inkubert eller ikke med 0.01 prosent (p/v) ObHEx i 48 timer. Deretter ble de vasket med PBS og behandlet med fikseringsløsningen i 15 min. Etter to vaskinger med PBS ble cellene inkubert med ß-gal-fargeløsningen (endelig pH på 6,0) som inneholdt 5-brom-4-klor-3-indolyl- -D-galakto -pyranosid (X-Gal) ved 37 ◦C i en tørr inkubator i 20 timer. Positive celler er blå. Fargen skyldes spaltningen av X-Gal i galaktose og 5-Brom-4-klor-3-indoksyl (X) av SA-ß-gal. Indoksylet oksideres til 5,50 -dibrom-4,40 -diklorindigo som danner et intenst blått bunnfall. Prosentandelen av positive celler i de totale cellene ble vurdert ved å telle 100–150 celler i 5 tilfeldig utvalgte bilder tatt med mikroskop, for hver tilstand. Celler ble talt ved bruk av ImageJ-programvare. Eksperimentet ble utført i tre eksemplarer.
4.9. Fluorescens-aktivert cellesortering
Totalt {{0}} NHDF-celler/brønn ble sådd inn i en 6-brønnplate én dag før SIPS; mens, som en kontroll, 50 000 celler/brønn. Etter 4 dager i et normalt medium ble kontroll- og senescentcellene behandlet eller ikke med 0,01 prosent (p/v) ObHEx i 72 timer. Deretter ble cellene inkubert i nærvær av 5 µg/ml Hoechst 33342 i 30 minutter ved 37 ◦C. Etter trypsinisering og sentrifugering ved 500 g i 2 minutter, ble de resuspendert i 200 µL PBS. Til slutt ble cellefluorescens målt med en BD LSRFortessa Cell Analyzer. Data ble analysert ved hjelp av FlowJo programvare v10.8.1. Eksperimentet ble utført i tre eksemplarer.
5. Konklusjoner
Den dype senescensassosierte globale proteomprofileringen oppnådd her gir hundrevis av proteiner deregulert av SIPS som kan utnyttes av det vitenskapelige samfunnet for ytterligere å forstå senescens og for å evaluere effekten av nye potensielle modulatorer. Dessuten beviser arbeidet vårt en pro-mitotisk virkningsmekanisme av ObHEx på aldrende humane dermale fibroblaster: via en økning i mitotisk proteinekspresjon fremmer det gjenopprettingen av spredningen av aldrende celler. Basert på disse resultatene foreslår vi derfor ObHEx som en kraftig adjuvans mot senescens forbundet med aldring av huden.
Forfatterbidrag:Konseptualisering, SC, MCM og ICG; metodikk, SC, KR, IM, CC (Cerina Chhuon) og ICG; programvare, KR; etterforskning, SC, IM, CC (Cerina Chhuon), KT, SF, ADL, IP og CC (Corinne Cordier); ressurser, MCM og ICG; skriving—original utkast forberedelse, SC og ICG; skriving – gjennomgang og redigering, SC, MCM og ICG Alle forfattere har lest og godtatt den publiserte versjonen av manuskriptet.
Datatilgjengelighetserklæring:Massespektrometri-proteomikkdataene er deponert til ProteomeXchange Consortium via PRIDE [47]-partnerlageret med datasettidentifikatoren PXD034222 (Reviewer-kontodetaljer: Brukernavn: reviewer_pxd034222@ebi.ac.uk; Passord: fK9Pjv90) .
Anerkjennelser: Denne studien ble støttet av Programma Operativo Complementare Ricerca e Innovazione 2014–2020, Asse I "Capitale Umano", Azione I.1 "Dottorati Innovativi con caratterizzazione Industriale". Vi takker de andre medlemmene av Proteomics-plattformen Necker Vincent Jung og Joanna Lipecka for deres uvurderlige vitenskapelige støtte og fruktbare forslag.
Referanser
1. Di Micco, R.; Krizhanovsky, V.; Baker, D.; d'Adda di Fagagna, F. Cellular Senescence in Ageing: From Mechanisms to Therapeutic Opportunities. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2021, 22, 75–95. [CrossRef] [PubMed]
2. González-Gualda, E.; Baker, AG; Fruk, L.; Muñoz-Espín, D. En guide til å vurdere cellulær alderdom in vitro og in vivo. FEBS J. 2021, 288, 56–80. [CrossRef] [PubMed]
3. Sikora, E.; Bielak- ˙Zmijewska, A.; Mosieniak, G. Hva er og hva er ikke cellealderdom. Postepy Biochem. 2018, 64, 110–118. [CrossRef] [PubMed]
4. Choi, E.-J.; Kil, IS; Cho, E.-G. Ekstracellulære vesikler avledet fra eldre fibroblaster demper den dermale effekten på keratinocyttdifferensiering. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1022. [CrossRef] [PubMed]
5. Krtolica, A.; Parrinello, S.; Lockett, S.; Desprez, PY; Campisi, J. Senescent fibroblaster fremmer epitelcellevekst og svulstdannelse: En kobling mellom kreft og aldring. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001, 98, 12072–12077. [CrossRef]
6. Wlaschek, M.; Maity, P.; Makrantonaki, E.; Scharffetter-Kochanek, K. Bindevev og fibroblast-aldring i hudaldring. J. Invest. Dermatol. 2021, 141, 985–992. [CrossRef]
7. Paez-Ribes, M.; González-Gualda, E.; Doherty, GJ; Muñoz-Espín, D. Målretting mot eldre celler i translasjonsmedisin. EMBO Mol. Med. 2019, 11, e10234. [CrossRef]
8. Soto-Gamez, A.; Demaria, M. Terapeutiske intervensjoner for aldring: Tilfellet av cellulær alderdom. Drug Discov. I dag 2017, 22, 786–795. [CrossRef]
9. Latorre, E.; Birar, VC; Sheerin, AN; Jeynes, JCC; Hooper, A.; Dawe, HR; Melzer, D.; Cox, LS; Faragher, RGA; Ostler, EL; et al. Småmolekylmodulering av spleisefaktoruttrykk er assosiert med redning fra cellulær alderdom. BMC Cell Biol. 2017, 18, 31. [CrossRef]
10. Munir, R.; Semmar, N.; Farman, M.; Ahmad, NS En oppdatert gjennomgang av farmakologiske aktiviteter og fytokjemiske bestanddeler av nattlyla (slekten Oenothera). Asiatisk Pac. J. Trop. Biomed. 2017, 7, 1046–1054. [CrossRef]
11. Timoszuk, M.; Bielawska, K.; Skrzydlewska, E. Primrose (Oenothera biennis) biologisk aktivitet avhengig av kjemisk sammensetning. Antioksidanter 2018, 7, 108. [CrossRef]
12. Lee, SY; Kim, CH; Hwang, BS; Choi, K.-M.; Yang, I.-J.; Kim, G.-Y.; Choi, YH; Park, C.; Jeong, J.-W. Beskyttende effekter av Oenothera Biennis mot hydrogenperoksid-indusert oksidativt stress og celledød i hudkeratinocytter. Life 2020, 10, 255. [CrossRef]
13. Granica, S.; Czerwi ´nska, ME; Piwowarski, JP; Ziaja, M.; Kiss, AK Kjemisk sammensetning, antioksidativ og anti-inflammatorisk aktivitet av ekstrakter tilberedt fra luftdeler av Oenothera Biennis L. og Oenothera Paradoxa Hudziok oppnådd etter frødyrking. J. Agric. Food Chem. 2013, 61, 801–810. [CrossRef]
14. Fecker, R.; Buda, V.; Alexa, E.; Avram, S.; Pavel, IZ; Muntean, D.; Cocan, I.; Watz, C.; Minda, D.; Dehelean, CA; et al. Fytokjemisk og biologisk screening av Oenothera Biennis L. Hydroalcoholic Extract. Biomolecules 2020, 10, 818. [CrossRef]
15. Schäfer, L.; Kragballe, K. Tilskudd med nattlysolje ved atopisk dermatitt: Effekt på fettsyrer i nøytrofiler og epidermis. Lipids 1991, 26, 557-560. [CrossRef]
16. Barbulova, A.; Apone, F.; Colucci, G. Plantecellekulturer som kilde til kosmetiske aktive ingredienser. Kosmetikk 2014, 1, 94–104. [CrossRef]
17. Cæsar, LK; Cech, NB Synergi og antagonisme i naturlige produktekstrakter: Når 1 pluss 1 ikke er lik 2. Nat. Prod. Rep. 2019, 36, 869–888. [CrossRef]
18. Ceccacci, S.; De Lucia, A.; Tito, A.; Tortora, A.; Falanga, D.; Arciello, S.; Ausanio, G.; Di Cicco, C.; Monti, MC; Apone, F. An Oenothera Biennis cellekulturekstrakt utstyrt med antialdringsaktivitet for huden forbedrer cellemekaniske egenskaper. Metabolitter 2021, 11, 527. [CrossRef]
19. Farwick, M.; Köhler, T.; Schild, J.; Mentel, M.; Maczkiewitz, U.; Pagani, V.; Bonfigli, A.; Rigano, L.; Bureik, D.; Gauglitz, GG Pentacykliske triterpener fra Terminalia Arjuna viser flere fordeler på aldret og tørr hud. Skin Pharmacol. Physiol. 2014, 27, 71–81. [CrossRef]
20. Bonte, F.; Dumas, M.; Chaudagne, C.; Meybeck, A. Influence of Asiatic Acid, Madecassic Acid og Asiaticoside på Human Collagen I Synthesis. Planta Med. 1994, 60, 133–135. [CrossRef]
21. Chowdhary, S. Effektene av oksidativt stress på å indusere senescens i humane fibroblaster. J. South Carol. Acad. Sci. 2018, 16, 2.
22. Wang, Z.; Wei, D.; Xiao, H. Metoder for cellulær alderdomsinduksjon ved bruk av oksidativt stress. Metoder Mol. Biol. 2013, 1048, 135–144. [PubMed]
23. Hildebrand, DG; Lehle, S.; Borst, A.; Haferkamp, S.; Essmann, F.; Schulze-Osthoff, K. - Fucosidase as a Novel Convenient Biomarker for Cellular Senescence. Cellesyklus 2013, 12, 1922–1927. [CrossRef] [PubMed]
24. Lee, BY; Han, JA; jeg, JS; Morrone, A.; Johung, K.; Goodwin, EM; Kleijer, WJ; DiMaio, D.; Hwang, ES Senescens-assosiert beta-galaktosidase er lysosomal beta-galaktosidase. Aldringscelle 2006, 5, 187–195. [CrossRef] [PubMed]
25. Gorgoulis, V.; Adams, PD; Alimonti, A.; Bennett, DC; Bischof, O.; Biskop, C.; Campisi, J.; Collado, M.; Evangelou, K.; Ferbeyre, G.; et al. Cellular Senescence: Definere en vei videre. Cell 2019, 179, 813–827. [CrossRef]
26. Matsuoka, S.; Ballif, BA; Smogorzewska, A.; McDonald, ER; Hurov, KE; Luo, J.; Bakalarski, CE; Zhao, Z.; Solimini, N.; Lerenthal, Y.; et al. ATM- og ATR-substratanalyse avslører omfattende proteinnettverk som reagerer på DNA-skade. Science 2007, 316, 1160–1166. [CrossRef]
27. Zhang, R.; Chen, W.; Adams, PD Molekylær disseksjon av dannelse av senescens-assosierte heterokromatinfoci. Mol. Cell Biol. 2007, 27, 2343–2358. [CrossRef]
28. LaBaer, J.; Garrett, MD; Stevenson, LF; Slingerland, JM; Sandhu, C.; Chou, HS; Fattaey, A.; Harlow, E. Nye funksjonelle aktiviteter for P21-familien av CDK-hemmere. Genes Dev. 1997, 11, 847–862. [CrossRef]
29. Scholzen, T.; Gerdes, J. The Ki-67 Protein: From the Known and the Unknown. J. Cell Physiol. 2000, 182, 311–322. [CrossRef]
30. Passos, JF; von Zglinicki, T. Metoder for cellesortering av unge og eldre celler. Metoder Mol. Biol. 2007, 371, 33–44.
31. Dai, Y.; Tang, H.; Pang, S. De avgjørende rollene til fosfolipider i aldring og regulering av levetid. Front. Physiol. 2021, 12, 1998. [CrossRef]
32. Dashty, M. Hedgehog Signaling Pathway er knyttet til aldersrelaterte sykdommer. J. Diabetes Metab. 2014, 5, 2. [CrossRef]
33. Wang, D.; Lu, P.; Liu, Y.; Chen, L.; Zhang, R.; Sui, W.; Dumitru, AG; Chen, X.; Wen, F.; Ouyang, H.-W.; et al. Isolering av levende premature senescentceller ved hjelp av FUCCI-teknologi. Sci. Rep. 2016, 6, 30705. [CrossRef]
34. Qian, J.; Beullens, M.; Huang, J.; De Munter, S.; Lesage, B.; Bollen, M. Cdk1 bestiller mitotiske hendelser gjennom koordinering av en kromosom-assosiert fosfatasebryter. Nat. Commun. 2015, 6, 10215. [CrossRef]
35. Kong, M.; Cutts, EE; Pan, D.; Beuron, F.; Kaliyappan, T.; Xue, C.; Morris, EP; Musacchio, A.; Vannini, A.; Greene, EC Human Condensin I og II driver omfattende ATP-avhengig komprimering av nukleosombundet DNA. Mol. Cell 2020, 79, 99–114.e9. [CrossRef]
36. Kops, GJPL; Gassmann, R. Crowning the Kinetochore: The Fibrous Corona in Chromosome Segregation. Trender Cell Biol. 2020, 30, 653–667. [CrossRef]
37. Ma, HT; Poon, RYC TRIP13 Fungerer i etableringen av spindelmonteringssjekkpunktet ved å fylle på O-MAD2. Cell Rep. 2018, 22, 1439–1450. [CrossRef]
38. Kuipers, MA; Stasevich, TJ; Sasaki, T.; Wilson, KA; Hazelwood, KL; McNally, JG; Davidson, MW; Gilbert, DM Svært stabil lasting av Mcm-proteiner på kromatin i levende celler krever replikering for å losse. J. Cell Biol. 2011, 192, 29–41. [CrossRef]
39. Meng, Q.; Gao, J.; Zhu, H.; Han, H.; Lu, Z.; Hong, M.; Zhou, H. Den proteomiske studien av serielt passerte humane hudfibroblastceller avdekker nedregulering av kromosomkondensinkomplekse proteiner involvert i replikativ alderdom. Biochem. Biofys. Res. Commun. 2018, 505, 1112–1120. [CrossRef]
40. Larochelle, S.; Pandur, J.; Fisher, RP; Salz, HK; Suter, B. Cdk7 er essensielt for mitose og for in vivo Cdk-aktiverende kinaseaktivitet. Genes Dev. 1998, 12, 370–381. [CrossRef]
41. Leone, M.; Cazorla-Vázquez, S.; Ferrazzi, F.; Wiederstein, JL; Gründl, M.; Weinstock, G.; Vergarajauregui, S.; Eckstein, M.; Krüger, M.; Gaubatz, S.; et al. IQGAP3, et YAP-mål, er nødvendig for riktig cellesyklusprogresjon og genomstabilitet. Mol. Kreft Res. 2021, 19, 1712–1726. [CrossRef] [PubMed]
42. Nandi, AK; Ford, T.; Fleksher, D.; Neuman, B.; Rapoport, AP Attenuation of DNA Damage Checkpoint av PBK, en ny mitotisk kinase, involverer protein-protein-interaksjon med tumorsuppressor P53. Biochem. Biofys. Res. Commun. 2007, 358, 181–188. [CrossRef] [PubMed]
43. Bra, L.; Dimri, fastlege; Campisi, J.; Chen, KY Regulering av dihydrofolatreduktasegenekspresjon og E2F-komponenter i humane diploide fibroblaster under vekst og alderdom. J. Cell Physiol. 1996, 168, 580–588. [CrossRef]
44. Demichev, V.; Messner, CB; Vernardis, SI; Lilley, KS; Ralser, M. DIA-NN: Nevrale nettverk og interferenskorrigering muliggjør dyp proteomdekning med høy gjennomstrømning. Nat. Metoder 2020, 17, 41–44. [CrossRef]
45. Tyanova, S.; Temu, T.; Sinitcyn, P.; Carlson, A.; Hein, MIN; Geiger, T.; Mann, M.; Cox, J. Perseus beregningsplattform for omfattende analyse av (Prote)Omics-data. Nat. Metoder 2016, 13, 731–740. [CrossRef]
46. Benjamini, Y.; Hochberg, Y. Controlling the False Discovery Rate: A Practical and Powerful Approach to Multiple Testing. JR Stat. Soc. Ser. B (Metodol.) 1995, 57, 289–300. [CrossRef]
47. Perez-Riverol, Y.; Bai, J.; Bandla, C.; García-Seisdedos, D.; Hewapathirana, S.; Kamatchinathan, S.; Kundu, DJ; Prakash, A.; Frericks-Zipper, A.; Eisenacher, M.; et al. PRIDE-databaseressursene i 2022: A Hub for Mass Spectrometry-Based Proteomics Evidences. Nucleic Acids Res. 2021, 50, D543–D552. [CrossRef]
【For mer informasjon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】
